Name: development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery
Uploaded: 2011-06-23T12:00:00
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우리는 브리타 휸, Guihua 일, 해리스 Soifer 및 도움이 토론에 대한 리사 쉐러 감사합니다. CHO - EE 및 CHO - gp160 셀 :이 작품은 NIH AIDS 연구 및 참조 시약 프로그램, AIDS 학부, NIAID, NIH를 통해 얻은되었습니다 보건 AI29329 다음과 같은 시약을 JJR에게 수여 HL07470 국립 연구소에서 보조금에 의해 지원되었다 라인, pNL4 - 3 륙 벡터, DAIDS, NIAID에서 HIV - 1 gp120 발.

1. RNA 라이브러리의 준비 <ol><li> 시작 DNA 라이브러리는 임의의 순서의 50 세포핵를 포함하고 통합 DNA 기술 (코랄빌 아이오와)에 의해 합성되었다. N 50 - - 전투 편대 ACG ACT CGC CCG A - 3 &#39;(81 NT) AGG ACG ATG CGG 단일 좌초된 DNA oligo 라이브러리 시퀀스는 5&#39; - GGG입니다. 임의의 지역은 T7의 체외의 해독에 대한 발기인 및 RT - PCR을위한 3 &#39;태그를 포함한 지속적인 지역의 어귀이다. 5 &#39;와...

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	<li>Tuerk, C., Gold, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+evolution+of+ligands+by+exponential+enrichment:+RNA+ligands+to+bacteriophage+T4+DNA+polymerase.">Systematic evolution of ligands by exponential enrichment: RNA ligands to bacteriophage T4 DNA polymerase.</a> Science. 249, 505-510 (1990).</li><li>Ellington, A. D., Szostak, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+selection+of+RNA+molecules+that+bind+specific+ligands.">In vitro selection of RNA molecules that bind specific ligands.</a> Nature. 346, 818-822 (1990).</li><li>Robertson, D. L., Joyce, G. 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관내는 따라서 타겟 분자 8 매우 구체적이고 꽉 바인딩을 제공하고, 구체적이고 안정 입체 형태를 가정 핵산을 진화에 Aptamers 있습니다. 낮은 nanomolar 구속력 친화력과 목표를 aptamers의 절묘한 특이성은 생체내 이미징 및 치료제 9, 진단을 위해 다양한 도구를합니다. 타겟 siRNA 전달을위한 aptamer 기술의 도래와 함께 이제 siRNAs 10-12의 수용체 매개 end...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 (옵션) </th></tr><tr><td> MF - Millipore 막 필터 </td><td> Millipore </td><td> HAWP01300 </td><td> 기공 크기는 0.45 μm의 </td></tr><tr><td> Swinnex 필터 홀더 </td><td> Millipore </td><td> SX0001300 </td><td> 13mm 직경 </td></tr><tr><td> QIAquick 겔 추출 키트 </td><td> QIAGEN </td><td> 28,706 </td><td> DNA 정화 </td></tr><tr><td> Microcon YM - 30 칼럼 </td><td> Millipore </td><td> 42,410 </td><td> RNA 농도 </td></tr><tr><td> 바이오 스핀 30 열 </td><td> 바이오 래드 </td><td> 732-6250 </td><td> RNA 정화 </td></tr><tr><td> DNA 형성 촉매의 DNA PCR 효소 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> D1806 </td><td></td></tr><tr><td> RT - PCR ThermoScript 시스템 </td><td> Invitrogen </td><td> 11146-024 </td><td></td></tr><tr><td> T7의 전사 키트 DuraScribe </td><td> EpiCentre </td><td> DS010925 </td><td></td></tr><tr><td> PCR을위한 dNTP </td><td> 로체 </td><td> 1 581 295 </td><td></td></tr><tr><td> Ribonucleic 산, E.coli에서 전송 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> R1753 </td><td> tRNA의 경쟁 </td></tr><tr><td> HIV - 1 바 - L gp120 단백질 </td><td> 에이즈 연구 및 참조 시약 프로그램 </td><td> 4961 </td><td> 타겟 단백질 </td></tr><tr><td> 소음기의 siRNA 라벨 키트 - Cy3 </td><td> 앰비온 </td><td> 1632 </td><td></td></tr><tr><td> 산성 페놀 / 클로로포름 1분의 5 솔루션 (산도 4.5) </td><td> 앰비온 </td><td> AM9720 </td><td></td></tr><tr><td> 클로로포름 / 이소프로판올 1분의 24 솔루션 </td><td> 시그마 </td><td> C0549 </td><td></td></tr><tr><td> 카프 장 인산 가수 분해 효소 (CIP) </td><td> 뉴 잉글랜드 BioLab </td><td> M0290L </td><td></td></tr><tr><td> T4 폴리 뉴클레오 타이드 키나제 </td><td> 뉴 잉글랜드 BioLab </td><td> M0201L </td><td></td></tr><tr><td> 글리코겐 </td><td> 로체 </td><td> 10 901 393 001 </td><td> RNA 침전 </td></tr><tr><td> 감마 - P 32 - ATP </td><td> MP 바이오 메디컬 </td><td> 013502002 </td><td> Radiactivity </td></tr><tr><td> 40% AccuGel 19시 1분 </td><td> 국립 진단 </td><td> EC - 850 </td><td></td></tr><tr><td> 10xTBE </td><td> 국립 진단 </td><td> EC - 860 </td><td></td></tr><tr><td> N, N, N, N&#39; - Tetramethylethylenediamine (TMEMD) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> T9281 </td><td></td></tr><tr><td> 암모늄 persulfate (APS) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> A3678 </td><td></td></tr><tr><td> L - methioine sulfoximine </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> M5379 - 250 MG </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 미디어 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 11835-030 </td><td></td></tr><tr><td> 나트륨 비카보네이트 솔루션, 7.5 % W / V </td><td> Invitrogen </td><td> 25080-094 </td><td></td></tr><tr><td> 최소 필수 중간 (멤) (10 ) </td><td> Invitrogen </td><td> 11430-030 </td><td></td></tr><tr><td> 멤이 아닌 필수 아미노산 (100 ) </td><td> Invitrogen </td><td> 11140-050 </td><td></td></tr><tr><td> PCR 2.1 TA 클로닝 키트 </td><td> Invitrogen </td><td> K2040 - 01 </td><td></td></tr></tbody></table>

development of cell-type specific anti-hiv gp120 aptamers for sirna delivery

HIV 감염의 글로벌 전염병은 antiretroviral 대리인의 새로운 클래스를위한 긴급한 필요를 만들었습니다. 보완 RNA의 성적 표현을 억제하는 작은 간섭 (SI) RNAS의 강력한 기능은 HIV를 포함하여 질병의 다양한 치료제의 새로운 클래스로 악용되고있다. 많은 이전의 보고서 소설 RNAi 기반 anti-HIV/AIDS 치료 전략이 상당한 약속을하는 것으로 나타났습니다, 그러나, 성공적인 치료 응용 프로그램과 siRNAs의 임상 번역에 대한 주요 장애물은 효율적으로 전달됩니다. 특히, RNAi 기반 치료제의 안전성과 효능을 고려하여, 그것은 특정 세포 집단 또는 조직에 타겟 세포 siRNA 전달 방법을 개발하기 위해 매우 바람직합니다. HIV - 1 gp120 단백질, HIV - 1의 표면에 당단백질 봉투는 CD4 세포에 바이러스 항목에 중요한 역할을합니다. HIV - 1 항목을 촉발 요인과 세포 융합을 시작 것을 gp120과 CD4의 상호 작용은 약물 발견을위한 임상 관련 안티 바이러스 전략으로 검증되었습니다. 여기에, 우리는 첫째로 2&#39; - F 수정된 안티 HIV gp120 RNA의 aptamers의 선택과 신분증을 토론합니다. 종래의 nitrocellulose 필터 SELEX 방법을 사용 nanomolar 친화력과 함께 여러 가지 새로운 aptamers는 50 무작위 NT RNA 라이브러리에서 고립되었다. 성공적으로 높은 친화력과 바운드 종 얻기 위해서는, 선택의 엄중는 신중하게 조건을 조정하여 제어됩니다. 선택한 aptamers은 특별히 바인딩할 수 있고 빠르게 HIV - 1 봉투 단백질을 표현하는 세포로 internalized 수 있습니다. 또한, 혼자 aptamers는 HIV - 1 감염을 중화시킬 수 있습니다. 최고의 aptamer A - 1을 기반으로, 우리는 aptamer와 siRNA의 부분이 모두 강력한 항정 HIV 활동을 갖고있는 키메라 소설 이중 억제 기능을 방지 gp120 aptamer - siRNA를 만듭니다. 또한, 우리는 HIV - 1 감염 세포에 siRNA의 세포 유형 특정 배달 gp120 aptamer - siRNA의 chimeras를 활용. 키메라이 듀얼 기능은, 억제 HIV - 1 감염의 다양한 핵산 치료 요원 (aptamer와 siRNA) 결합 매우 적극적인 antiretroviral 치료 (HAART)을 실패한 환자에 대한 aptamer - siRNA의 chimeras에게 매력적인 치료 후보를 만들기위한 상당한 잠재력을 보여줍니다.

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Development of Cell-type specific anti-HIV gp120 aptamers for siRNA delivery

nanomole 친화력과 HIV - 1Ba - L gp120에 대한 몇 가지 2&#39; - 플루오로 RNA의 aptamers는 RNA 라이브러리에서에 의해 고립 아르<em&gt; 체외에서</em&gt; SELEX 절차. 키메라 새로운 듀얼 억제 기능을 방지 gp120 aptamer - siRNA가 생성되고 체계적 안티 HIV 치료를위한 상당한 약속을 보여줍니다.

siRNA 전달을위한 셀 타입의 특정 안티 HIV gp120 aptamers의 개발

The global epidemic of infection by HIV has created an urgent need for new classes of antiretroviral agents. The potent ability of small interfering ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

Development of a Negative Selectable Marker for Entamoeba histolytica

에 대한 부정적인 선택 마커의 개발 Entamoeba histolytica</em

Entamoeba histolytica is the causative agent of amebiasis and infects up to 10% of the world's population. The molecular techniques that have enabled the ...

연구

면역학 및 감염병학

Peptide:MHC Tetramer-based Enrichment of Epitope-specific T cells

펩타이드 : 에피토프 특정 T 세포의 MHC Tetramer 기반 강화

A  basic necessity for researchers studying adaptive immunity with in vivo experimental models is an  ability to identify T cells based on their T cell ...

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

제대혈 이식을 다음과 IFN-γ 평가하기 ELISPOT 분석을 수두 - 대상 포진 바이러스 - 특정 세포 성 면역의 개발

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

장간막 림프 덕트 유관 쥐 모델 : 창자 림프 약물 운송의 평가에 응용

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Applying Fluorescence Resonance Energy Transfer (FRET) to Examine Effector Translocation Efficiency by Coxiella burnetii during siRNA Silencing

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적용 형광 공명 에너지 전달 (FRET)을하여 이펙터 전좌 효율을 검사합니다<em&gt; Coxiella burnetii의</em&gt; siRNA를 음소거시

Coxiella burnetii, the causative agent of Q fever, is an intracellular pathogen that relies on a Type IV Dot/Icm Secretion System to establish a ...

Development of a More Sensitive and Specific Chromogenic Agar Medium for the Detection of Vibrio parahaemolyticus and Other Vibrio Species

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의 검출을위한 더 민감하고 특정 원체 한천 배지의 개발<em&gt; 장염 비브리오 균</em&gt; 및 기타<em&gt; 비브리오</em&gt; 종

Foodborne infections in the US caused by Vibrio species have shown an upward trend. In the genus Vibrio, V. parahaemolyticus is responsible for the ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

자가 면역 대해 줄기 세포 유래의 항원 특이 적 조절 T 세포의 발달

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Development of an Economical DNA Delivery System by "Acufection" and its Application to Skin Research

&quot;Acufection&quot;와 피부 연구에의 응용에 의한 경제적 인 DNA 전달 시스템의 개발

Dysregulation of immune response in skin is associated with numerous human skin disorders. Direct transfer of immune-related genes into skin tissue is a ...

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High-density peptide microarrays allow screening of more than six thousand peptides on a single standard microscopy slide. This method can be applied for ...

Quantitative PCR of T7 Bacteriophage from Biopanning

Biopanning에서 t 7 살 균 소의 양이 많은 PCR

This protocol describes the use of quantitative PCR (qPCR) to enumerate T7 phages from phage selection experiments (i.e., &#34;biopanning&#34;). qPCR is a ...