Name: single drosophila ommatidium dissection and imaging
Uploaded: 2011-08-19T12:00:00
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Damos las gracias a Bernard Charroux para los debates. Este trabajo fue financiado por la Escuela de Biomédica ley de Kirchhoff.

1. La disección de la retina Drosophila <ol><li> Llenar una y de un portaobjetos de vidrio de 3 Bueno con tampón fosfato salino (PBS 1X), y luego vuela por anestesiar a CO 2. Tanto hombres como mujeres pueden ser utilizados para este experimento. </li><li> Una vez que las moscas son anestesiados, recoger una mosca con unas pinzas y colocarlo en el plato pequeño de PBS. </li><li> Bajo un microscopio de disección, una pizca de la trompa con pinzas, y luego separar la cabeza del cuerpo si se rompe...

     

<ol>
	<li>Marsh, J. L., Thompson, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+in+the+study+of+neurodegenerative+disease.">Drosophila in the study of neurodegenerative disease.</a> Neuron. 52, 169-178 (2006).</li><li>Mizushima, N., Levine, B., Cuervo, A. M., Klionsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autophagy+fights+disease+through+cellular+self-digestion.">Autophagy fights disease through cellular self-digestion.</a> Nature. 451, 1069-1075 (2008).</li><li>Nisoli, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurodegeneration+by+polyglutamine+Atrophin+is+not+rescued+by+induction+of+autophagy.">Neurodegeneration by polyglutamine Atrophin is not rescued by induction of autophagy.</a> Cell Death Differ. 17, 1577-1587 (2010).</li><li>Charroux, B., Fanto, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+fine+line+between+waste+disposal+and+recycling:+DRPLA+fly+models+illustrate+the+importance+of+completing+the+autophagy+cycle+for+rescuing+neurodegeneration.">The fine line between waste disposal and recycling: DRPLA fly models illustrate the importance of completing the autophagy cycle for rescuing neurodegeneration.</a> Autophagy. 6, 667-669 (2010).</li><li>Hardie, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Voltage-sensitive+potassium+channels+in+Drosophila+photoreceptors.">Voltage-sensitive potassium channels in Drosophila photoreceptors.</a> J Neurosci. 11, 3079-3095 (1991).</li><li>Lee, T., Luo, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mosaic+analysis+with+a+repressible+cell+marker+(MARCM)+for+Drosophila+neural+development.">Mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) for Drosophila neural development.</a> Trends in neurosciences. 24, 251-254 (2001).</li><li>Xu, T., Rubin, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+genetic+mosaics+in+developing+and+adult+Drosophila+tissues.">Analysis of genetic mosaics in developing and adult Drosophila tissues.</a> Development. 117, 1223-1237 (1993).</li><li>Gambis, A., Dourlen, P., Steller, H., Mollereau, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-color+in+vivo+imaging+of+photoreceptor+apoptosis+and+development+in+Drosophila.">Two-color in vivo imaging of photoreceptor apoptosis and development in Drosophila.</a> Dev Biol. 351, 128-1234 (2011).</li><li>Napoletano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyglutamine+Atrophin+provokes+neurodegeneration+in+Drosophila+by+repressing+fat.">Polyglutamine Atrophin provokes neurodegeneration in Drosophila by repressing fat.</a> The EMBO journal. 30, 945-958 (2011).</li><li>Ravikumar, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+mTOR+induces+autophagy+and+reduces+toxicity+of+polyglutamine+expansions+in+fly+and+mouse+models+of+Huntington+disease.">Inhibition of mTOR induces autophagy and reduces toxicity of polyglutamine expansions in fly and mouse models of Huntington disease.</a> Nature. 36, 585-595 (2004).</li><li>Zou, S., Meadows, S., Sharp, L., Jan, L. Y., Jan, Y. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+study+of+aging+and+oxidative+stress+response+in+Drosophila+melanogaster.">Genome-wide study of aging and oxidative stress response in Drosophila melanogaster.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97, 13726-13731 (2000).</li></ol>

La disección omatidio único que aquí se presenta permite la recolección de información de celda más profunda sobre los procesos biológicos como la neurodegeneración, cuando el modelo en el ojo de Drosophila. Las neuronas fotorreceptoras son más accesibles que otras neuronas y el citoplasma es muy grande, y por lo tanto adecuado para estudiar la dinámica de la vesícula, en las células del mismo utilizado eficientemente en muchos modelos para cuantificar la neurodegeneración en vivo. El aspe...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre del reactivo </th><th> Empresa </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentarios (opcional) </th></tr><tr><td> Dispensador de CO2 portátil </td><td> Flystuff </td><td> 59-150 </td><td> Recambios disponibles </td></tr><tr><td> Pinzas DUMONT n º 5 </td><td> AGAR Científico </td><td> T5034 </td><td></td></tr><tr><td> 3-Bueno portaobjetos de vidrio </td><td> EMS </td><td> 71561-01 </td><td></td></tr><tr><td> Micro tijeras </td><td> VWR </td><td> HAMMHSB516-09 </td><td></td></tr><tr><td> Medio de Schneider </td><td> VWR </td><td> 733-1663 </td><td></td></tr><tr><td> LysoTracker Red DND-99 </td><td> Invitrogen </td><td> L7528 </td><td></td></tr><tr><td> Superfrost Diapositivas </td><td> VWR </td><td> 631-0108 </td><td></td></tr><tr><td> Vectashield con DAPI </td><td> Vector de Laboratorios </td><td> H-1200 </td><td></td></tr><tr><td> Cubreobjetos </td><td> VWR </td><td> 631-1336 </td><td></td></tr></tbody></table>

single drosophila ommatidium dissection and imaging

La mosca de la fruta Drosophila melanogaster ha hecho valiosas contribuciones a la investigación en neurociencias y ha sido utilizado ampliamente como un modelo para las enfermedades neurodegenerativas por su poderosa genética 1. El ojo de la mosca, en particular, ha sido el órgano de elección para la investigación neurodegeneración, siendo la parte más accesible y la vida puede prescindir de la Drosophila sistema nervioso. Sin embargo, la principal advertencia de los ojos intactos, es la dificultad, debido a la intensa autofluorescencia de los pigmentos, en los eventos de formación de imágenes intracelulares, como la dinámica de la autofagia 2, que son fundamentales para la comprensión de la neurodegeneración. Recientemente, hemos utilizado la disección y la cultura de un solo omatidios 3 que ha sido esencial para nuestra comprensión de las disfunciones autofagia en un modelo de vuelo de Dentatorubro-Pallidoluysian atrofia (DRPLA) 3, 4. Ahora el informe una descripción completa de esta técnica (Fig. 1), una adaptación de los estudios electrofisiológicos 5, que es probable que se expanda enormemente la posibilidad de volar por los modelos de neurodegeneración. Este método puede ser adaptado a la imagen en vivo eventos subcelulares y para supervisar la administración de fármacos eficaces en las células fotorreceptoras (Fig. 2). Si se utiliza en combinación con las técnicas del mosaico de 6-8, las respuestas de las células genéticamente diferentes se analizaron en paralelo (Fig. 2).

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Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

El factor limitante en el uso de los adultos<em&gt; Drosophila</emLos ojos&gt; para estudiar la neurodegeneración y la biología celular es la imagen difícil de procesos intracelulares. Se describe la disección de omatidios solo para generar una bona-fide cultivo primario de células neuronales, que pueden ser sometidos a un tratamiento de drogas y de imagen avanzada.

Solo Drosophila Omatidio disección e Imagen

The fruit fly Drosophila melanogaster has made invaluable contributions to neuroscience research and has been used widely as a model for neurodegenerative ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Single Sensillum Recordings in the Insects Drosophila melanogaster and Anopheles gambiae

Grabaciones solo Sensillum en los insectos Drosophila melanogaster Y Anopheles gambiae</em

The sense of smell is essential for insects to find foods, mates, predators, and oviposition sites3. Insect olfactory sensory neurons (OSNs) are enclosed ...

Investigación

Neurociencias

Dissection and Imaging of Active Zones in the Drosophila Neuromuscular Junction

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La disección y la imagen de zonas activas en el Drosophila La unión neuromuscular

The Drosophila  larvae neuromuscular junction (NMJ) is an excellent model for the study of synaptic structure and function. Drosophila  is well known for ...

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La disección e inmunohistoquímica de larva, pupa y adulto<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinas

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For many animals, hunger promotes changes in the olfactory system in a manner that facilitates the search for appropriate food sources. In this video ...

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Disección De Fibras Musculares Esqueléticas Individuales Para Análisis Inmunofluorescentes Y Morfométricos De Las Uniones Neuromusculares De Montaje Completo

The neuromuscular junction (NMJ) is a specialized point of contact between the motor nerve and the skeletal muscle. This peripheral synapse exhibits high ...