Name: vibratome sectioning for enhanced preservation of the cytoarchitecture of the mammalian organ of corti
Uploaded: 2011-06-17T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Vibratome Sectioning for Enhanced Preservation of the Cytoarchitecture of the Mammalian Organ of Corti at JoVE.com

Författaren vill tacka för användning av Barnens Forskningsinstitut Imaging Core för konfokalmikroskopi och Dr Jian Zhang för förslaget att montera delar med agaros pärlor. Detta arbete har finansierats av NIH bidrag DC010387.

1. Isolering och fixering av inre öron <ol><li> För analys av cellulära mönster i det organ i Corti, iscensatt euthanize lämpligt embryon eller vuxna. </li><li> Dissekera ut öron kapseln, som innehåller membranös innerörat. Hos mus, kan detta lätt göras på embryon i embryonala (E) dag 14,5 och äldre, där E0.5 är den dag då en vaginal plugg upptäcktes. Dissekering av öron kapseln sker först genom halshuggning och öppning av skallen vid mittlinjen. Ta bort hjärnan för att exponera varje öra (bild ...

<ol>
	<li>Lim, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+structure+of+the+organ+of+Corti:+a+review.">Functional structure of the organ of Corti: a review.</a> Hear Res. 22, 117-146 (1986).</li><li>Raphael, Y., Altschuler, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+innervation+of+the+cochlea.">Structure and innervation of the cochlea.</a> Brain Res Bull. 60, 397-422 (2003).</li><li>Chung, W. S., Shin, C. H., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bmp2+signaling+regulates+the+hepatic+versus+pancreatic+fate+decision.">Bmp2 signaling regulates the hepatic versus pancreatic fate decision.</a> Dev Cell. 15, 738-748 (2008).</li><li>Sun, X., Mariani, F. V., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functions+of+FGF+signalling+from+the+apical+ectodermal+ridge+in+limb+development.">Functions of FGF signalling from the apical ectodermal ridge in limb development.</a> Nature. 418, 501-508 (2002).</li><li>Trinh, L. A., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibronectin+regulates+epithelial+organization+during+myocardial+migration+in+zebrafish.">Fibronectin regulates epithelial organization during myocardial migration in zebrafish.</a> Dev Cell. 6, 371-382 (2004).</li><li>Yin, C., Kikuchi, K., Hochgreb, T., Poss, K. D., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hand2+regulates+extracellular+matrix+remodeling+essential+for+gut-looping+morphogenesis+in+zebrafish.">Hand2 regulates extracellular matrix remodeling essential for gut-looping morphogenesis in zebrafish.</a> Dev Cell. 18, 973-984 (2010).</li><li>Shim, K., Minowada, G., Coling, D. E., Martin, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sprouty2,+a+mouse+deafness+gene,+regulates+cell+fate+decisions+in+the+auditory+sensory+epithelium+by+antagonizing+FGF+signaling.">Sprouty2, a mouse deafness gene, regulates cell fate decisions in the auditory sensory epithelium by antagonizing FGF signaling.</a> Dev Cell. 8, 553-564 (2005).</li></ol>

Förfarandet för vibratome snittning, följt av immunohistokemi och konfokala bildhantering möjliggör visualisering av organ Corti med minimal vävnadsskada. Klart, konfokal bilder tagna från interna regioner i vibratome avsnitt visar utmärkt bevarandet av cellulära morfologi som begränsas endast av fixering artefakter. Konfokala bilder som tas nära två cut-ytor av en vibratome avsnitt är ofta omöjlig att skilja från bilder från interna regioner, även om enstaka cellulära störningar, exempelvis avbrott i...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer (frivilligt) </th></tr><tr><td> Leica VT1000S Vibrerande Blade mikrotom </td><td> Leica </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Zeiss LSM510 laserskanning konfokalmikroskop </td><td> Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Student Dumont # 5 Tång </td><td> Fine Science Tools </td><td> 91.150-20 </td><td></td></tr><tr><td> Ultrarent låg smältpunkt Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 16520-050 </td><td></td></tr><tr><td> Peel-A-Way inbäddning mögel </td><td> Polysciences </td><td> 18.986 eller 18646A </td><td></td></tr><tr><td> bovint serumalbumin </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 001-000-162 </td><td></td></tr><tr><td> Goat Serum </td><td> Invitrogen </td><td> 16210-064 </td><td></td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 568 get-anti-kanin IgG </td><td> Invitrogen </td><td> A-11.036 </td><td> 1:1000 utspädning </td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> Vector Labs </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> YO-PRO-1 </td><td> Invitrogen </td><td> Y3603 </td><td></td></tr><tr><td> vakuum fett </td><td> Fisher </td><td> S41718 </td><td></td></tr><tr><td> Affi-Gel Blå Gel </td><td> Bio-Rad </td><td> 153-7301 </td><td></td></tr></tbody></table>

vibratome sectioning for enhanced preservation of the cytoarchitecture of the mammalian organ of corti

Den däggdjur organ Corti är en mycket beställde cellulär mosaik av mechanosensory hår och nonsensory stödja celler (Över 1,2). Visning av denna cellulära mosaik kräver ofta att organ Corti är cross-delad. I synnerhet kan nonsensory pelaren och Deiters &quot;celler, vars kärnor är belägna basally med avseende på hårcellerna, inte visualiseras utan tvärsnitt av organ Corti. Dock är den känsliga cytoarchitecture av däggdjur organ Corti, inklusive den fina cytoplasmiska processer pelaren och Deiters &quot;celler, svåra att bevara genom rutinmässig histologisk förfaranden som paraffin och Cryo-sektionering, som är kompatibla med standard immunhistokemisk färgning tekniker. Här beskriver jag en enkel och robust som består av vibratome sektionering av snäckan, immunhistokemisk färgning av dessa vibratome avsnitt i hela berget, följt av konfokalmikroskopiska. Detta förfarande har använts i stor utsträckning för immunhistochemical analys av flera organ, inklusive musen lem knoppen, zebrafisk tarmar, lever, bukspottkörtel och hjärta (se 3-6 för utvalda exempel). Dessutom var detta förfarande framgångsrik för både imaging och quantitificaton av pelare cell nummer i mutant och kontroll organ Corti både embryon och vuxna möss 7. Denna metod är dock för närvarande inte så vanligt att undersöka däggdjur organ Corti. Potentialen för detta förfarande för att både ge ökad bevara den fina cytoarchitecture av den vuxna organ Corti och möjliggöra kvantifiering av olika celltyper beskrivs.

Watch this Scientific Journal Video about Vibratome Sectioning for Enhanced Preservation of the Cytoarchitecture of the Mammalian Organ of Corti at JoVE.com

Vibratome Sectioning for Enhanced Preservation of the Cytoarchitecture of the Mammalian Organ of Corti

Ett enkelt förfarande vibratome sektionering organ för Corti, följt av immunohistokemi och konfokalmikroskopi beskrivs. Detta förfarande möjliggör bättre bevara den fina cytoarchitecture av däggdjur organ Corti, och därmed tillåter en exakt kvantifiering av celltyper.

Vibratome Sektionering för förbättrade Bevarande av Cytoarchitecture av Mammalian organ Corti

The mammalian organ of Corti is a highly ordered cellular mosaic of mechanosensory hair and nonsensory supporting cells (reviewed in 1,2).Visualization of ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS

Metoder för experimentell manipulationer efter Optic Nerve transection i Mammalian CNS

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. The optic nerve can be ...

Imaging Neuronal Responses in Slice Preparations of Vomeronasal Organ Expressing a Genetically Encoded Calcium Sensor

Imaging Neuronal svar i Slice Beredningar av vomeronasala Orgel uttrycker en genetiskt kodade Kalcium Sensor

The vomeronasal organ (VNO) detects chemosensory signals that carry information about the social, sexual and reproductive status of the individuals within ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualisering av proprioceptorer i<em&gt; Drosophila</em&gt; Larver och puppor

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex Vivo Preparations of the Intact Vomeronasal Organ and Accessory Olfactory Bulb

Ex vivo Beredningar av den Intakt vomeronasala orgel och tillbehör luktbulben

The mouse accessory olfactory system (AOS) is a specialized sensory pathway for detecting nonvolatile social odors, pheromones, and kairomones. The first ...

Vibratome Sectioning Mouse Retina to Prepare Photoreceptor Cultures

Vibratome Sektione mus Retina man förbereder ljusmätare kulturer

The retina is a part of the central nervous system that has organized architecture, with neurons in layers from the photoreceptors, both rods and cones in ...

In-depth Physiological Analysis of Defined Cell Populations in Acute Tissue Slices of the Mouse Vomeronasal Organ

Djupgående fysiologisk analys av Bestämda cellpopulationer i akut vävnadssnitt av Mouse Vomeronasalorganet

In most mammals, the vomeronasal organ (VNO) is a chemosensory structure that detects both hetero- and conspecific social cues. Vomeronasal sensory ...

Visualization of Cortical Modules in Flattened Mammalian Cortices

Visualisering av kortikala moduler i tillplattad däggdjur Cortices

The cortex of mammalian brains is parcellated into distinct substructures or modules. Cortical modules typically lie parallel to the cortical sheet, and ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

En volymetrisk metod för kvantifiering av Cerebral Vasospasm i en murin modell av subarachnoidalblödning

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Investigating Mammalian Axon Regeneration: In Vivo Electroporation of Adult Mouse Dorsal Root Ganglion

Utredande däggdjur Axon regenerering: In Vivo elektroporation av vuxen mus dorsalrotsganglier Ganglion

Electroporation is an essential non-viral gene transfection approach to introduce DNA plasmids or small RNA molecules into cells. A sensory neuron in the ...

The Cutting and Floating Method for Paraffin-embedded Tissue for Sectioning

Styckning och flytande metod för Paraffin-inbäddat vävnad för snittning

Sectioning of the paraffin-embedded tissue is widely used in histology and pathology. However, it is tedious. To improve this method, several commercial ...