Name: evaluation of nanoparticle uptake in tumors in real time using intravital imaging
Uploaded: 2011-06-21T13:00:00
Duration: 8 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging at JoVE.com

Это исследование было поддержано CCSRI Грант № 700537 и CIHR Грант № 84535 на ЛЗЕ и NIH / NCI грант № CA120711-01A1 и 01A1-CA120711 на AZ. Все эксперименты проводились в соответствии с правилами и руководящими принципами институциональной уходу и использованию животных комитета в Университете Калифорнии в Сан-Диего, уходу за животными и использование в Университете Западного Онтарио.

1. Прививка от опухоли в CAM птичьего эмбриона <ol><li> Подготовка оболочки менее оплодотворенных эмбрионов куриных, как описано 8. </li><li> На 9-й день эмбрионального развития, собрать микро-инжектор использованием 18-иглы подключены на 1 мл шприца. Вырезать 5-6 дюймов кусок Tygon трубки (1 / 32 &quot;внутренний диаметр, 3 / 32&quot; наружный диаметр, 1 / 32 &quot;толщина стенки) и аккуратно вставьте скос иглы в трубку. Примерно 4-5 дюймов трубки должны простираются от кончика иглы (рис. 1а). </li><li> Заполните шприц и трубку с клеточной суспензии. Затем вставьте иглу микроинъекции стекла в конце трубы и тщательно удалить пузырьки воздуха. </li><li> Inject День 9 эмбрионов (рис. 1б) при вскрытии прицел с подсветкой с 10000-100000 раковые клетки в виде болюса в течение CAM (рис. 1в). Медленно вводить клетки и тщательно обеспечить, чтобы игла находится в правильном месте для клеток для формирования видимых болюсно в CAM. Клетки, которые капать на поверхность CAM можно чистить с помощью Kimwipe или других аппликатора. </li><li> Вернуться эмбрионов увлажненный инкубаторе при температуре 38 ° С при влажности 60% и позволяет опухоли расти и vascularize (до 7 дней). </li></ol> 2. Подготовка наночастиц <ol><li> Для подготовки флуоресцентно меченных CPMV наночастиц для введения в куриный эмбрион, разбавленный вирусных наночастиц (синтезируется как в 8 в PBS, рН 7,4, до концентрации 100 мкг / мл смеси Vortex задолго до того, использование и центрифуги в течение одной минуты, чтобы удалить. агрегатов. ультразвука также может быть полезна в зависимости от конъюгатов и степени агрегации. Запасы флуоресцентно меченных CPMVs стабильны в течение не менее 1 года при условии хранения при 4 ° С в темноте. Проверьте запасы периодически, поставив пару капель на предметное стекло и проверка флуоресценции. просвечивающей электронной микроскопии (ПЭМ) также может быть использован для определения того, частицы остались нетронутыми после сопряжения. </li><li> Короче говоря, один микрограмм вирусных наночастиц (в конечном объеме 2 мкл) могут быть добавлены к медным покрытием сетки. Затем добавьте равный объем 2% уранилацетата в течение 1 минуты на электронном микроскопе (Philips EM 410). </li></ol> 3. Внутривенное введение флуоресцентно меченных вирусных наночастиц <ol><li> На 16 день, сборки микро-инжектор, как описано выше. Составление требуемого объема вирусных наночастиц через шланг в шприц (&gt; 200 мкл). Осторожно удалите воздушные пузырьки. Вставьте иглу микроинъекции стекла в конце трубы. Убедитесь, что игла тех пор, и конические, насколько возможно (рис. 2а). Если игла слишком тупой, он не сможет проникнуть через эктодермы и не сможет проникнуть в судно. Если игла слишком острым, кончик рухнет, когда проникающая ткани. </li><li> Внутривенно вводят по 100 мкл 1 мг / мл флуоресцеина декстрана (70000 МВт Да, Invitrogen) в опухоли эмбриона подшипников дистальнее нужный сайт для визуализации (рис. 3). Успешная катетеризация вены CAM видно по очистке крови в пути инъекции потока (рис. 2б). Оценка сосудистой утечки через 1 час после инъекции. </li><li> Внутривенно вводят 50 мкл 1 мг / мл раствора CPMV-Alexa Fluor 647 (CPMV-AF 647) или пегилированного CPMV-Alexa Fluor 647 (CPMV-ПЭГ-AF 647) в эмбрионы содержащие опухоли с сосудистой утечки дистальных от желаемого сайта быть визуализированы. </li><li> Изображение опухоли сразу и каждый час после инъекции использованием Zeiss Ревизора Z1 прямой микроскоп оснащен диском Yokogawa спиннинг, Хамамацу ImagEM 9100-12 EM-CCD камерой. </li></ol> 4. В реальном времени прижизненной визуализации <ol><li> Чтобы собрать блок эмбриона изображений, нанесите тонкий слой вакуумной смазки по окружности изображений порта на нижней крышке устройства визуализации эмбриона, и соответствовать 18 мм стекло покровное на порт. </li><li> Позиция эмбриона, что покровное будет охватывать требуемую область для работы с изображениями. Медленно опустите крышку, пока покровное просто вступает в контакт с эмбриона, а затем винтовой крышкой на единицу, чтобы удерживать его на месте (рис. 2). </li><li> Добавить воды, нагретой до 37 ° С в блок визуализации эмбриона вне блюдо с эмбриона, а затем поместить весь блок на сцену вертикально конфокальной микроскопии с внутренней экологической камеры доведены до 37 ° C. </li><li> Установите копи содержащие эмбриона под вращающийся диск конфокальной микроскопии флуоресценции (рис. 2е). Копи проведет эмбриона на месте и держать в поле зрения фиксированной во время захвата изображения, позволяющий как для трехмерных стеков Z и покадровой изображения, которые будут захвачены в плен. Мы приобретаем и анализа трехмерных покадровой изображения с помощью Перкин Элмер (ранее импровизация) Volocity пакет программного обеспечения (рис. 3а). Приобретать высоким разрешением трехмерные стопки опухоли и окружающих сосудистой визуализировать detaileг структурного анализа в определенных временных точках. Приобретать трехмерных стеков в основное время, указывает на карте подробные структурные изменения в сосудистую сеть опухоли. Изображение опухоли каждый час после инъекции. </li><li> Количественного поглощения вирусных наночастиц рассчитать среднее Alexa Fluor (AF) 647 сигнала в отдельных регионах в опухоли или в строме (неопухолевой область) с использованием образа программного обеспечения, таких как количественный Volocity (Perkin Elmer). Опухоли стромы соотношение было рассчитывается путем деления средней AF 647 сигнал в опухоли на длине AF 647 сигналов в строму. Опухоль / стромы соотношение выше, чем 1 указывает, что наночастицы, рассматриваемых опухоли. </li></ol> 5. Представитель результаты: В примере, описанном здесь, мы вводили HT-29 клетки рака толстой кишки в форме болюса примерно 1 мм размера в течение CAM дня 9 куриных эмбрионов (рис. 1b). После прививки, эмбрионы культивировали в течение 7 дней в увлажненном инкубаторе разрешить достаточный рост опухоли и васкуляризации (рис. 1в). Эмбрионы вводили внутривенно с низким молекулярным весом декстран для подтверждения васкуляризации опухоли и опухоли были визуализированы под Zeiss AxioExaminer Z1 прямой микроскоп (рис. 2г). После внутривенного введения CPMV-AF 647 или CPMV-ПЭГ-AF 647 наночастиц (рис. 3а, б) высокого разрешения в режиме реального времени конфокальной микроскопии (рис. 2е) показало, что оба CPMV и CPMV-ПЭГ наночастицы быстро помечены всей сосудистой сети, но поглощение CPMV-ПЭГ на опухоль была примерно в 3 раза выше, чем CPMV после 12 часов (рис. 3а). Относительное поглощение наночастиц опухоли определяли с помощью анализа изображений программное обеспечение (Volocity от Perkin Elmer). Интересующие регионы были выбраны в пределах и за пределами опухоли (в стромальных ящиком) и средняя интенсивность флуоресценции каждого был определен. Данные выражается как опухоль / стромы отношение. <img src="/files/ftp_upload/2808/2808fig1.jpg" alt="Рисунок 1"/> Рисунок 1. Микроинъекция опухолей в CAM от птичьего эмбриона. () Микроинъекции аппарат собирается из компонентов, как указано. (Б) Птичий эмбрионов на 9-й день готовы к засевают опухоли, когда CAM распространился, чтобы покрыть всю поверхность. (С) На 16-й день, опухоль вырастет до до 1 см в диаметре (пунктирная линия) и готов к инъекции наночастиц. <img src="/files/ftp_upload/2808/2808fig2.jpg" alt="Рисунок 2"/> Рисунок 2. Инъекции наночастиц и прижизненной визуализации. Инъекция под рассечение микроскопа () кончик иглы microinjector готовы быть введен в вену CAM и (б) иглы microinjector вставляется в вену (указано стрелкой) и наночастиц вводят в кровоток (если смотреть в безналичном крови). (С) изображений единица, содержащая птичьего эмбриона с покровным сопряжены непосредственно с CAM. (Г) До наночастиц инъекции, васкуляризация опухоли оценивается с помощью прижизненного изображения после введения флуоресцеина декстран. (Е) изображений единица, содержащая эмбрион расположен на этапе вертикально конфокальной микроскопии в пределах температуры регулируемой набора корпуса до 37 ° C. <img src="/files/ftp_upload/2808/2808fig3.jpg" alt="Рисунок 3"/> Рисунок 3. Прижизненное визуализации наночастиц в опухолях человека. Опухоли визуализируются 7 часов после инъекции () CPMV-AF647 и (б) CPMV-ПЭГ-AF647. г) Иссечение опухоли от птичьего эмбриона для последующего анализа.

<ol>
	<li>Halin, C., Mora, J. R., Sumen, C., von Andrian, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+lymphocyte+trafficking.">In vivo imaging of lymphocyte trafficking.</a> Annu Rev Cell Dev Biol. 21, 581-603 (2005).</li><li>Judenhofer, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+PET-MRI:+a+new+approach+for+functional+and+morphological+imaging.">Simultaneous PET-MRI: a new approach for functional and morphological imaging.</a> Nat Med. 14, 459-465 (2008).</li><li>Weissleder, R., Pittet, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+in+the+era+of+molecular+oncology.">Imaging in the era of molecular oncology.</a> Nature. 452, 580-589 (2008).</li><li>Chambers, A. F., Ling, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selection+for+experimental+metastatic+ability+of+heterologous+tumor+cells+in+the+chick+embryo+after+DNA-mediated+transfer.">Selection for experimental metastatic ability of heterologous tumor cells in the chick embryo after DNA-mediated transfer.</a> Cancer Res. 44, 3970-3975 (1984).</li><li>Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+and+rat+glioma+growth,+invasion,+and+vascularization+in+a+novel+chick+embryo+brain+tumor+model.">Human and rat glioma growth, invasion, and vascularization in a novel chick embryo brain tumor model.</a> Clin Exp Metastasis. 22, 225-236 (2005).</li><li>Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+inhibition+of+tumor+cell+intravasation+and+subsequent+metastasis+via+regulation+of+in+vivo+tumor+cell+motility+by+the+tetraspanin+CD151.">The inhibition of tumor cell intravasation and subsequent metastasis via regulation of in vivo tumor cell motility by the tetraspanin CD151.</a> Cancer cell. 13, 221-234 (2008).</li><li>Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+nanoparticles+as+tools+for+intravital+vascular+imaging.">Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging.</a> Nature medicine. 12, 354-360 (2006).</li><li>Leong, H. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+embryonic+and+tumor+neovasculature+using+viral+nanoparticles.">Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles.</a> Nature protocols. 5, 1406-1417 (2010).</li><li>Chatterji, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+addresses+on+an+addressable+virus+nanoblock;+uniquely+reactive+Lys+residues+on+cowpea+mosaic+virus.">New addresses on an addressable virus nanoblock; uniquely reactive Lys residues on cowpea mosaic virus.</a> Chemistry &#38; biology. 11, 855-863 (2004).</li><li>Brunel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrazone+ligation+strategy+to+assemble+multifunctional+viral+nanoparticles+for+cell+imaging+and+tumor+targeting.">Hydrazone ligation strategy to assemble multifunctional viral nanoparticles for cell imaging and tumor targeting.</a> Nano letters. 10, 1093-1097 (2010).</li><li>Steinmetz, N. F., Manchester, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PEGylated+viral+nanoparticles+for+biomedicine:+the+impact+of+PEG+chain+length+on+VNP+cell+interactions+in+vitro+and+ex+vivo.">PEGylated viral nanoparticles for biomedicine: the impact of PEG chain length on VNP cell interactions in vitro and ex vivo.</a> Biomacromolecules. 10, 784-792 (2009).</li><li>Steinmetz, N. F., Cho, C. F., Ablack, A., Lewis, J. D., Manchester, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CPMV+nanoparticles+target+surface+vimentin+on+cancer+cells.">CPMV nanoparticles target surface vimentin on cancer cells.</a> Nanomedicine. , (2010).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Chorioallantoic мембраны (CAM) от птичьего эмбриона полезной модели для оценки динамики и сосудистой фармакокинетику опухолей человека. Структура и положение CAM позволяет с высокой приобретение качество изображения и вмещает многих видов рака ксенотрансплантаты без инвазивных хирургических процедур. Более того, ксенотрансплантаты раковой опухоли имплантируются в chorioallantoic мембраны стать васкуляризированной в течение 7 дней, предлагая быстрый, недорогой и полуфабрикатов высокой пропускной средства для оценки накопления наночастиц в опухолевой ткани. Поскольку раковые ксенотрансплантаты имплантированы в CAM оболочки менее куриные эмбрионы были доступны для высокого разрешения оптики вертикально epifluorescence или конфокальной микроскопии, контекстная и временной информации о наночастиц в сосудистую сеть опухоли могут быть легко получены. Рак ксенотрансплантаты в этой модели, как правило, растут с боков через CAM, что приводит к опухоли, которые являются большими, оставаясь при этом менее 200 м в глубину. Это делает их особенно хорошо подходит для прижизненной визуализации потому что стандартные epifluorescence микроскопы могут эффективно проникать всю массу опухоли. В отличие от опухолей, имплантированных в любом поверхностными или ортотопической сайтов внутри мыши размножаются в трех измерениях, что делает ее трудно точно локализовать наночастиц глубоко внутри этих опухолей путем неинвазивных методов. Мы использовали эту модель для оценки поглощения квантовых точек, липосомы и наночастицы оксида железа в число человеческих ксенотрансплантаты опухоли, подчеркивает потенциал для этой модели, чтобы служить для в естественных условиях анализ широкого спектра наночастицы формулировки.

<table border="1"><tbody><tr><th> Реагент Имя / Оборудование </th><th> Компания </th><th> Номер по каталогу </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> Оплодотворенные яйца леггорн </td><td> Фрей `ы рыбоводного завода, г. Санкт-Якобс </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Ротационный инструмент Dremel </td><td> Dremel </td><td></td><td> Может использоваться любой модели </td></tr><tr><td> Dremel отсечки колес нет. 36 </td><td> Dremel </td><td> 409 </td><td></td></tr><tr><td> Спортсмен выводном </td><td> Берри Хилл </td><td> 1550HA </td><td></td></tr><tr><td> Спортсмен инкубатор </td><td> Берри Хилл </td><td> 1502EA </td><td></td></tr><tr><td> Этанол </td><td></td><td></td><td> 70% (об / об) </td></tr><tr><td> Полистирол вес лодки </td><td> VWR </td><td> 12577-01 </td><td></td></tr><tr><td> Площадь чашки Петри </td><td> Simport, VWR </td><td> 25378-115 </td><td></td></tr><tr><td> Rubbermaid резиновый контейнер с крышкой </td><td> Guillevin </td><td> RH3-228-00-BLU </td><td> отверстия, просверленные в стороны </td></tr><tr><td> Вертикальная пипетки съемник </td><td> Дэвид Kopf инструменты </td><td> Модель 720 </td><td> Настройки: 16.3 (обогреватель) и 2.3 (соленоид) </td></tr><tr><td> Натриевоборосиликатных стеклянные капилляры </td><td> Саттер Инструмент </td><td> BF100-58-10 </td><td> (Внешний диаметр 1,0 мм; ID 0,58 мм, 10 см длина) </td></tr><tr><td> 1X Дульбеко изменения Eagle Средняя (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11995073 </td><td></td></tr><tr><td> Дульбеко </td><td> Invitrogen </td><td> 14190250 </td><td> рН 7,4 </td></tr><tr><td> Фосфатно-солевом буфере (D-би-эс) (1X), жидких </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Трипсин, 0,05% (1X) с ЭДТА 4Na, жидких </td><td> Invitrogen </td><td> 25300054 </td><td></td></tr><tr><td> Эмбриональной телячьей сыворотки </td><td> Invitrogen </td><td> 12483-020 </td><td> Тепло инактивировать </td></tr><tr><td> Гемоцитометра </td><td> Хауссер Научные, VWR </td><td> 15170-090 </td><td></td></tr><tr><td> Центрифуга </td><td> Эппендорф модель 5810R </td><td> 5811 000.010 </td><td></td></tr><tr><td> Тонкая точки щипцы </td><td> VWR </td><td> 25607-856 </td><td></td></tr><tr><td> Tygon R-3603 трубы </td><td> VWR </td><td> 63009-983 </td><td> 50 футов (1/32-inch внутренний диаметр, 3/32-inch наружный диаметр, толщина стенки 1/32-inch </td></tr><tr><td> Подкожные иглы для инъекций 18-иглы </td><td> BD </td><td> 305195 </td><td> Комплект из 100 </td></tr><tr><td> 1 мл шприцев для инъекций </td><td> BD </td><td> 309602 </td><td> Комплект из 100 </td></tr><tr><td> Волоконно-оптический микроскоп осветитель </td><td> Amscope </td><td> HL250-AY </td><td> 150W </td></tr><tr><td> kimwipes </td><td> VWR </td><td> 10805-905 </td><td></td></tr><tr><td> В. unguiculata семян (Калифорния черный глаз нет. 5) </td><td> Берпи </td><td> 51771A </td><td></td></tr><tr><td> Крытый огни роста </td><td> SunLite, поставка садовника </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Метил-PEO4-NHS эфир </td><td> Проколоть </td><td> PI22341 </td><td></td></tr><tr><td> MPEG-NHS, ПЭГ сукцинимидил эфир, МВт 2000 </td><td> NANOCS </td><td> PEG1-0002 </td><td></td></tr><tr><td> Alexa Fluor 647 карбоновой кислоты (сукцинимидил эфир) </td><td> Invitrogen </td><td> A20006 </td><td></td></tr><tr><td> Орегон Зеленый 488 сукцинимидил эфир * 6-изомера * </td><td> Invitrogen </td><td> O-6149 </td><td></td></tr><tr><td> Диметилсульфоксид (ДМСО) </td><td> Сигма </td><td> D8418 </td><td></td></tr><tr><td> Диаммоний фосфат monohydrogen </td><td> Сигма </td><td> 379980 </td><td> К2НРО4 (для буфера phopshate) </td></tr><tr><td> Монокальцийфосфат дигидрофосфат </td><td></td><td> P5655 </td><td> КН2РО4 (для буфера phopshate) </td></tr><tr><td> Superose 6 гель-колонки </td><td> GE Healthcare наук о жизни </td><td> 17-0673-01 </td><td></td></tr><tr><td> Akta Проводник 100 Хроматограф </td><td> GE Amersham Pharmacia </td><td> WS-AKTA100 </td><td></td></tr><tr><td> Akta высокой комплект поток </td><td> GE Healthcare наук о жизни </td><td> 18-1154-85 </td><td></td></tr><tr><td> Сахароза </td><td> Сигма </td><td> S0389 </td><td></td></tr><tr><td> Ультрацентрифуге </tг&gt; <td> Бекман </td><td></td><td></td></tr><tr><td> SW 28 Ti ротора </td><td> Бекман </td><td> 342204 </td><td> Свинг ведро </td></tr><tr><td> 50,2 Ti ротора </td><td> Бекман </td><td> 337901 </td><td> Фиксированный угол </td></tr><tr><td> Amicon Ультра-15 центробежный фильтр единиц </td><td> Millipore </td><td> UFC910008 </td><td> 100 кДа отрезать </td></tr><tr><td> Градиент бывшего </td><td> Biorad </td><td></td><td></td></tr><tr><td> декстран, флуоресцеин, 70000 МВт, анионные </td><td> Invitrogen </td><td> D1823 </td><td></td></tr><tr><td> Вращающийся диск конфокальной микроскопии флуоресценции </td><td> Кворум; Yokogawa CSU 10, Yokogawa </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Epifluorescence широким полем зрения микроскопа </td><td> Кворум; Zeiss Axio Examiner, Zeiss </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Hamamatsu ImagEM 9100-12 EM-CCD камера </td><td> Кворум; Хамамацу </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Температура корпуса блок для микроскопа </td><td> Точность пластмассы </td><td> N / A </td><td></td></tr><tr><td> Вакуумная смазка </td><td> VWR </td><td> 59344-055 </td><td></td></tr><tr><td> Циркуляр стекла покровные нет. 1 (18 мм) </td><td> VWR </td><td> 16004-300 </td><td></td></tr><tr><td> Volocity программного обеспечения </td><td> Перкин Элмер </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Куриного эмбриона корпус </td><td></td><td> пользовательские сфабрикованы </td><td></td></tr><tr><td> Нежный ножницы </td><td> VWR </td><td> 25608-203 </td><td></td></tr><tr><td> Формалин </td><td> Bioshop </td><td> FOR201.500 </td><td> Использование в fumehood </td></tr><tr><td> Оптимального раскроя </td><td> Фишер; Ткань Tek </td><td> 1437365 </td><td></td></tr><tr><td> Температура (ОКТ) </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Пластиковые формы </td><td> Рыболов </td><td> 22-038217 </td><td></td></tr><tr><td> VWR VistaVision HistoBond клей Слайды </td><td> VWR </td><td> 16004-406 </td><td></td></tr><tr><td> Продлите золота с DAPI </td><td> Invitrogen </td><td> P36931 </td><td></td></tr><tr><td> Одноразовые лезвия для криостата </td><td> Рыболов </td><td> 12-634-2 </td><td></td></tr><tr><td> Криостат </td><td> Leica CM 3050 S </td><td> 14047033518 </td><td></td></tr></table>

evaluation of nanoparticle uptake in tumors in real time using intravital imaging

Современные технологии для визуализации опухоли, такие, как УЗИ, МРТ, ПЭТ и КТ, не в состоянии уступить изображений высокого разрешения для оценки наночастиц в опухолях на микроскопическом уровне 1,2,3, подчеркивая полезность подходящую модель ксенотрансплантата , в которых проводить детальный анализ поглощения. Здесь мы используем высоким разрешением прижизненной визуализации для оценки наночастиц в опухоли человека ксенотрансплантаты в модифицированном, раковины менее куриного эмбриона модели. Модель куриный эмбрион особенно хорошо подходят для этих анализов в естественных условиях, поскольку он поддерживает рост опухолей человека, является относительно недорогим и не требует анестезии или хирургического вмешательства 4,5. Опухолевые клетки образуют полностью васкуляризированной ксенотрансплантаты в течение 7 дней, когда имплантируется в chorioallantoic мембраны (CAM) 6. В результате опухоли визуализируются с помощью неинвазивных в реальном времени с высоким разрешением изображения, которые могут быть сохранены в течение 72 часов с минимальным воздействием на любой хост или опухоли систем. Наночастицы с широким диапазоном размеров и составов вводить дистальнее опухоли могут быть визуализированы и количественно по мере их прохождения через кровь, вытекать из сосудов в ткань с вытекающей сосудистая опухоль, и накапливаются в опухоли. Мы описываем здесь анализ наночастиц основе вируса мозаики коровьего гороха (CPMV), украшенная ближней инфракрасной флуоресцентные красители и / или полиэтиленгликоль полимеров (ПЭГ) 7, 8, 9,10,11. После внутривенного введения этих вирусных наночастиц быстро усвоены эндотелиальных клеток, что приводит к глобальной маркировки сосудистую как снаружи, так и внутри опухоли 7,12. PEGylation от вирусных наночастиц увеличивает их полувыведения, расширяет свое время в обращении, и в конечном итоге повышает их накопления в опухоли через повышенной проницаемости и удержания (ЭПР) эффект 7, 10,11. Скорость и степень накопления наночастиц в опухоли измеряется в течение долгого времени с помощью программного обеспечения для анализа изображений. Этот метод дает метод как визуализировать и количественно наночастиц динамики в опухолях человека.

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging at JoVE.com

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Мы представляем новый подход к количественному наночастиц локализации в сосудистой от человека xenografted опухолей с использованием динамических, в режиме реального времени прижизненных изображений в модели птичьего эмбриона.

Оценка наночастиц в опухоли в реальном времени с помощью Прижизненные изображения

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multispectral Real-time Fluorescence Imaging for Intraoperative Detection of the Sentinel Lymph Node in Gynecologic Oncology

Мультиспектральные в режиме реального времени флуоресценции для Интраоперационная Обнаружение узла Стража Лимфатические в гинекологической онкологии

The prognosis in virtually all solid tumors depends on the presence or absence of lymph node metastases.1-3 Surgical treatment most often combines radical ...

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR (qPCR)

MicroRNA Detection in Prostate Tumors by Quantitative Real-time PCR qPCR

Обнаружение микроРНК в опухолях простаты количественного ПЦР в реальном времени (КПЦР)

MicroRNAs (miRNAs) are single-stranded, 18&#x2013;24 nucleotide long, non-coding RNA molecules. They are involved in virtually every cellular process ...

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury IRI of the Rat Cremaster Muscle

В режиме реального времени Digital Imaging лейкоцитов-эндотелиальной взаимодействия при ишемии-реперфузии (ИРИ) в мышцах Кремастер Крысы

Ischemia-reperfusion injury (IRI) has been implicated in a large array of pathological conditions such as cerebral stroke, myocardial infarction, ...

Movement Retraining using Real-time Feedback of Performance

Движение переподготовки использовании в режиме реального времени обратная связь о производительности

Any modification of movement - especially movement patterns that have been honed over a number of years - requires re-organization of the neuromuscular ...

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

In Vivo Optical Imaging of Brain Tumors and Arthritis Using Fluorescent SapC-DOPS Nanovesicles

В Vivo визуализация пространственного распределения опухолей головного мозга и артрита использованием флуоресцентных SAPC-DOPS Nanovesicles

We describe a multi-angle rotational optical imaging (MAROI) system for in vivo monitoring of physiopathological processes labeled with a fluorescent ...

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Chemotherapy-induced Vascular Toxicity - Real-time In vivo Imaging of Vessel Impairment

Химиотерапия индуцированных Сосудистая токсичность - в режиме реального времени<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображений судна обесценение

Certain classes of chemotherapies may exert acute vascular changes that may progress into long-term conditions that may predispose the patient to an ...

Real-time Cytotoxicity Assays in Human Whole Blood

В режиме реального времени на цитотоксичность в человека цельной крови

A live cell-based whole blood cytotoxicity assay (WCA) that allows access to temporal information of the overall cell cytotoxicity is developed with ...

Real-time X-ray Imaging of Lung Fluid Volumes in Neonatal Mouse Lung

В режиме реального времени рентгеновских изображений легочных объемов жидкости в неонатальном Мышь легких

At birth, the lung undergoes a profound phenotypic switch from secretion to absorption, which allows for adaptation to breathing independently. Promoting ...

Evaluation of Lung Metastasis in Mouse Mammary Tumor Models by Quantitative Real-time PCR

Оценка метастазов в легких у мыши опухоли молочной Модели количественными ПЦР в реальном времени

Metastatic disease is the spread of malignant tumor cells from the primary cancer site to a distant organ and is the primary cause of cancer associated ...

Extended Time-lapse Intravital Imaging of Real-time Multicellular Dynamics in the Tumor Microenvironment

Расширенная Покадровый прижизненной визуализации в режиме реального времени многоклеточных Динамика в опухоли микроокружения

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and ...