Name: quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model
Uploaded: 2011-05-30T22:00:00
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我々は寛大に受精卵を提供するためのタイソンフーズ社を認識したい。シャナアーノルドは、このプロトコルの撮影の間に尽力した。 Trenisパーマーは、ルースL.キルシュシュタイン国立リサーチサービス賞（F31国立がん研究所）の下に国立衛生研究所によってサポートされていました。この作品は、部分的にJDLとNIH / NCIの助成金＃CA120711 - 01A1とCA120711 - 01A1にAZにCCSRIグラント＃700537によってサポートされていました。

1。 xenograftingために卵を準備する（自然転移） <ol><li>たての敷設受精鶏卵は100 ° F、60％の湿度で10日間回転インキュベーター中でインキュベートする。卵を4回、各時間を回転している。 </li><li>発達10日目に卵は卵のラックに彼らの側に配置されます。ガチョウの首のランプまたは他の適切な光源がairsacが配置されている卵の鈍端に卵の殻の中に光を照らすことによってキャンドル卵をする?...

<ol>
	<li>Ghiso, A. g. u. i. r. r. e., Kovalski, J. A., K, ., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+induced+by+downregulation+of+urokinase+receptor+in+human+carcinoma+involves+integrin+and+MAPK+signaling.">Tumor dormancy induced by downregulation of urokinase receptor in human carcinoma involves integrin and MAPK signaling.</a> J Cell Biol. 147, 89-104 (1999).</li><li>Chambers, A. F., Shafir, R., Ling, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+system+for+studying+metastasis+using+the+embryonic+chick.">A model system for studying metastasis using the embryonic chick.</a> Cancer research. 42, 4018-4025 (1982).</li><li>Chambers, A. F., Wilson, S. M., Tuck, A. B., Denhardt, G. H., Cairncross, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+metastatic+properties+of+a+variety+of+mouse,+rat,+and+human+cells+in+assays+in+nude+mice+and+chick+embryos.">Comparison of metastatic properties of a variety of mouse, rat, and human cells in assays in nude mice and chick embryos.</a> In Vivo. 4, 215-219 (1990).</li><li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination.">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Res. 65, 10959-10969 (2005).</li><li>Hahn-Dantona, E., Ramos-DeSimone, N., Sipley, J., Nagase, H., French, D. L., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proMMP-9+by+a+plasmin/MMP-3+cascade+in+a+tumor+cell+model.+Regulation+by+tissue+inhibitors+of+metalloproteinases.">Activation of proMMP-9 by a plasmin/MMP-3 cascade in a tumor cell model. Regulation by tissue inhibitors of metalloproteinases.</a> Ann N Y Acad Sci. 878, 372-387 (1999).</li><li>Kim, J., Yu, W., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay.">Requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li><li>Leong, H. S., Steinmetz, N. F., Ablack, A., Destito, G., Zijlstra, A., Stuhlmann, H., Manchester, M., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+embryonic+and+tumor+neovasculature+using+viral+nanoparticles.">Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles.</a> Nat Protoc. 5, 1406-1417 (2010).</li><li>Lewis, J. D., Destito, G., Zijlstra, A., Gonzalez, M. J., Quigley, J. P., Manchester, M., Stuhlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+nanoparticles+as+tools+for+intravital+vascular+imaging.">Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging.</a> Nat Med. 12, 354-360 (2006).</li><li>Ossowski, L., Reich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+malignant+phenotype+of+a+human+carcinoma+conditioned+by+growth+environment.">Changes in malignant phenotype of a human carcinoma conditioned by growth environment.</a> Cell. 33, 323-333 (1983).</li><li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C(T)+method.">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3, 1101-1108 (2008).</li><li>Testa, J. E., Brooks, P. C., Lin, J. M., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eukaryotic+expression+cloning+with+an+antimetastatic+monoclonal+antibody+identifies+a+tetraspanin+(PETA-3/CD151)+as+an+effector+of+human+tumor+cell+migration+and+metastasis.">Eukaryotic expression cloning with an antimetastatic monoclonal antibody identifies a tetraspanin (PETA-3/CD151) as an effector of human tumor cell migration and metastasis.</a> Cancer Res. 59, 3812-3820 (1999).</li><li>Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inhibition+of+Tumor+Cell+Intravasation+and+Subsequent+Metastasis+via+Regulation+of+In+Vivo+Tumor+Cell+Motility+by+the+Tetraspanin+CD151.">The Inhibition of Tumor Cell Intravasation and Subsequent Metastasis via Regulation of In Vivo Tumor Cell Motility by the Tetraspanin CD151.</a> Cancer Cell. 13, 221-234 (2008).</li><li>Zijlstra, A., Mellor, R., Panzarella, G., Aimes, R. T., Hooper, J. D., Marchenko, N. D., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+analysis+of+rate-limiting+steps+in+the+metastatic+cascade+using+human-specific+real-time+polymerase+chain+reaction.">A quantitative analysis of rate-limiting steps in the metastatic cascade using human-specific real-time polymerase chain reaction.</a> Cancer Res. 62, 7083-7092 (2002).</li></ol>

ひよこCAMは、癌の生物学および転移性の進行のさまざまな側面を研究するモデル系として何十年も使用されています。転移能力の原則の評価休眠の分析を含むグループの様々なことで、このモデルで実行されている（アギーレGhiso ら 、1999;。オソウスキと帝国、1983）、組織のリモデリング（Deryugina ら 、2005;。ハーンDantona ら 、1999）、および転移（ザイルストラら ...

<table border="1"><tbody><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td> 1Xダルベッコ改変イーグル培地（DMEM） </td><td>インビトロジェン</td><td> 11995073 </td><td></td></tr><tr><td>ダルベッコのリン酸緩衝食塩水（D - PBS）（1X）、液体</td><td>インビトロジェン</td><td> 14190250 </td><td> pH7.4の</td></tr><tr><td> EDTA 4NA、液体とトリプシン、0.05％（1X） </td><td>インビトロジェン</td><td> 25300054 </td><td></td></tr><tr><td>スポーツマンハッチャー</td><td>ベリーヒル</td><td> 1550HA </td><td rowspan="2">これらのインキュベータは、最も容易に利用可能の一部です。しかし、ビデオは別の機器が表示されます。 </td></tr><tr><td>スポーツマンインキュベーター</td><td>ベリーヒル</td><td> 1502EA </td><td></td></tr><tr><td>ドレメルロータリーツール</td><td>ドレメル</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ドレメルのカットオフホイールありません。 36 </td><td>ドレメル</td><td> 409 </td><td></td></tr><tr><td>ポータブルピペットエイド</td><td>フィッシャー</td><td> 1368115E </td><td></td></tr><tr><td>綿は、アプリケーターのチップソー</td><td>フィッシャー</td><td> 23-400-001） </td><td></td></tr><tr><td>受精卵</td><td>様々な</td><td></td><td>多くの異なるベンダーを使用することができます。卵は約35〜55グラムにする必要があります。それらは年齢36〜55週になるはず産む鶏。 </td></tr><tr><td>血球計</td><td> Hausserサイエンティフィック、VWR </td><td> 15170-090 </td><td></td></tr><tr><td>光ファイバ顕微鏡の照明</td><td> Amscope </td><td> HL250 - AY </td><td> 150W </td></tr><tr><td> 25ゲージの針</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> SYBRグリーンエキス- N - Ampの組織PCRキット</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> XNATRG </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model

転移癌細胞が原発腫瘍から発信時には、周囲の組織に侵入し、遠隔臓器に転移する。転移は、多くの組織の種類、スパン可変の期間を含む、しばしばそれが困難な調査と定量化すること、臓器の深部に発生する可能性がある複雑なプロセスです。さらに、転移プロセスの有効性は、それが困難な腫瘍細胞の挙動の一つの側面の寄与を評価すること転移カスケードに複数のステップに影響されます。結果として、転移アッセイは頻繁に転移を研究するために、必ずしも現実的なコンテキストを提供するために、実験動物で行われます。残念ながら、これらのモデルは、彼らの複雑な生理機能によってさらに複雑です。ニワトリ胚の漿尿膜（CAM）、腫瘍細胞のxenograftingに受け入れている卵の殻の下にある血管に富んだ超胚組織のアクセシビリティのために、転移を研究するために多くの制限を克服する生体モデル内で一意です。 （図1）。また、ニワトリ胚は自然に免疫不全であるため、CAMは簡単に正常細胞と腫瘍の両方の組織の生着をサポートしています。最も重要なことは、鳥類のCAMは、正常に増殖、浸潤、血管新生、および微小環境の改造を含め、ほとんどのがん細胞の特性をサポートしています。これは、癌の転移につながると新たな潜在的な治療への転移性癌の応答を予測するために経路の調査のためのモデルは非常に便利です。種特異的アルバリPCRによる播種細胞の検出は、定量的に25セルのように少数で保菌している臓器に転移を評価することが可能になります。ヒト類表皮癌細胞株（HEp3）を使用して我々は、ニワトリの肝臓、肺など遠くの臓器にがん細胞の自然転移を分析するためにこのモデルを使用してください。また、ALU - PCRのプロトコルを使用して我々は、転移の個々の要素として管内、逮捕、血管外漏出、および植民地化を分析し、定量するためのツールと​​して、アッセイの感度と再現性を示しています。

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Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

定量的PCRを用いて、我々は十分に確立されたニワトリCAMモデルは定量的に遠隔臓器へのヒト腫瘍細胞の転移を分析するために使用できる方法を示します。

鳥類胚のモデルを使用して、がんの転移の定量的解析

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

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