Name: subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice
Uploaded: 2011-09-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة العضلات الضمور ، ورابطة (NS062320).

1. تحت الجلد إدارة الخصوم أستيل المسكارينية (mAChR) مستقبلات <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد تحت ظروف معقمة الجرعة المناسبة من خصم mAChR ، (راجع ، الجدول) عن طريق تذويب المخدرات في المياه المالحة الفسيولوجية العقيمة في أنبوب 1.5mL رد فعل. الخصوم التالي?...

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

الطريقة المعروضة هنا تصاريح التحقيق في أدوار غير المعترف بها في وقت سابق من mAChR - سلالة معينة يشير في الاستقرار وصيانة NMJs الثدييات. وسوف يكون هذا الأسلوب مفيدا أيضا لاختبار تأثير عوامل عصبية وكلاء الدوائية. على سبيل المثال ، وجدت أن لدينا مختبر الهدبية عامل التغذية ال...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> اسم كاشف </th><th> شركة </th><th> فهرس العدد </th><th> تعليقات </th></tr><tr><td> الكيتامين </td><td> هوسبيرا </td><td> NDC0409 - 2051-05 </td><td> الجرعة : 120mg/kg </td></tr><tr><td> زيلازين </td><td> مختبرات لويد </td><td> LA33806 </td><td> الجرعة : 8mg/kg </td></tr><tr><td> الأتروبين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A0132 </td><td> (&gt; نقاء 98 ٪) ؛ الجرعة : 0.2mg/kg -- 20mg/kg </td></tr><tr><td> الأتروبين </td><td> فويجت التوزيع العالمي </td><td> AT105 </td><td> الصيدلانية الصف </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M105 </td><td> الجرعة : 100 -- 400M </td></tr><tr><td> 4 الرطب </td><td> سيغما الدريخ </td><td> D142 </td><td> الجرعة : 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX - 116 </td><td> العلوم البيولوجية Tocris </td><td> 1105 </td><td> 250M </td></tr><tr><td> AFDX - 384 </td><td> العلوم البيولوجية Tocris </td><td> 1345 </td><td> 50M -- 500M </td></tr><tr><td> MT 7 </td><td> الببتيدات الدولية </td><td> PMT - 4340 - S </td><td> 0.1M -- 1M </td></tr><tr><td> التخزين المؤقت 1X الفوسفات المالحة ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> الصياد </td><td> T353 - 500 </td><td> جعل حل 10 ٪ أول من حل 10g/100mL غير المتأينة الماء المقطر ، وجعل 4 ٪ مع 1X PBS ، وضبط درجة الحموضة إلى 7.4 </td></tr><tr><td> pentobarbitol الصوديوم </td><td> Virbac صحة الحيوان </td><td> NDC - 051311 - 050 - 01 </td><td> الجرعة : 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> داو كورننغ </td><td> جزء # 184 </td><td> اتبع التعليمات التي تأتي مع المجموعة ، ويمكن استخدام طبق ثقافة متعددة الحجم (30mm ، 60mm ، 100mm) ، تبعا للاحتياجات </td></tr><tr><td> 0.1M جليكاين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> G - 7126 </td><td> إضافة إلى 0.185g 25mL 2 ٪ BSA / PBS </td></tr><tr><td> 2 ٪ ألبومين المصل البقري (BSA 2 ٪) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> A3059 - 100G </td><td> 2G الى حل جيش صرب البوسنة من 100ML 1X PBS </td></tr><tr><td> 0.2 ٪ X100 تريتون في 2 ٪ BSA / PBS (حظر مؤقت) </td><td> سيغما الدريخ </td><td> T9284 - 100ML </td><td> حل 0.2ml/100mL 2 ٪ BSA / PBS </td></tr><tr><td> α - بنغاروتوكسين </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> استخدامها في تركيز 1:200 </td></tr><tr><td> SMI - 312 </td><td> Monoclonals Sternberger </td><td> SMI312 </td><td> استخدامها في تركيز 1:1000 </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> الدراسات التنموية ورم هجين الضفة </td><td> SV2 - الطافي (Supernatant) </td><td> استخدامها في تركيز 01:10 </td></tr><tr><td> S100 </td><td> داكو </td><td> Z0311 </td><td> استخدامها في تركيز 1:400 </td></tr><tr><td> FITC الماعز المضادة للماوس IgG1 </td><td> روش </td><td> 03117731001 </td><td> استخدامها في تركيز 1:200 ، ولكن إذا خلفية عالية ، محاولة 1:400 </td></tr><tr><td> الكسا - 647 فلور الماعز مترافق المضادة للأرنب </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> استخدامها في تركيز 1:200 </td></tr><tr><td> Vectashield الفلورسنت تصاعد وسائل الإعلام </td><td> ناقلات المختبرات </td><td> H - 1000 </td><td> هذه ليست وسائل الاعلام الثابت المحدد ، وسوف تحتاج لتأمين تغطية زلة مع طلاء الأظافر واضحة. </td></tr><tr><td> مقصات صغيرة الربيع </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> تشريح ملقط </td><td> أدوات العلوم غرامة </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

وكثيرا ما تستخدم عضلات الأطراف الخلفية من القوارض ، مثل الساق الأمامية والظنبوبي ، لفي الدراسات الدوائية المجراة من الإشارات الأساسية لتشكيل وصيانة NMJs الثدييات. ومع ذلك ، فإن تغلغل المخدرات في هذه العضلات بعد تحت الجلد أو في العضل الإدارة غالبا ما تكون ناقصة او غير مستوية وNMJs كثيرة يمكن أن تبقى غير متأثرة. على الرغم من أن الإدارة النظامية مع الأجهزة مثل المضخات الصغيرة يمكن أن تحسن من آثار spatiotemporal ، لا يمكن للطبيعة الغازية لهذا النهج يسبب التباس الاستجابات الالتهابية و / أو أضرار مباشرة في العضلات. وعلاوة على ذلك ، وتحليل كامل للNMJs في العضلة الخلفية أطرافهم يمثل تحديا لأنه يتطلب وقتا طويلا sectioning immunostaining المسلسل واسعة النطاق. وLAL الماوس رقيقة ، ورقة مسطحة من العضلات الموجودة بشكل سطحي على ظهر الرقبة. فهو سريع نشل وظائف العضلات التي لتحريك الصيوان. أنه يحتوي على أجزاء منقاري والذيلية التي تنشأ من خط الوسط من الجمجمة ويمتد أفقيا إلى جزء غضروفي كل الصيوان. ويتم تزويد عضلة من قبل فرع من العصب الوجهي أن المشاريع caudally فور خروجها من الثقبة الإبرية الخشائية. لقد تم العثور على LAL وغيرها لتكون مريحة استعدادا التي توفر مزايا للتحقيق في المديين القصير والطويل الأجل في آثار المخدرات على الجسم الحي NMJs والعضلات. أولا ، وموقعها سطحية يسهل تطبيقات محلية متعددة من المخدرات تحت تخدير خفيف. الثانية ، لركاكة (2-3 طبقات من ألياف العضلات) تصاريح التصور والتحليل لNMJs كلها تقريبا داخل العضلات. ثالثا ، سهولة مع تشريح الأعصاب سليمة لها جنبا إلى جنب مع نمط تعصيب لها تصاريح التحليل التكميلي في المختبر 9،5 الكهربية. الماضي ، وربما الأهم من ذلك ، حجم صغير تطبيق (~ 50μl) تغطي بسهولة على سطح العضلة بأكملها ، ويوفر موحدة والتعرض المطول للNMJs به جميعا في المخدرات ويلغي الحاجة إلى اتباع نهج متسق 1،8.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

نحن تصف الإجراءات اللازمة لإدارة المتكررة من مثبطات المسكارينية يشير إلى الرافعة الأذن الطويلة (LAL) عضلات الفئران البالغين الشباب وimmunostaining لاحقة من التقاطعات في الاعصاب (NMJs) في wholemounts. عضلة LAL ومزايا فريدة للكشف عن<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; التأثيرات الدوائية على NMJs.

تحت الجلد إدارة الخصوم والمسكارينية الثلاثي Immunostaining من إبهام العضلة الرافعة أوريس في الفئران

Hind limb muscles of rodents, such as gastrocnemius and tibialis anterior, are frequently used for in vivo  pharmacological studies of the signals ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

تقييم الالفاظ بالموجات فوق الصوتية خلال مخدرات الذاتي الإدارة في الفئران

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

الشفوي إدارة روتنون باستخدام بالتزقيم وتحليل صورة الفا synuclein الادراج في الجهاز العصبي المعوي

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

متحد البؤر التصوير الطيفي من المستقبلات النيكوتينية الموسومة Fluorescently في نوك في الفئران مع الإدارة النيكوتين المزمن

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

تصور في Proprioceptors<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; يرقات وشرانق

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Microdialysis من الإيثانول خلال فعال الإيثانول الإدارة الذاتية والايثانول تقرير بواسطة جهاز الكروماتوجرافي الغازي

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

استقبال الحس العميق والتوتر المستقبلات في اطراف سرطان البحر: تمارين مختبر طالبة

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

طريقة بسيطة وغير مكلفة لتحديد الباردة الحساسية والتكيف في الفئران

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

التصوير الفيديو وخرائط الزمانية المكانية لتحليل الجهاز الهضمي على الحركة في الفئران

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

بروتوكول "الإدارة في الوقت الحقيقي" في الرنين المغناطيسي الوظيفي Neurofeedback التدريب

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Recording Brain Electromagnetic Activity During the Administration of the Gaseous Anesthetic Agents Xenon and Nitrous Oxide in Healthy Volunteers

تسجيل النشاط الكهرومغناطيسي الدماغ أثناء إدارة زينون وكلاء مخدر الغازية وأكسيد النيتروز في المتطوعين صحية

Anesthesia arguably provides one of the only systematic ways to study the neural correlates of global consciousness/unconsciousness. However to date most ...