Name: quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model
Uploaded: 2011-05-30T22:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model at JoVE.com

Vi vill känna igen Tyson Foods Inc. för generöst att ge de befruktade äggen. Shanna Arnold var avgörande under inspelningen av detta protokoll. Trenis Palmer stöddes av National Institutes of Health enligt Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (F31 National Cancer Institute). Detta arbete har delvis stöd av CCSRI Grant # 700.537 till JDL och NIH / GNI bevilja # CA120711-01A1 och CA120711-01A1 till AZ.

1. Förbereda ägg för xenografting (spontana metastaser) <ol><li> Nylagda befruktade hönsägg inkuberas i en roterande inkubator för 10 dagar vid 100 ° C och 60% luftfuktighet. Äggen roteras fyra gånger varje timme. </li><li> På utvecklande dag 10 äggen placeras på deras sida i ett ägg rack. En gås-ringad lampa eller annan lämplig ljuskälla används för att ljus äggen med skinande ljuset i äggskal i den trubbiga änden av ägget där airsac finns. </li><li> Den chorioallantoic ven ligger och markeras....

<ol>
	<li>Ghiso, A. g. u. i. r. r. e., Kovalski, J. A., K, ., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+dormancy+induced+by+downregulation+of+urokinase+receptor+in+human+carcinoma+involves+integrin+and+MAPK+signaling.">Tumor dormancy induced by downregulation of urokinase receptor in human carcinoma involves integrin and MAPK signaling.</a> J Cell Biol. 147, 89-104 (1999).</li><li>Chambers, A. F., Shafir, R., Ling, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+system+for+studying+metastasis+using+the+embryonic+chick.">A model system for studying metastasis using the embryonic chick.</a> Cancer research. 42, 4018-4025 (1982).</li><li>Chambers, A. F., Wilson, S. M., Tuck, A. B., Denhardt, G. H., Cairncross, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+metastatic+properties+of+a+variety+of+mouse,+rat,+and+human+cells+in+assays+in+nude+mice+and+chick+embryos.">Comparison of metastatic properties of a variety of mouse, rat, and human cells in assays in nude mice and chick embryos.</a> In Vivo. 4, 215-219 (1990).</li><li>Deryugina, E. I., Zijlstra, A., Partridge, J. J., Kupriyanova, T. A., Madsen, M. A., Papagiannakopoulos, T., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unexpected+effect+of+matrix+metalloproteinase+down-regulation+on+vascular+intravasation+and+metastasis+of+human+fibrosarcoma+cells+selected+in+vivo+for+high+rates+of+dissemination.">Unexpected effect of matrix metalloproteinase down-regulation on vascular intravasation and metastasis of human fibrosarcoma cells selected in vivo for high rates of dissemination.</a> Cancer Res. 65, 10959-10969 (2005).</li><li>Hahn-Dantona, E., Ramos-DeSimone, N., Sipley, J., Nagase, H., French, D. L., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+proMMP-9+by+a+plasmin/MMP-3+cascade+in+a+tumor+cell+model.+Regulation+by+tissue+inhibitors+of+metalloproteinases.">Activation of proMMP-9 by a plasmin/MMP-3 cascade in a tumor cell model. Regulation by tissue inhibitors of metalloproteinases.</a> Ann N Y Acad Sci. 878, 372-387 (1999).</li><li>Kim, J., Yu, W., Kovalski, K., Ossowski, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Requirement+for+specific+proteases+in+cancer+cell+intravasation+as+revealed+by+a+novel+semiquantitative+PCR-based+assay.">Requirement for specific proteases in cancer cell intravasation as revealed by a novel semiquantitative PCR-based assay.</a> Cell. 94, 353-362 (1998).</li><li>Leong, H. S., Steinmetz, N. F., Ablack, A., Destito, G., Zijlstra, A., Stuhlmann, H., Manchester, M., Lewis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+imaging+of+embryonic+and+tumor+neovasculature+using+viral+nanoparticles.">Intravital imaging of embryonic and tumor neovasculature using viral nanoparticles.</a> Nat Protoc. 5, 1406-1417 (2010).</li><li>Lewis, J. D., Destito, G., Zijlstra, A., Gonzalez, M. J., Quigley, J. P., Manchester, M., Stuhlmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+nanoparticles+as+tools+for+intravital+vascular+imaging.">Viral nanoparticles as tools for intravital vascular imaging.</a> Nat Med. 12, 354-360 (2006).</li><li>Ossowski, L., Reich, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+malignant+phenotype+of+a+human+carcinoma+conditioned+by+growth+environment.">Changes in malignant phenotype of a human carcinoma conditioned by growth environment.</a> Cell. 33, 323-333 (1983).</li><li>Schmittgen, T. D., Livak, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analyzing+real-time+PCR+data+by+the+comparative+C(T)+method.">Analyzing real-time PCR data by the comparative C(T) method.</a> Nat Protoc. 3, 1101-1108 (2008).</li><li>Testa, J. E., Brooks, P. C., Lin, J. M., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Eukaryotic+expression+cloning+with+an+antimetastatic+monoclonal+antibody+identifies+a+tetraspanin+(PETA-3/CD151)+as+an+effector+of+human+tumor+cell+migration+and+metastasis.">Eukaryotic expression cloning with an antimetastatic monoclonal antibody identifies a tetraspanin (PETA-3/CD151) as an effector of human tumor cell migration and metastasis.</a> Cancer Res. 59, 3812-3820 (1999).</li><li>Zijlstra, A., Lewis, J., Degryse, B., Stuhlmann, H., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Inhibition+of+Tumor+Cell+Intravasation+and+Subsequent+Metastasis+via+Regulation+of+In+Vivo+Tumor+Cell+Motility+by+the+Tetraspanin+CD151.">The Inhibition of Tumor Cell Intravasation and Subsequent Metastasis via Regulation of In Vivo Tumor Cell Motility by the Tetraspanin CD151.</a> Cancer Cell. 13, 221-234 (2008).</li><li>Zijlstra, A., Mellor, R., Panzarella, G., Aimes, R. T., Hooper, J. D., Marchenko, N. D., Quigley, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+analysis+of+rate-limiting+steps+in+the+metastatic+cascade+using+human-specific+real-time+polymerase+chain+reaction.">A quantitative analysis of rate-limiting steps in the metastatic cascade using human-specific real-time polymerase chain reaction.</a> Cancer Res. 62, 7083-7092 (2002).</li></ol>

Den unge CAM har använts i årtionden som modellsystem för att studera olika aspekter av cancer biologi och metastaserande progression. Princip utvärdering av metastaserande förmågor har gjorts i denna modell av en mängd olika grupper, inklusive en analys av dvala (Aguirre Ghiso et al, 1999;. Ossowski och Reich, 1983), vävnad ombyggnad Deryugina et al (2005;. Hahn-Dantona . et al, 1999) och metastaser (Zijlstra et al, 2008;. Zijlstra et al, 2002).. Det fortsätter att ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reagensets namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer (frivilligt) </th></tr><tr><td> 1X Dulbecco ändrade Eagle Medium (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11995073 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco är fosfatbuffrad koksaltlösning (D-PBS) (1X), flytande </td><td> Invitrogen </td><td> 14190250 </td><td> pH 7,4 </td></tr><tr><td> Trypsin, 0,05% (1X) med EDTA 4NA, flytande </td><td> Invitrogen </td><td> 25300054 </td><td></td></tr><tr><td> Sportsman Hatcher </td><td> Berry Hill </td><td> 1550HA </td><td rowspan="2"> Dessa inkubatorer är några av de mest lättillgängliga. Kommer dock att videon visar olika utrustning. </td></tr><tr><td> Sportsman inkubator </td><td> Berry Hill </td><td> 1502EA </td><td></td></tr><tr><td> Dremel roterande verktyg </td><td> Dremel </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dremel cutoff hjul nr. 36 </td><td> Dremel </td><td> 409 </td><td></td></tr><tr><td> Bärbar Pipettera Bistånd </td><td> Fisher </td><td> 1368115E </td><td></td></tr><tr><td> Bomull Tipped applikatorer </td><td> Fisher </td><td> 23-400-001) </td><td></td></tr><tr><td> Befruktade ägg </td><td> Olika </td><td></td><td> Många olika leverantörer kan användas. Äggen bör vara ca 35-55 gram. De höns som lägger dem bör vara mellan 36 och 55 veckors ålder. </td></tr><tr><td> Hemocytometer </td><td> Hausser Vetenskapliga, VWR </td><td> 15170-090 </td><td></td></tr><tr><td> Fiberoptiska mikroskop belysning </td><td> Amscope </td><td> HL250-Ay </td><td> 150W </td></tr><tr><td> 25 gauge </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sybr Grön Extrahera-N-Amp Tissue PCR kit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> XNATRG </td><td></td></tr></tbody></table>

quantitative analysis of cancer metastasis using an avian embryo model

Under metastaser cancerceller sprider sig från den primära tumören, invadera in i omgivande vävnader och sprida sig till avlägsna organ. Metastaser är en komplex process som kan innebära många vävnadstyper, span varierande tidsperioder, och förekommer ofta djupt inom organ, vilket gör det svårt att undersöka och kvantifiera. Dessutom är effekten av metastaserande process som påverkas av flera steg i metastaserande kaskad gör det svårt att utvärdera bidraget av en enda aspekt av tumörcellen beteende. Som en konsekvens är metastaser analyser som utförs ofta hos försöksdjur för att ge en nödvändighet realistiskt sammanhang där för att studera metastaser. Tyvärr är dessa modeller kompliceras ytterligare av deras komplexa fysiologi. Den kycklingembryo är en unik in vivo modell som övervinner många begränsningar att studera metastaser, på grund av tillgängligheten till chorioallantoic membran (CAM), ett väl vaskulariserad extra embryonal vävnad som finns under äggskal som är mottaglig för xenografting av tumörceller (figur 1). Eftersom den kycklingembryo är naturligt immunförsvar stöder CAM lätt att engraftment på både normala och tumörceller. Viktigast stöder aviär CAM framgångsrikt mest cancercellernas egenskaper, inklusive tillväxt, invasion, angiogenes och ombildningar av mikromiljö. Detta gör modellen exceptionellt användbar för utredning av vägar som leder till cancer metastasering och att förutsäga svaret av metastaserande cancer till nya potentiella läkemedel. Upptäckten av sprids celler genom artspecifika Alu PCR är det möjligt att kvantitativt bedöma metastaser i organ som är koloniserade av så få som 25 celler. Använda Human epidermoid Carcinom cellinje (HEp3) vi använda denna modell för att analysera spontana metastasering av cancerceller till avlägsna organ, inklusive ungen lever och lunga. Dessutom använder Alu-PCR-protokoll vi visar den känslighet och reproducerbarhet analysen som ett verktyg för att analysera och kvantifiera intravasation, gripande, extravasering, och kolonisering som enskilda delar av metastaser.

Watch this Scientific Journal Video about Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model at JoVE.com

Quantitative Analysis of Cancer Metastasis using an Avian Embryo Model

Använda kvantitativ PCR, visar vi hur de väletablerade chick CAM-modell som kan användas för att kvantitativt analysera metastasering av humana tumörceller till avlägsna organ.

Kvantitativ analys av cancer metastaser med hjälp av en aviär Embryo Modell

During metastasis cancer cells disseminate from the primary tumor, invade into surrounding tissues, and spread to distant organs. Metastasis is a complex ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Medicine

Unit 1

Cancer

SCIENTISTS IN ACTION

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

En Orthotopic Modell av murina blåscancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Quantitative Visualization and Detection of Skin Cancer Using Dynamic Thermal Imaging

Kvantitativa Visualisering och detektion av hudcancer Använda dynamiska Värmekameror

In 2010 approximately 68,720 melanomas will be diagnosed in the US alone, with around 8,650 resulting in death 1. To date, the only effective treatment ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

In vivo bioluminescence avbildning av tumör Hypoxi Dynamics i bröstcancer metastaser i hjärnan i en musmodell

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

Multi-modal Imaging av angiogenes i en Naken råtta modell av bröstcancer skelettmetastaser med magnetkamera, Volumetric datortomografi och ultraljud

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Models of Bone Metastasis

Modeller för benmetastaser

Bone metastases are a common occurrence in several malignancies, including breast, prostate, and lung. Once established in bone, tumors are responsible ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

En Orthotopic blåscancer modell för Gene Delivery Studier

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Använda kvantitativ realtids-PCR för att avgöra Engraftment donatorcellen i en konkurrenskraftig Murine Bone Marrow Transplantation Modell

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Quantitative Multispectral Analysis Following Fluorescent Tissue Transplant for Visualization of Cell Origins, Types, and Interactions

Kvantitativ Multispectral Analys Efter Lysrör Tissue Trans för visualisering av Cell Origins, typer, och interaktioner

With the desire to understand the contributions of multiple cellular elements to the development of a complex tissue; such as the numerous cell types that ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

En Orthotopic Murina Model of Human Prostate cancer metastaser

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Cerebrospinal Fluid MicroRNA Profiling Using Quantitative Real Time PCR

Cerebrospinalvätska MikroRNA Profilering Med kvantitativa realtid-PCR

MicroRNAs (miRNAs) constitute a potent layer of gene regulation by guiding RISC to target sites located on mRNAs and, consequently, by modulating their ...