Name: chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury
Uploaded: 2011-07-20T12:00:00
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हम Andrea Tedeschi ठीक धुन चिप के लिए शर्तों के लिए अपने योगदान के लिए प्रयोगशाला और Ricco Lindner में प्रारंभिक चिप प्रयोगों की स्थापना में मदद के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं. इस काम Hertie फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया था, फॉर्च्यून अनुदान, विश्वविद्यालय Tuebingen, और DFG डि 1497/1-1 अनुदान (सभी सिमोन डि Giovanni के लिए दी गई).

1. Sciatic और पृष्ठीय स्तंभ तंत्रिका चोट <ol><li> पशु शल्य तौलिया पर रखा गया है और इसे नीचे एक thermopad प्रक्रिया भर में मौजूद है 37 पर माउस के शरीर का तापमान रखने डिग्री सेल्सियस सभी जानवरों की एक सतत / isoflurane हे 2 प्रशा?...

<ol>
	<li>Beirowski, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+analysis+of+Wallerian+degeneration+using+restricted+axonal+labelling+in+YFP-H+mice.">Quantitative and qualitative analysis of Wallerian degeneration using restricted axonal labelling in YFP-H mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 134, 23-35 (2004).</li><li>Carey, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Chromatin immunoprecipitation (ChIP). , (2009).</li><li>Dahl, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rapid+micro+chromatin+immunoprecipitation+assay+(&amp;mu;ChIP.">A rapid micro chromatin immunoprecipitation assay (&amp;mu;ChIP.</a> Nat. Protoc. 3, 1032-1045 (2008).</li><li>Haring, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chromatin+immunoprecipitation:+optimization,+quantitative+analysis+and+data+normalization.+Plant+Methods.">Chromatin immunoprecipitation: optimization, quantitative analysis and data normalization. Plant Methods.</a> 11, 3-11 (2007).</li><li>Jiang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neuronal+chromatin+from+brain+tissue.">Isolation of neuronal chromatin from brain tissue.</a> BMC Neurosci. 9, 42-42 (2008).</li><li>Lee, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+neural+stem+cells+from+the+postnatal+cerebellum.">Isolation of neural stem cells from the postnatal cerebellum.</a> Nat Neurosci. 8, 723-729 (2005).</li><li>Makwana, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+in+successful+peripheral+regeneration.">Molecular mechanisms in successful peripheral regeneration.</a> Febs J. 272, 2628-2638 (2005).</li><li>Tedeschi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+p53-CBP/p300+transcription+module+is+required+for+GAP-43+expression,+axon+outgrowth,+and+regeneration.">A p53-CBP/p300 transcription module is required for GAP-43 expression, axon outgrowth, and regeneration.</a> Cell Death and Differentiation. 16, 543-554 (2009).</li><li>Teng, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axonal+regeneration+in+adult+CNS+neurons--signaling+molecules+and+pathways.">Axonal regeneration in adult CNS neurons--signaling molecules and pathways.</a> J Neurochem. 96, 1501-1508 (2006).</li></ol>

इस प्रोटोकॉल के लिए सीधे axonal चोट के बाद वयस्क तंत्रिका तंत्र में axonal उत्थान के दौरान chromatin वातावरण के बारे में पूछने के लिए एक तरीका प्रदान करता है. यह chromatin immunoprecipitation साथ DRG चोट मॉडल शामिल transcriptional और epigenetic चोट के बाद ?...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th></tr><tr><td> 10x चिप बफर </td><td> सेल संकेतन </td><td> 7008 </td></tr><tr><td> 2x चिप Elution बफर </td><td> सेल संकेतन </td><td> 7009 </td></tr><tr><td> चिप ग्रेड प्रोटीन जी चुंबकीय मोती </td><td> सेल संकेतन </td><td> 9006 </td></tr><tr><td> मैग्ना पकड़ रैक (8 अच्छी तरह से) </td><td> Millipore </td><td> 20-400 </td></tr><tr><td> क्लोरोफार्म </td><td> MERCK </td><td> 1888 संयुक्त राष्ट्र </td></tr><tr><td> 37% Formaldehyde </td><td> ROTH </td><td> CP10.1 </td></tr><tr><td> 10x Glycine समाधान </td><td> सेल संकेतन </td><td> 7005 </td></tr><tr><td> Glycogen </td><td> सिग्मा </td><td> G1767 </td></tr><tr><td> 10x HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14185 </td></tr><tr><td> Histone H3 एंटीबॉडी (खरगोश) </td><td> सेल संकेतन </td><td> 2650 </td></tr><tr><td> सामान्य खरगोश आईजीजी </td><td> सेल संकेतन </td><td> 2729 </td></tr><tr><td> Phenol / / क्लोरोफॉर्म Isoamyl शराब </td><td> ROTH </td><td> A156.1 </td></tr><tr><td> Protease inhibitors कॉकटेल गोलियाँ </td><td> रॉश </td><td> 04 116 001 693 </td></tr><tr><td> Proteinase कश्मीर (20 मिलीग्राम / एमएल) </td><td> सेल संकेतन </td><td> 10012 </td></tr><tr><td> एसडीएस lysis बफर </td><td> Upstate </td><td> 20-163 </td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><th> उपकरण की जरूरत है </th></tr><tr><td> Sonicator </td></tr><tr><td> Micropestle </td></tr><tr><td> Microcentrifuge </td></tr><tr><td> Thermomixer </td></tr></tbody></table>

chromatin immunoprecipitation from dorsal root ganglia tissue following axonal injury

केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (CNS) में axons जबकि परिधीय तंत्रिका तंत्र (पीएन) में उन चोट के बाद एक सीमित हद तक (टेंग एट अल., 2006) को पुनर्जीवित करते नहीं पुनर्जीवित करते हैं . यह मान्यता है कि transcriptional neurite और axonal परिणाम के लिए आवश्यक कार्यक्रमों पीएन (Makwana एट अल., 2005) में चोट पर फिर सक्रिय कर रहे हैं. हालांकि vivo में neuronal जीन विनियमन का विश्लेषण करने के लिए उपलब्ध उपकरणों सीमित है और अक्सर चुनौतीपूर्ण हैं. पृष्ठीय रूट ganglia (DRG) एक उत्कृष्ट चोट मॉडल प्रणाली प्रदान करते हैं क्योंकि दोनों सीएनएस और पीएन एक बंटवारा ही सोम से उद्भव अक्षतंतु द्वारा innervated हैं. ganglia सेल शरीर में जहां सभी transcriptional घटनाओं होते की एक असतत संग्रह का प्रतिनिधित्व करते हैं, और इस तरह transcriptional गतिविधि का एक स्पष्ट रूप से परिभाषित क्षेत्र है कि आसानी से और reproducibly जानवर से हटाया जा सकता है प्रदान करते हैं. पीएन (जैसे sciatic तंत्रिका), जहां axonal उत्थान होती है में तंत्रिका तंतुओं की चोट transcriptional कार्यक्रमों का एक सेट है कि CNS में एक इसी तरह की चोट के जवाब उन जहां उत्थान जगह (जैसे रीढ़ की हड्डी नहीं ले करता है से अलग कर रहे हैं प्रकट करना चाहिए ). प्रतिलेखन कारक बंधनकारी, histone और डीएनए की चोट से या तो पीएन या सीएनएस के परिणामस्वरूप संशोधन के लिए साइटें chromatin immunoprecipitation (चिप) का उपयोग लक्षण वर्णन किया जा सकता है. यहाँ, हम एक चिप axonal चोट के बाद तय माउस DRG ऊतक का उपयोग प्रोटोकॉल का वर्णन. इस शक्तिशाली संयोजन समर्थक उत्थान chromatin axonal उत्थान को बढ़ावा देने के लिए आवश्यक वातावरण निस्र्पक के लिए एक साधन प्रदान करता है.

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Chromatin Immunoprecipitation from Dorsal Root Ganglia Tissue following Axonal Injury

हम axonal चोट के बाद पृष्ठीय रूट ganglia ऊतक से chromatin immunoprecipitation के लिए एक विधि उपस्थित थे. दृष्टिकोण के विशिष्ट प्रतिलेखन कारक बाध्यकारी साइटों और दोनों परिधीय और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में घायल axons के उत्थान के लिए histone और महत्वपूर्ण डीएनए की epigenetic संशोधन की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

Chromatin पृष्ठीय रूट ganglia ऊतक से axonal चोट के बाद immunoprecipitation

Axons in the central nervous system (CNS) do not regenerate while those in the peripheral nervous system (PNS) do regenerate 
to a limited extent after ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Rhizotomy बाद पृष्ठीय रूट axons की लाइव इमेजिंग

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

Intravital Imaging of Axonal Interactions with Microglia and Macrophages in a Mouse Dorsal Column Crush Injury

एक माउस पृष्ठीय कॉलम कुचलने चोट में Microglia और मैक्रोफेज साथ Axonal सहभागिता की intravital इमेजिंग

Traumatic spinal cord injury causes an inflammatory reaction involving blood-derived macrophages and central nervous system (CNS)-resident microglia. ...

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

Dorsal Root Ganglia Neurons and Differentiated Adipose-derived Stem Cells: An In Vitro Co-culture Model to Study Peripheral Nerve Regeneration

रूट ganglia न्यूरॉन्स और विभेदित वसा व्युत्पन्न स्टेम सेल पृष्ठीय: एक<em&gt; इन विट्रो</em&gt; सह संस्कृति मॉडल परिधीय तंत्रिका पुनर्जनन अध्ययन करने के लिए

Dorsal root ganglia (DRG) neurons, located in the intervertebral foramina of the spinal column, can be used to create an in vitro system facilitating the ...

Hydraulic Extrusion of the Spinal Cord and Isolation of Dorsal Root Ganglia in Rodents

चूहे में रीढ़ की हड्डी और पृष्ठीय रूट ganglia के अलगाव की हाइड्रोलिक बाहर निकालना

Traditionally, the spinal cord is isolated by laminectomy, i.e. by breaking open the spinal vertebrae one at a time. This is both time consuming and may ...

Dorsal Root Ganglion Injection and Dorsal Root Crush Injury as a Model for Sensory Axon Regeneration

पृष्ठीय रूट नाड़ीग्रन्थि इंजेक्शन और पृष्ठीय रूट संवेदी अक्षतंतु उत्थान के लिए एक मॉडल के रूप में चोट क्रश

Achieving axon regeneration after nervous system injury is a challenging task. As different parts of the central nervous system (CNS) differ from each ...

Dorsal Root Ganglia Isolation and Primary Culture to Study Neurotransmitter Release

पृष्ठीय रूट गैंग्लिया अलगाव और प्राथमिक संस्कृति न्यूरोट्रांसमीटर रिहाई का अध्ययन करने के लिए

Dorsal root ganglia (DRG) contain cell bodies of sensory neurons. This type of neuron is pseudo-unipolar, with two axons that innervate peripheral ...

Optimization of Laser-Capture Microdissection for the Isolation of Enteric Ganglia from Fresh-Frozen Human Tissue

लेजर के अनुकूलन-कब्जा Microdissection के अलगाव के लिए प्रवेश गैंग्लिया से ताजा-जमे हुए मानव ऊतक

The purpose of this method is to obtain high-integrity RNA samples from enteric ganglia collected from unfixed, freshly-resected human intestinal tissue ...

Rapid Isolation of Dorsal Root Ganglion Macrophages

डोर्सल रूट गंडिका मैक्रोफेज का तेजी से अलगाव

There are growing interests to study the molecular and cellular interactions among immune cells and sensory neurons in the dorsal root ganglia after ...

Purification of Fibroblasts and Schwann Cells from Sensory and Motor Nerves in Vitro

विट्रो में संवेदी और मोटर नसों से फाइब्रोब्लास्ट और श्वार्न कोशिकाओं का शुद्धिकरण

The principal cells in the peripheral nervous system are the Schwann cells (SCs) and the fibroblasts. Both these cells distinctly express the sensory and ...

Enrichment of Adult Mouse Dorsal Root Ganglia Neuron Cultures by Immunopanning

इम्यूनोपैनिंग द्वारा वयस्क माउस पृष्ठीय रूट गैन्ग्लिया न्यूरॉन संस्कृतियों का संवर्धन

Dorsal root ganglia (DRGs) are peripheral structures adjacent to the dorsal horn of the spinal cord, which house the cell bodies of sensory neurons as ...