Name: quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model
Uploaded: 2011-05-30T22:00:00
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Wir wollen Tyson Foods Inc. für die großzügige Bereitstellung der befruchteten Eier zu erkennen. Shanna Arnold war während der Dreharbeiten zu diesem Protokoll instrumental. Trenis Palmer wurde von den National Institutes of Health unter der Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (F31 National Cancer Institute) unterstützt. Diese Arbeit wurde teilweise durch CCSRI Grant # 700537 zur JDL und NIH / NCI gewähren # CA120711-01A1 und CA120711-01A1 auf AZ unterstützt.

1. Vorbereitung der Eier für xenografting (spontane Metastasierung) <ol><li> Frisch gelegt befruchtete Hühnereier sind in einer sich drehenden Inkubator für 10 Tage bei 100 ° F und 60% Luftfeuchtigkeit inkubiert. Die Eier gedreht werden viermal pro Stunde. </li><li> Auf Entwicklungsstörungen Tag 10 werden die Eier auf ihrer Seite in einem Ei Rack platziert. Ein Schwanenhals-Lampe oder einem anderen geeigneten Lichtquelle dient zur Kerze die Eier durch leuchtendes Licht in der Eierschale am stumpfen Ende des Eis, ...

<ol>
	<li>Ghiso, A. g. u. i. r. r. e., Kovalski, J. A., K, ., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+induced+by+downregulation+of+urokinase+receptor+in+human+carcinoma+involves+integrin+and+MAPK+signaling.">Tumor dormancy induced by downregulation of urokinase receptor in human carcinoma involves integrin and MAPK signaling.</a> J Cell Biol. 147, 89-104 (1999).</li><li>Chambers, A. F., Shafir, R., Ling, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+system+for+studying+metastasis+using+the+embryonic+chick.">A model system for studying metastasis using the embryonic chick.</a> Cancer research. 42, 4018-4025 (1982).</li><li>Chambers, A. F., Wilson, S. M., Tuck, A. B., Denhardt, G. H., Cairncross, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+metastatic+properties+of+a+variety+of+mouse,+rat,+and+human+cells+in+assays+in+nude+mice+and+chick+embryos.">Comparison of metastatic properties of a variety of mouse, rat, and human cells in assays in nude mice and chick embryos.</a> In Vivo. 4, 215-219 (1990).</li><li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination.">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Res. 65, 10959-10969 (2005).</li><li>Hahn-Dantona, E., Ramos-DeSimone, N., Sipley, J., Nagase, H., French, D. L., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proMMP-9+by+a+plasmin/MMP-3+cascade+in+a+tumor+cell+model.+Regulation+by+tissue+inhibitors+of+metalloproteinases.">Activation of proMMP-9 by a plasmin/MMP-3 cascade in a tumor cell model. Regulation by tissue inhibitors of metalloproteinases.</a> Ann N Y Acad Sci. 878, 372-387 (1999).</li><li>Kim, J., Yu, W., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay.">Requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li><li>Leong, H. S., Steinmetz, N. F., Ablack, A., Destito, G., Zijlstra, A., Stuhlmann, H., Manchester, M., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+embryonic+and+tumor+neovasculature+using+viral+nanoparticles.">Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles.</a> Nat Protoc. 5, 1406-1417 (2010).</li><li>Lewis, J. D., Destito, G., Zijlstra, A., Gonzalez, M. J., Quigley, J. P., Manchester, M., Stuhlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+nanoparticles+as+tools+for+intravital+vascular+imaging.">Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging.</a> Nat Med. 12, 354-360 (2006).</li><li>Ossowski, L., Reich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+malignant+phenotype+of+a+human+carcinoma+conditioned+by+growth+environment.">Changes in malignant phenotype of a human carcinoma conditioned by growth environment.</a> Cell. 33, 323-333 (1983).</li><li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C(T)+method.">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3, 1101-1108 (2008).</li><li>Testa, J. E., Brooks, P. C., Lin, J. M., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eukaryotic+expression+cloning+with+an+antimetastatic+monoclonal+antibody+identifies+a+tetraspanin+(PETA-3/CD151)+as+an+effector+of+human+tumor+cell+migration+and+metastasis.">Eukaryotic expression cloning with an antimetastatic monoclonal antibody identifies a tetraspanin (PETA-3/CD151) as an effector of human tumor cell migration and metastasis.</a> Cancer Res. 59, 3812-3820 (1999).</li><li>Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inhibition+of+Tumor+Cell+Intravasation+and+Subsequent+Metastasis+via+Regulation+of+In+Vivo+Tumor+Cell+Motility+by+the+Tetraspanin+CD151.">The Inhibition of Tumor Cell Intravasation and Subsequent Metastasis via Regulation of In Vivo Tumor Cell Motility by the Tetraspanin CD151.</a> Cancer Cell. 13, 221-234 (2008).</li><li>Zijlstra, A., Mellor, R., Panzarella, G., Aimes, R. T., Hooper, J. D., Marchenko, N. D., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+analysis+of+rate-limiting+steps+in+the+metastatic+cascade+using+human-specific+real-time+polymerase+chain+reaction.">A quantitative analysis of rate-limiting steps in the metastatic cascade using human-specific real-time polymerase chain reaction.</a> Cancer Res. 62, 7083-7092 (2002).</li></ol>

Das Küken CAM ist seit Jahrzehnten als Modellsystem, um verschiedene Aspekte der Tumorbiologie und metastatischen Progression Studie verwendet. Prinzip Auswertung des metastasierten Fähigkeiten haben in diesem Modell wurde durch eine Vielzahl von Gruppen, einschließlich der Analyse der Vegetationsruhe durchgeführt (. Aguirre Ghiso et al, 1999; Ossowski und Reich, 1983), Gewebe-Remodeling (Deryugina et al, 2005;. Hahn-Dantona . et al, 1999) und Metastasierung (Zijlstra et al, 2008;...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare (optional) </th></tr><tr><td> 1X Dulbeccos Modified Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11995073 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbeccos Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung (D-PBS) (1x), flüssig </td><td> Invitrogen </td><td> 14190250 </td><td> pH-Wert 7,4 </td></tr><tr><td> Trypsin, 0,05% (1X) mit EDTA 4NA, flüssig </td><td> Invitrogen </td><td> 25300054 </td><td></td></tr><tr><td> Sportsman Hatcher </td><td> Berry Hill </td><td> 1550HA </td><td rowspan="2"> Diese Inkubatoren sind einige der am leichtesten verfügbar. Allerdings wird das Video zeigen verschiedene Geräte. </td></tr><tr><td> Sportsman Inkubator </td><td> Berry Hill </td><td> 1502EA </td><td></td></tr><tr><td> Dremel Dremel </td><td> Dremel </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dremel Trennscheiben nicht. 36 </td><td> Dremel </td><td> 409 </td><td></td></tr><tr><td> Tragbare Pipette Aid </td><td> Fischer </td><td> 1368115E </td><td></td></tr><tr><td> Wattestäbchen Applikatoren </td><td> Fischer </td><td> 23-400-001) </td><td></td></tr><tr><td> Befruchteten Eier </td><td> Verschiedene </td><td></td><td> Viele verschiedene Anbieter genutzt werden kann. Die Eier sollten etwa 35-55 Gramm betragen. Die Hühner legt, dass sie sollte zwischen 36 und 55 Wochen alt sein. </td></tr><tr><td> Hämozytometer </td><td> Hausser Scientific, VWR </td><td> 15170-090 </td><td></td></tr><tr><td> LWL-Mikroskopbeleuchtung </td><td> Amscope </td><td> HL250-AY </td><td> 150W </td></tr><tr><td> 25-Gauge-Nadel </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sybr Grüne Extract-N-Amp Tissue PCR Kit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> XNATRG </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model

Während Metastasierung von Krebszellen aus dem Primärtumor zu verbreiten, in das umgebende Gewebe einzudringen, und die Ausbreitung auf entfernte Organe. Metastasierung ist ein komplexer Prozess, der viele Gewebetypen, span variable Zeiträume betreffen, können und treten oft tief in Organen, wodurch es schwierig zu untersuchen und zu quantifizieren. Darüber hinaus ist die Wirksamkeit des metastatischen Prozesses von mehreren Schritten in den metastatischen Kaskade macht es schwierig, den Beitrag eines einzelnen Aspekt der Tumorzelle Verhalten zu bewerten beeinflusst. Als Folge davon sind Metastasen Assays häufig in Versuchstieren durchgeführt, um eine unbedingt realistischen Kontext, in dem Metastasen Studie zur Verfügung. Leider sind diese Modelle durch ihre komplexen Physiologie kompliziert. Der Hühnerembryo ist ein einzigartiges In-vivo-Modell, das viele Beschränkungen überwindet, um das Studium Metastasierung, wegen der Erreichbarkeit der Chorioallantoismembran (CAM), einem gut durchbluteten extra-embryonalen Gewebe unter der Eierschale, die empfänglich für die xenografting von Tumorzellen befindet (Abbildung 1). Da darüber hinaus die Hühnerembryo natürlich immundefizienten ist die CAM leicht unterstützt die Transplantation von Normal-und Tumorgewebe. Am wichtigsten ist, die aviäre CAM erfolgreich unterstützt die meisten Krebszellen Eigenschaften wie Wachstum, Invasion, Angiogenese und Umbau der Mikroumgebung. Dies macht das Modell besonders nützlich für die Untersuchung der Signalwege, die zu Krebs Metastasen führen und die Reaktion von metastasierendem Krebs, neue potenzielle Therapeutika vorherzusagen. Der Nachweis von disseminierten Zellen durch artspezifische Alu-PCR ermöglicht die quantitative Erfassung Metastasen in Organen, die durch so wenig wie 25 Zellen besiedelt sind. Mit dem Human Epidermoidkarzinom Zelllinie (HEp3) verwenden wir dieses Modell zur spontanen Metastasierung von Krebszellen in entfernte Organe, wie das Küken Leber und Lunge zu analysieren. Zusätzlich hatte der Alu-PCR-Protokoll zeigen wir die Empfindlichkeit und Reproduzierbarkeit des Tests als Instrument zur Analyse und Quantifizierung intravasation, Verhaftung, Extravasation und Kolonisierung als einzelne Elemente der Metastasierung.

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Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Mit quantitative PCR, zeigen wir, wie die etablierten chick CAM-Modell verwendet werden, um quantitativ zu analysieren die Metastasierung von humanen Tumorzellen zu entfernten Organen sein.

Quantitative Analyse von Krebs Metastasen mit einem Vogelembryo Modell

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

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