Name: whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection
Uploaded: 2011-06-04T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Das beschriebene Projekt wurde von Grant Number R01HD050725 vom National Institute of Child Health and Human Development unterstützt, um TAG Der Inhalt ist ausschließlich in der Verantwortung der Autoren und stellen nicht notwendigerweise die offizielle Meinung des National Institute of Child Health and Human Development oder die National Institutes of Health. Wir danken Mitglieder der Godenschwege Labor sowie Barbara Schreader für ihren Input, um das Manuskript und Video.

1. Präparation des Bauchmark Dissection und Farbstoff Füllung des GF kann bei Raumtemperatur durchgeführt werden. Für alle Dissektion Schritte kaltem (4 ° C) Kochsalzlösung verwendet zu verlangsamen Zellstoffwechsel und halten Sie die Neuronen länger am Leben sein. <ol><li> Anesthetize erwachsenen Fliegen (4 Tage oder älter) mit CO 2 oder Chill sie auf Eis, bis sie immobilisiert sind. Betäubende mit Eis erfordert mehr Zeit (bis zu 30 min) wird aber die Fliegen länger i...

<ol>
	<li>Power, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+thoracico-abdominal+nervous+system+of+an+adult+insect+Drosophila+melanogaster.">The thoracico-abdominal nervous system of an adult insect Drosophila melanogaster.</a> J. Comp. Neurol. 88, 347-409 (1948).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A., Tanouye, T. A., Phelan, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+an+escape:+development+and+function+of+the+Drosophila+giant+fibre+system.">Making an escape: development and function of the Drosophila giant fibre system.</a> Semin. Cell Dev. Biol. 17, 31-41 (2006).</li><li>Boerner, J., Duch, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Average+shape+standard+atlas+for+the+adult+Drosophila+ventral+nerve+cord.">Average shape standard atlas for the adult Drosophila ventral nerve cord.</a> J. Comp. Neurol. 518, 2437-2455 (2010).</li><li>Gu, H., O'Dowd, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cholinergic+synaptic+transmission+in+adult+Drosophila+Kenyon+cells+in+sity.">Cholinergic synaptic transmission in adult Drosophila Kenyon cells in sity.</a> J. Neurosci. 26, 265-272 (2006).</li><li>Boerner, J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+for+the+Drosophila+ventral+nerve+cord+standard+in+neuronal+circuit+reconstruction+and+in-depth+analysis+of+mutant+morphology.">Application for the Drosophila ventral nerve cord standard in neuronal circuit reconstruction and in-depth analysis of mutant morphology.</a> J. Neurogent. 24, 158-1567 (2010).</li><li>Godenschwege, T. A., Kristiansen, L. V., Uthaman, S. B., Hortsch, M., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+conderved+role+for+Drosophila+Neuroglian+and+human+L1-CAM+in+central-synapse+formation.">A conderved role for Drosophila Neuroglian and human L1-CAM in central-synapse formation.</a> Curr. Biol. 16, 12-23 (2006).</li><li>Uthaman, S. B., Godenschwege, T. A., Murphey, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mechanism+distinct+from+highwire+for+the+Drosophila+ubiquitin+conjugase+bendless+in+synaptic+growth+and+maturation.">A mechanism distinct from highwire for the Drosophila ubiquitin conjugase bendless in synaptic growth and maturation.</a> J. Neurosci. 28, 8615-8623 (2008).</li><li>Storkebaum, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+mutations+in+the+tyrosyl-tRNA+synthetase+gene+recapitulate+in+Drosophila+features+of+human+Charcot-Marie-Tooth+neuropathy.">Dominant mutations in the tyrosyl-tRNA synthetase gene recapitulate in Drosophila features of human Charcot-Marie-Tooth neuropathy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 106, 11782-11787 (2009).</li><li>Allen, M. J., Godenschwege, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+recordings+from+the+Drosophila+giant+fiber+system+(GFS).">Electrophysiological recordings from the Drosophila giant fiber system (GFS).</a> Cold Spring Harb. Protoc. 2010, pdb.prot5453-pdb.prot5453 (2010).</li><li>Augustin, H., Allen, M. J., Partridge, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrophysiological+Recordings+from+the+Giant+Fiber+Pathway+of+D.+melanogaster.">Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster.</a> J. Vis. Exp. , (2011).</li></ol>

Das Nervensystem kann ohne es zu extrahieren aus dem Körper fliegen seziert werden. Dies hat zwei Vorteile, erstens, bewirkt, dass die Zergliederung wenig Schaden für das Nervensystem, und zweitens, die meisten Nerven angeschlossen bleiben, um die Muskeln und Sinnesorgane. Durchführen der Dissektion, wie beschrieben, bereitet die Proben für geradlinig Farbstoff-Kennzeichnung der GFS. Günstig, bleiben die Motoneuronen postsynaptischen der GF an die Muskeln. Axone, also unbeschädigt sind, halten die Neuronen länger...

<table border="1"><tbody><tr><th> Name des Reagenzes </th><th> Firma </th><th> Katalog-Nummer </th><th> Kommentare </th></tr><tr><td> Sylgard 184 Silikon-Elastomer-Kit </td><td> Dow Corning </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Dissektionsmikroskop </td><td> AmScope </td><td> SM-2TZ </td><td></td></tr><tr><td> Vannas Scissors Superfine </td><td> Academic Instruments </td><td> VS1023 </td><td></td></tr><tr><td> Dumont Pinzetten Dumontstar 55 </td><td> Feine Science Tools </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr><tr><td> Austerlitz Insect Pins </td><td> Feine Science Tools </td><td> 26002-10 </td><td> Ø 0,1 mm </td></tr><tr><td> Borosilikatglas Elektroden </td><td> World Precision Instruments </td><td> 1B100F-4 </td><td></td></tr><tr><td> Vertical Pipette Puller 700c </td><td> David Kopf Instruments </td><td> Modell 700C </td><td></td></tr><tr><td> Lucifer Yellow CH Dilithiumsalz </td><td> Sigma </td><td> L0259 </td><td> 1% in H 2 O </td></tr><tr><td> Fixed Stage aufrechten Mikroskop und Kamera </td><td> Nikon </td><td> FN-1 &amp; DS-U2-Kamera </td><td></td></tr><tr><td> Plan Fluor 10x Air Ziel </td><td> Nikon </td><td> CFI Plan Fluor 10x NA 0.3 WD 16mm </td><td></td></tr><tr><td> Fluor 40x Wasser getaucht Ziel </td><td> Nikon </td><td> CFI Fluor 40x W NA 0,80 WD 2,0 mm </td><td></td></tr><tr><td> 3D-hydraulischen Mikromanipulator </td><td> Narishige Internationalen </td><td> Modell MW0-3 </td><td></td></tr><tr><td> Verstärker </td><td> Erste Instruments, Inc. </td><td> Modell 5A </td><td></td></tr></tbody></table>

whole mount preparation of the adult drosophila ventral nerve cord for giant fiber dye injection

Zur Analyse der axonalen und dendritischen Morphologie von Neuronen, ist es wichtig, die genaue Kennzeichnung von neuronalen Strukturen zu erhalten. Vorbereitung gut markierten Proben mit wenig bis gar keine Gewebeschäden ermöglicht es uns, Zellmorphologie zu analysieren und einzelne Proben miteinander zu vergleichen, so die Möglichkeit, die Identifizierung von Mutanten Anomalien. In der Sektion zeigte Methode des Nervensystems bleibt meist im Inneren des Erwachsenen fliegen. Durch eine dorsale Inzision, sind der Bauch und Brustkorb geöffnet und die meisten der inneren Organe entfernt werden. Nur die Rückenseite des Bauchmark (VNC) und der Hals-Binde (CVC) mit den großen Axone der riesigen Fasern (GF) 1 ausgesetzt sind, während das Gehirn mit dem GF Zellkörper und Dendriten bleibt 2 in der intakten Kopf . In dieser Vorbereitung die meisten Nerven des VNC sollte, um ihre Muskeln verbunden bleiben. Nach der Präparation wird die intrazelluläre Befüllung der riesigen Glasfaser (GF) mit einem fluoreszierenden Farbstoff nachgewiesen. In der CVC die GF Axone sind an der dorsalen Oberfläche liegt und somit können leicht sichtbar unter dem Mikroskop mit Differential-Interferenz-Kontrast (DIC) Optik. Dies ermöglicht die Injektion des GF Axone mit Farbstoff an dieser Stelle auf die gesamte GF einschließlich der Axone und ihre Terminals in den VNC-Label. Diese Methode führt zu zuverlässigen und starken Färbung der GF so dass die Neuronen, um sofort nach dem Befüllen mit einer epifluoreszenten Mikroskop abgebildet werden. Alternativ kann die Fluoreszenz-Signal verstärkt mit Standard-Immunhistochemie Verfahren 3 geeignet für hohe Auflösung der konfokalen Mikroskopie werden.

Watch this Scientific Journal Video about Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection at JoVE.com

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Ein<em&gt; In vivo</em&gt; Dissektion der erwachsenen<em&gt; Drosophila</em&gt; Bauchmark (VNC) ist bewiesen. Diese besondere Dissektion Methode verursacht kaum Schäden an den VNC ermöglicht die spätere Kennzeichnung des riesigen Faser Neuronen mit Fluoreszenzfarbstoff für hochauflösende Bildgebung.

Ganze Berge Vorbereitung des Adult Drosophila Bauchmark für Giant Fiber Injection Dye

To analyze the axonal and dendritic morphology of neurons, it is essential to obtain accurate labeling of neuronal structures. Preparing well labeled ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Whole Mount Preparation of the Adult Drosophila Ventral Nerve Cord for Giant Fiber Dye Injection

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualization of the Embryonic Nervous System in Whole-mount Drosophila Embryos

Visualisierung des embryonalen Nervensystems in Whole-mount Drosophila Embryos

The Drosophila embryo is an attractive model system for investigating the cellular and molecular basis of neuronal development. Here we describe the ...

Forschung

Neurowissenschaften

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Electrophysiological Recordings from the Giant Fiber Pathway of D. melanogaster

Elektrophysiologischen Ableitungen aus dem Riesen-Fiber Pathway der D. melanogaster</em

When startled adult D. melanogaster react by jumping into the air and flying away. In many invertebrate species, including D. melanogaster, the "escape" ...

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Paired Nanoinjection and Electrophysiology Assay to Screen for Bioactivity of Compounds using the Drosophila melanogaster Giant Fiber System

Gepaart Nanoinjection und Elektrophysiologie-Test zum Screening auf Bioaktivität der Verbindungen unter Verwendung des Drosophila melanogaster Riesen-Fiber System

Screening compounds for in vivo activity can be used as a first step to identify candidates that may be developed into pharmacological agents1,2. We ...

Reproducible Mouse Sciatic Nerve Crush and Subsequent Assessment of Regeneration by Whole Mount Muscle Analysis

Reproduzierbare Maus Ischiasnerv Crush und anschließende Bewertung der Regeneration von Whole mount Muskelanalyse

Regeneration in the peripheral nervous system (PNS) is widely studied both for its relevance to human disease and to understand the robust regenerative ...

DiI-Labeling of DRG Neurons to Study Axonal Branching in a Whole Mount Preparation of Mouse Embryonic Spinal Cord

DiI-Markierung von DRG-Neuronen zu Study Axonal Branching in einer Whole Mount Vorbereitung von embryonalen Maus-Spinal Cord

Here we  present a technique to label the trajectories of small groups of DRG neurons  into the embryonic spinal cord by diffusive staining using the ...

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Dissection of the Transversus Abdominis Muscle for Whole-mount Neuromuscular Junction Analysis

Zerlegung des Transversus Abdominis Muskels für die neuromuskuläre Junction-Analyse

Analysis of neuromuscular junction morphology can give important insight into the physiological status of a given motor neuron. Analysis of thin flat ...

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Whole Mount Immunolabeling of Olfactory Receptor Neurons in the Drosophila Antenna

Ganze Berge Immunmarkierung der olfaktorischen Rezeptorneuronen in der<em&gt; Drosophila</em&gt; Antennen

Odorant molecules bind to their target receptors in a precise and coordinated manner. Each receptor recognizes a specific signal and relays this ...

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

An In Vitro Adult Mouse Muscle-nerve Preparation for Studying the Firing Properties of Muscle Afferents

Ein<em&gt; In-vitro-</em&gt; Adult Maus Muskel-Nerven Vorbereitung für das Studium der Brenneigenschaften des Muskel-Afferenzen

Muscle sensory neurons innervating muscle spindles and Golgi tendon organs encode length and force changes essential to proprioception. Additional ...

Whole Mount Dissection and Immunofluorescence of the Adult Mouse Cochlea

Ganze Berge Dissection und Immunfluoreszenz der erwachsenen Maus Cochlea

The organ of Corti, housed in the cochlea of the inner ear, contains mechanosensory hair cells and surrounding supporting cells which are organized in a ...

The Preparation of Oblique Spinal Cord Slices for Ventral Root Stimulation

Die Herstellung von Oblique Spinal Cord Slices für Ventralwurzel Stimulation

Electrophysiological recordings from spinal cord slices have proven to be a valuable technique to investigate a wide range of questions, from cellular to ...