Name: quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model
Uploaded: 2011-05-30T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model at JoVE.com

Мы хотим, чтобы признать, Tyson Foods Инк щедро предоставления оплодотворенных яиц. Шанна Арнольд сыграл важную роль во время съемок этого протокола. Trenis Палмер была поддержана Национальным институтом здоровья под Рут Л. Kirschstein Национальный исследовательский Service Award (F31 National Cancer Institute). Эта работа была частично поддержана CCSRI Грант № 700537 на ЛЗЕ и NIH / NCI грант № CA120711-01A1 и 01A1-CA120711 на AZ.

1. Подготовка яйца xenografting (спонтанное метастазирование) <ol><li> Только что заложен оплодотворенных куриных яиц инкубируют во вращающейся инкубаторе в течение 10 дней при температуре 100 ° С и влажности 60%. Яйца вращаются четыре раза в час. </li><li> На 10-й день развития яйца находятся на их сторо?...

<ol>
	<li>Ghiso, A. g. u. i. r. r. e., Kovalski, J. A., K, ., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+induced+by+downregulation+of+urokinase+receptor+in+human+carcinoma+involves+integrin+and+MAPK+signaling.">Tumor dormancy induced by downregulation of urokinase receptor in human carcinoma involves integrin and MAPK signaling.</a> J Cell Biol. 147, 89-104 (1999).</li><li>Chambers, A. F., Shafir, R., Ling, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+system+for+studying+metastasis+using+the+embryonic+chick.">A model system for studying metastasis using the embryonic chick.</a> Cancer research. 42, 4018-4025 (1982).</li><li>Chambers, A. F., Wilson, S. M., Tuck, A. B., Denhardt, G. H., Cairncross, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+metastatic+properties+of+a+variety+of+mouse,+rat,+and+human+cells+in+assays+in+nude+mice+and+chick+embryos.">Comparison of metastatic properties of a variety of mouse, rat, and human cells in assays in nude mice and chick embryos.</a> In Vivo. 4, 215-219 (1990).</li><li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination.">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Res. 65, 10959-10969 (2005).</li><li>Hahn-Dantona, E., Ramos-DeSimone, N., Sipley, J., Nagase, H., French, D. L., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proMMP-9+by+a+plasmin/MMP-3+cascade+in+a+tumor+cell+model.+Regulation+by+tissue+inhibitors+of+metalloproteinases.">Activation of proMMP-9 by a plasmin/MMP-3 cascade in a tumor cell model. Regulation by tissue inhibitors of metalloproteinases.</a> Ann N Y Acad Sci. 878, 372-387 (1999).</li><li>Kim, J., Yu, W., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay.">Requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li><li>Leong, H. S., Steinmetz, N. F., Ablack, A., Destito, G., Zijlstra, A., Stuhlmann, H., Manchester, M., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+embryonic+and+tumor+neovasculature+using+viral+nanoparticles.">Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles.</a> Nat Protoc. 5, 1406-1417 (2010).</li><li>Lewis, J. D., Destito, G., Zijlstra, A., Gonzalez, M. J., Quigley, J. P., Manchester, M., Stuhlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+nanoparticles+as+tools+for+intravital+vascular+imaging.">Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging.</a> Nat Med. 12, 354-360 (2006).</li><li>Ossowski, L., Reich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+malignant+phenotype+of+a+human+carcinoma+conditioned+by+growth+environment.">Changes in malignant phenotype of a human carcinoma conditioned by growth environment.</a> Cell. 33, 323-333 (1983).</li><li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C(T)+method.">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3, 1101-1108 (2008).</li><li>Testa, J. E., Brooks, P. C., Lin, J. M., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eukaryotic+expression+cloning+with+an+antimetastatic+monoclonal+antibody+identifies+a+tetraspanin+(PETA-3/CD151)+as+an+effector+of+human+tumor+cell+migration+and+metastasis.">Eukaryotic expression cloning with an antimetastatic monoclonal antibody identifies a tetraspanin (PETA-3/CD151) as an effector of human tumor cell migration and metastasis.</a> Cancer Res. 59, 3812-3820 (1999).</li><li>Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inhibition+of+Tumor+Cell+Intravasation+and+Subsequent+Metastasis+via+Regulation+of+In+Vivo+Tumor+Cell+Motility+by+the+Tetraspanin+CD151.">The Inhibition of Tumor Cell Intravasation and Subsequent Metastasis via Regulation of In Vivo Tumor Cell Motility by the Tetraspanin CD151.</a> Cancer Cell. 13, 221-234 (2008).</li><li>Zijlstra, A., Mellor, R., Panzarella, G., Aimes, R. T., Hooper, J. D., Marchenko, N. D., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+analysis+of+rate-limiting+steps+in+the+metastatic+cascade+using+human-specific+real-time+polymerase+chain+reaction.">A quantitative analysis of rate-limiting steps in the metastatic cascade using human-specific real-time polymerase chain reaction.</a> Cancer Res. 62, 7083-7092 (2002).</li></ol>

Куриных CAM был использован для десятилетий в качестве модельной системы для изучения различных аспектов биологии рака и метастатической прогрессии. Принцип оценки метастатической способности были проведены в этой модели с помощью различных групп, включая анализ покоя (Агирре Ghiso и ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии (необязательно) </th></tr><tr><td> 1X Дульбеко изменения Eagle Средняя (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11995073 </td><td></td></tr><tr><td> Дульбеко фосфатно-солевом буфере (D-би-эс) (1X), жидких </td><td> Invitrogen </td><td> 14190250 </td><td> рН 7,4 </td></tr><tr><td> Трипсин, 0,05% (1X) с ЭДТА 4Na, жидких </td><td> Invitrogen </td><td> 25300054 </td><td></td></tr><tr><td> Спортсмен выводном </td><td> Берри Хилл </td><td> 1550HA </td><td rowspan="2"> Эти инкубаторы являются одними из наиболее доступными. Тем не менее, видео покажет различного оборудования. </td></tr><tr><td> Спортсмен инкубатор </td><td> Берри Хилл </td><td> 1502EA </td><td></td></tr><tr><td> Ротационный инструмент Dremel </td><td> Dremel </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dremel отсечки колес нет. 36 </td><td> Dremel </td><td> 409 </td><td></td></tr><tr><td> Портативный помощи пипетки </td><td> Рыболов </td><td> 1368115E </td><td></td></tr><tr><td> Хлопок чаевые Аппликаторы </td><td> Рыболов </td><td> 23-400-001) </td><td></td></tr><tr><td> Оплодотворенные яйца </td><td> Различный </td><td></td><td> Много различных поставщиков могут быть использованы. Яйца должны быть примерно 35-55 граммов. Кур, которые кладет их должно быть от 36 до 55-недельного возраста. </td></tr><tr><td> Гемоцитометра </td><td> Хауссер Научные, VWR </td><td> 15170-090 </td><td></td></tr><tr><td> Волоконно-оптический микроскоп осветитель </td><td> Amscope </td><td> HL250-AY </td><td> 150W </td></tr><tr><td> 25 иглы </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Экстракт зеленого SYBR-N-Amp тканей PCR Kit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> XNATRG </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model

В клетках метастазов рака распространения от первичной опухоли, вторгнуться в окружающие ткани, и распространился на отдаленные органы. Метастазы сложный процесс, который может включать в себя многие виды тканей, диапазон различных периодов времени, и часто происходят глубоко внутри органов, что затрудняет расследование и количественно. Кроме того, эффективность метастатического процесса находится под влиянием нескольких этапов метастатического каскада, что затрудняет оценку вклада отдельного аспекта поведения опухолевых клеток. Как следствие, метастазы анализах часто выполняются в экспериментах на животных, чтобы обеспечить реалистичный обязательно контекст, в котором для изучения метастазов. К сожалению, эти модели еще более осложняется их комплексного физиологии. Куриного эмбриона является уникальным в естественных условиях модель, которая позволяет преодолеть многие ограничения к изучению метастазы, из-за доступности chorioallantoic мембраны (CAM), хорошо васкуляризированной экстра-эмбриональные ткани, расположенной под яичной скорлупы, которая восприимчива к xenografting опухолевых клеток (рис. 1). Более того, поскольку куриного эмбриона естественно иммунодефицитом, CAM с готовностью поддерживает приживление нормальных и опухолевых тканей. Самое главное, птичий CAM успешно поддерживает большинство раковых клеток характеристики, включая рост, инвазию, ангиогенез, и реконструкция микроокружения. Это делает модель исключительно полезными для исследования путей, которые приводят к раку метастазов и предсказать ответ метастатического рака с новыми потенциальными терапии. Обнаружение распространены клеток видоспецифические Алу ПЦР позволяет количественно оценивать метастазы в органах, которые колонизировали всего лишь 25 клеток. Использование прав Эпидермоидная клеточной линии карциномы (HEp3) мы используем эту модель для анализа спонтанного метастазирования раковых клеток в отдаленные органы, включая печень цыпленка и легких. Кроме того, использование Alu-PCR протокола мы демонстрируем чувствительность и воспроизводимость анализа в качестве инструмента для анализа и количественного intravasation, арест, кровоизлияние, и колонизации в качестве отдельных элементов метастазов.

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model at JoVE.com

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Использование количественной ПЦР, мы показали, как устоявшихся куриных CAM модель может быть использована для количественного анализа метастазирование опухолевых клеток человека в отдаленные органы.

Количественный анализ рака метастазы использовании Птичий Модель эмбрионов

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Medicine

Unit 1

Cancer

SCIENTISTS IN ACTION

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Ортотопическая модели мышей раку мочевого пузыря

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Количественная визуализация и обнаружение рака кожи с использованием динамических Тепловизор

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

В естественных условиях Биолюминесценция изображения опухоли Гипоксия Динамика груди метастазы рака мозга у мышей

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Мульти-модальных изображений ангиогенеза в обнаженной модели крысы из груди метастазы рака костей с помощью магнитного резонанса, компьютерной томографии Объемные и ультразвуковые

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Models of Bone Metastasis

Модели костных метастазов

Bone metastases are a common occurrence in several malignancies, including breast, prostate, and lung. Once established in bone, tumors are responsible ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Ортотопическая Рак мочевого пузыря Модель для генной исследований Доставка

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Использование Количественный ПЦР в реальном времени для определения Приживление клетки-донора в конкурентной мышиной модели трансплантации костного мозга костей

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

Количественный Мультиспектральный Анализ После Люминесцентная трансплантации тканей для визуализации клеточных Origins, типы и взаимодействий

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Ортотопическая мышиной модели человеческого рака простаты Метастазы

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

Спинномозговой жидкости профилирования микроРНК с использованием количественных ПЦР в реальном времени

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...