Name: flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas
Uploaded: 2011-07-01T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas at JoVE.com

Работа выполнена при поддержке Национального института здоровья гранта: PO1 HL55798 (в КЛ) и Американской кардиологической ассоциации ученых грантов на цели развития 0525532U (Е. Г.).

1. Выделение мышиной аорты Институциональный комитет IACUC утверждении процедуры, необходимые для работы с мышами. <ol><li> Подготовка heparinzed PBS путем добавления 1000 единиц гепарина натрия до 50 мл PBS и обращения трубки перемешать. Подготовка пустые трубки коллекцию для крови и ?...

<ol>
	<li>Lusis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Atherosclerosis.">Atherosclerosis.</a> Nature. 407, 233-2341 (2000).</li><li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+and+inflammatory+mechanisms+of+atherosclerosis.">Immune and inflammatory mechanisms of atherosclerosis.</a> Annu Rev Immunol. 27, 165-197 (2009).</li><li>Hansson, G. K., Libby, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+immune+response+in+atherosclerosis:+a+double-edged+sword.">The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword.</a> Nat Rev Immunol. 6, 508-519 (2006).</li><li>Galkina, E., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leukocyte+influx+in+atherosclerosis.">Leukocyte influx in atherosclerosis.</a> Curr Drug Targets. 812, 1239-1248 (2007).</li><li>Bonanno, E., Mauriello, A., Partenzi, A., Anemona, L., Spagnoli, L. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry+analysis+of+atherosclerotic+plaque+cells+from+human+carotids:+a+validation+study.">Flow cytometry analysis of atherosclerotic plaque cells from human carotids: a validation study.</a> Cytometry. 39, 158-165 (2000).</li><li>Liu-Wu, Y., Svenningsson, A., Stemme, S., Holm, J., Wiklund, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+analysis+of+macrophage-derived+foam+cells+from+human+atherosclerotic+lesions+by+using+a+"mock"+FL3+channel+in+flow+cytometry.">Identification and analysis of macrophage-derived foam cells from human atherosclerotic lesions by using a "mock" FL3 channel in flow cytometry.</a> Cytometry. 29, 155-164 (1997).</li><li>Galkina, E., Kadl, A., Sanders, J., Varughese, D., Sarembock, I. J., Ley, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymphocyte+recruitment+into+the+aortic+wall+before+and+during+development+of+atherosclerosis+is+partially+L-selectin+dependent.">Lymphocyte recruitment into the aortic wall before and during development of atherosclerosis is partially L-selectin dependent.</a> J Exp Med. 203, 1273-1282 (2006).</li><li>Tung, J. W., Parks, D. R., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Herzenberg, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+approaches+to+fluorescence+compensation+and+visualization+of+FACS+data.">New approaches to fluorescence compensation and visualization of FACS data.</a> Clin Immunol. 110, 277-283 (2004).</li><li>Smith, E., Prasad, K. M., Butcher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blockade+of+interleukin-17A+results+in+reduced+atherosclerosis+in+apolipoprotein+E-deficient+mice.">Blockade of interleukin-17A results in reduced atherosclerosis in apolipoprotein E-deficient mice.</a> Circulation. 121, 1746-1755 (2010).</li><li>Eid, R. E., Rao, D. A., Zhou, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interleukin-17+and+interferon-gamma+are+produced+concomitantly+by+human+coronary+artery-infiltrating+T+cells+and+act+synergistically+on+vascular+smooth+muscle+cells.">Interleukin-17 and interferon-gamma are produced concomitantly by human coronary artery-infiltrating T cells and act synergistically on vascular smooth muscle cells.</a> Circulation. 119, 1424-1432 (2009).</li></ol>

Здесь мы представляем потока цитометрии Метод, основанный на исследовании иммунного клеточного состава мышиных аорты. Основным преимуществом этого метода является способность анализировать аорты иммунных клеток на одном уровне клеток и, чтобы охарактеризовать состояние активации ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> Материал </td><td> Номер в каталоге </td><td> Компания </td></tr><tr><td> Коллагеназа XI </td><td> C7657 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Гиалуронидаза </td><td> H3506 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> ДНКазы I, тип 2 </td><td> D4527 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Я Коллагеназа </td><td> C0130 </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Коллагеназы II </td><td> LS004174 </td><td> Уортингтон Биохимические корпорации </td></tr><tr><td> Эластазы </td><td> LS002292 </td><td> Уортингтон Биохимические корпорации </td></tr></tbody></table>

flow cytometry analysis of immune cells within murine aortas

Атеросклероз является хроническим воспалительным процессом среднего и большого размера судов, которое характеризуется образованием бляшки, состоящие из пены клетки, клетки иммунной системы, сосудистых эндотелиальных и гладкомышечных клеток, тромбоцитов, внеклеточного матрикса и богатых липидами ядро ​​с обширным некрозом и фиброз окружающих тканей. 1 врожденного и адаптивного руки иммунном ответе принимают участие в инициировании, разработке и настойчивость атеросклероза. 2, 3 Существует значительное количество доказательств того, что различные подмножества иммунных клеток, таких как макрофаги, дендритные клетки, Т-и В-лимфоцитов, присутствуют в пределах здоровых аорты и атеросклероз подверженных мышей 4. Кроме того, клетки иммунной системы находятся в окружающем аорты адвентиции что предполагает важную роль этой ткани в атерогенеза 2. В течение некоторого времени, количественного определения различных типов иммунных клеток, их статус активации и клеточного состава в стенке аорты была ограничена RT-PCR и иммуногистохимических методов исследования атеросклероза. Мало были предприняты попытки выполнить проточной цитометрии с использованием человеческой аорты, а также ряд проблем, таких как высокая аутофлюоресценция, были зарегистрированы 5,6. Человек атеросклеротических бляшек переваривали коллагеназы 1, а свободные ячейки были собраны и окрашены для CD14 + / + CD11c выделить макрофагами клеток, полученных из пены. В этом исследовании, &quot;ложный&quot; канал используется, чтобы избежать ложноположительных окрашиванию. 6 некротические материалов накапливается в процессе пищеварения приводят в большое количество мусора, который генерирует высокий аутофлюоресценция в аорте образцов. Чтобы решить эту проблему, группа отрицательный и положительный контроли была предложена, но только двойного окрашивания могут быть применены в этих образцах. Мы разработали новый проточной цитометрии Метод, основанный 7 для анализа иммунных клеточного состава и характеризуют активации, пролиферации, дифференцировки клеток иммунной системы у здоровых и атеросклероза подверженных аорты. Этот метод позволяет исследовать иммунную состав ячейки стенки аорты и открывает возможности использования широкого спектра иммунологические методы исследования иммунной аспекты этого заболевания.

Watch this Scientific Journal Video about Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas at JoVE.com

Flow Cytometry Analysis of Immune Cells Within Murine Aortas

Эта статья представляет проточная цитометрия основе метод для исследования иммунного состав аорты. Документ также показывает дополнительную технику, которая позволяет изучения окружающих и адвентиции стенки сосуда отдельно. Этот метод открывает возможности для выполнения фенотипических анализов аорты лейкоцитов и применить несколько иммунологических анализов для исследования атеросклероза.

Проточной цитометрии анализа иммунных клеток мышей В аорты

Atherosclerosis is a chronic inflammatory process of medium and large size vessels that is characterized by the formation of plaques consisting of foam ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Measuring Calpain Activity in Fixed and Living Cells by Flow Cytometry

Измерение кальпаин деятельности в фиксированных и живых клеток методом проточной цитометрии

Calpains are ubiquitous intracellular, calcium-sensitive, neutral cysteine proteases 1. Calpains play crucial roles in many physiological processes, ...

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Human In Vitro Suppression as Screening Tool for the Recognition of an Early State of Immune Imbalance

Человек In Vitro Борьбе как инструмент для скрининга Признание ранней стадии иммунного дисбаланса

Regulatory T cells (Tregs) are critical mediators of immune tolerance to self-antigens. In addition, they are crucial regulators of the immune response ...

Flow Cytometric Isolation of Primary Murine Type II Alveolar Epithelial Cells for Functional and Molecular Studies

Проточной цитометрии Выделение первичных мышиных Type II альвеолярных эпителиальных клеток для функционального и молекулярных исследований

Throughout  the last years, the contribution of alveolar type II epithelial cells (AECII)  to various aspects of immune regulation in the lung has been ...

Intracellular Staining and Flow Cytometry to Identify Lymphocyte Subsets within Murine Aorta, Kidney and Lymph Nodes in a Model of Hypertension

Внутриклеточные Окрашивание и проточной цитометрии для идентификации субпопуляций лимфоцитов в пределах мышиной аорте, почек и лимфатических узлов в модели артериальной гипертензии

It is now well known that T lymphocytes play a critical role in the development of several cardiovascular diseases1,2,3,4,5. For example, studies from our ...

Qualitative and Quantitative Analysis of the Immune Synapse in the Human System Using Imaging Flow Cytometry

Качественный и количественный анализ иммунной синапсов в системе человека с использованием визуализации проточной цитометрии

The immune synapse is the area of communication between T cells and antigen-presenting cells (APCs). T cells polarize surface receptors and proteins ...

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Isolation and In Vitro Culture of Murine and Human Alveolar Macrophages

Изоляции и в пробирке культуры мышиных и человека альвеолярные макрофаги

Alveolar macrophages are terminally differentiated, lung-resident macrophages of prenatal origin. Alveolar macrophages are unique in their long life and ...

Discrimination of Seven Immune Cell Subsets by Two-fluorochrome Flow Cytometry

Дискриминации в семи подмножеств иммунных клеток, два флюрохром проточная цитометрия

Immune cell characterization heavily relies on multicolor flow cytometry to identify subpopulations based on differential expression of surface markers. ...

Preparation of Whole Bone Marrow for Mass Cytometry Analysis of Neutrophil-lineage Cells

Подготовка цельного костного мозга для анализа массовой цитометрии нейтрофил-линейных клеток

In this article, we present a protocol that is optimized to preserve neutrophil-lineage cells in fresh BM for whole BM CyTOF analysis. We utilized a ...

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Isolation of Mouse Kidney-Resident CD8+ T cells for Flow Cytometry Analysis

Изоляция мыши Почки-Резидент CD8 -Т-клетки для анализа цитометрии потока

Tissue-resident memory T cell (TRM) is a rapidly expanding field of immunology research. Isolating T cells from various non-lymphoid tissues is one of the ...

Analysis of SAMHD1 Restriction by Flow Cytometry in Human Myeloid U937 Cells

Анализ ограничения SAMHD1 с помощью проточной цитометрии в миелоидных клетках человека U937

Sterile &#945;-motif/histidine-aspartate domain-containing protein 1 (SAMHD1) inhibits replication of HIV-1 in quiescent myeloid cells. U937 cells are ...