Name: vibratome sectioning for enhanced preservation of the cytoarchitecture of the mammalian organ of corti
Uploaded: 2011-06-17T13:00:00
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El autor desea reconocer el uso del núcleo de la Infancia del Instituto de Investigación de imágenes para la microscopía confocal y el Dr. Jian Zhang a la sugerencia de montar secciones usando perlas de agarosa. Este trabajo fue financiado por el NIH subvención DC010387.

1. El aislamiento y la fijación de oído interno <ol><li> Para el análisis de los patrones celulares en el órgano de Corti, la eutanasia adecuadamente organizado de embriones o de adultos. </li><li> Diseccionar la cápsula ótica, que contiene el oído interno membranosa. En el ratón, esto se puede hacer fácilmente en embriones a embriones (E) 14,5 días de edad, en el que E0.5 es el día en que se detectó un tapón vaginal. La disección de la cápsula ótica se lleva a cabo por primera vez por la decapitación...

<ol>
	<li>Lim, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+structure+of+the+organ+of+Corti:+a+review.">Functional structure of the organ of Corti: a review.</a> Hear Res. 22, 117-146 (1986).</li><li>Raphael, Y., Altschuler, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+innervation+of+the+cochlea.">Structure and innervation of the cochlea.</a> Brain Res Bull. 60, 397-422 (2003).</li><li>Chung, W. S., Shin, C. H., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmp2+signaling+regulates+the+hepatic+versus+pancreatic+fate+decision.">Bmp2 signaling regulates the hepatic versus pancreatic fate decision.</a> Dev Cell. 15, 738-748 (2008).</li><li>Sun, X., Mariani, F. V., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+FGF+signalling+from+the+apical+ectodermal+ridge+in+limb+development.">Functions of FGF signalling from the apical ectodermal ridge in limb development.</a> Nature. 418, 501-508 (2002).</li><li>Trinh, L. A., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+regulates+epithelial+organization+during+myocardial+migration+in+zebrafish.">Fibronectin regulates epithelial organization during myocardial migration in zebrafish.</a> Dev Cell. 6, 371-382 (2004).</li><li>Yin, C., Kikuchi, K., Hochgreb, T., Poss, K. D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hand2+regulates+extracellular+matrix+remodeling+essential+for+gut-looping+morphogenesis+in+zebrafish.">Hand2 regulates extracellular matrix remodeling essential for gut-looping morphogenesis in zebrafish.</a> Dev Cell. 18, 973-984 (2010).</li><li>Shim, K., Minowada, G., Coling, D. E., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sprouty2,+a+mouse+deafness+gene,+regulates+cell+fate+decisions+in+the+auditory+sensory+epithelium+by+antagonizing+FGF+signaling.">Sprouty2, a mouse deafness gene, regulates cell fate decisions in the auditory sensory epithelium by antagonizing FGF signaling.</a> Dev Cell. 8, 553-564 (2005).</li></ol>

El procedimiento de corte vibratome, seguido de imágenes de inmunohistoquímica y confocal permite la visualización del órgano de Corti con el mínimo daño a los tejidos. Claramente, las imágenes tomadas de la región confocal interna en la sección vibratome muestran una excelente conservación de la morfología celular que sólo está limitado por artificios de fijación. Confocal de imágenes tomadas cerca de las dos superficies de corte de una sección vibratome son a menudo indistinguibles de las imágenes de ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Leica VT1000S vibrante hoja microtomo </td><td> Leica </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Zeiss LSM510 microscopio láser confocal de barrido </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Estudiantes Dumont # 5 Pinzas </td><td> Herramientas de Bellas Ciencia </td><td> 91150-20 </td><td></td></tr><tr><td> UltraPure bajo punto de fusión de agarosa </td><td> Invitrogen </td><td> 16520-050 </td><td></td></tr><tr><td> Pele-A-Way incorporación de molde </td><td> Polysciences </td><td> 18986 o 18646A </td><td></td></tr><tr><td> albúmina de suero bovino </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 001-000-162 </td><td></td></tr><tr><td> De suero de cabra </td><td> Invitrogen </td><td> 16210-064 </td><td></td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 568 cabra anti-conejo IgG </td><td> Invitrogen </td><td> A-11036 </td><td> Dilución 1:1000 </td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> Vector de Laboratorios </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> YO-PRO-1 </td><td> Invitrogen </td><td> Y3603 </td><td></td></tr><tr><td> grasa de vacío </td><td> Pescador </td><td> S41718 </td><td></td></tr><tr><td> Affi-Gel Gel Azul </td><td> Bio-Rad </td><td> 153-7301 </td><td></td></tr></tbody></table>

vibratome sectioning for enhanced preservation of the cytoarchitecture of the mammalian organ of corti

El órgano de Corti de mamíferos es un mosaico muy ordenado celular de pelo mechanosensory y apoyo a las células sensoriales (Revisado en 1,2). La visualización de este mosaico celular a menudo requiere que el órgano de Corti es seccionado. En particular, el pilar sensoriales y las células de Deiters, cuyos núcleos se encuentran basalmente con respecto a las células del cabello, no pueden ser visualizados sin cruz-seccionar el órgano de Corti. Sin embargo, la delicada citoarquitectura del órgano de Corti de mamíferos, incluyendo los procesos citoplásmicos bien de la columna y las células de Deiters, es difícil de mantener por los procedimientos de rutina histológica como la parafina y la crio-corte, que son compatibles con las técnicas estándar de tinción inmunohistoquímica. Aquí describo un procedimiento simple y robusto, que consiste en seccionar vibratome de la cóclea, la tinción inmunohistoquímica de estas secciones vibratome en el monte entero, seguido por microscopía confocal. Este procedimiento se ha utilizado ampliamente para el análisis immunhistochemical de múltiples órganos, incluyendo la yema del miembro del ratón, pez cebra intestino, el hígado, el páncreas y el corazón (ver 3.6 para algunos ejemplos). Además, este procedimiento fue exitoso para ambas imágenes y quantitificaton del pilar número de células mutantes en los órganos de control y de Corti, tanto en embriones de ratones adultos y 7. Este método, sin embargo, actualmente no se utiliza ampliamente para examinar el órgano de Corti mamíferos. El potencial de este procedimiento tanto para proporcionar una mayor preservación de la citoarquitectura fino del órgano de Corti para adultos y permiten la cuantificación de los diversos tipos de células se describe.

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Vibratome Sectioning for Enhanced Preservation of the Cytoarchitecture of the Mammalian Organ of Corti

Un procedimiento simple de vibratome seccionar el órgano de Corti, seguido por microscopía confocal de inmunohistoquímica y se describe. Este procedimiento permite una mejor conservación de la citoarquitectura fino del órgano de Corti de mamíferos, y por lo tanto permite la cuantificación exacta de los tipos de células.

Vibratome seccionamiento para la Preservación de Mejora de la citoarquitectura del órgano de Corti mamíferos

The mammalian organ of Corti is a highly ordered cellular mosaic of mechanosensory hair and nonsensory supporting cells (reviewed in 1,2).Visualization of ...

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