Name: subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice
Uploaded: 2011-09-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי ניוון שרירים האגודה, NIH (NS062320).

1. תת עורי מתן muscarinic קולטן האצטילכולין (mAChR) היריבים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן בתנאים aseptic את המינון המתאים של אנטגוניסט mAChR, (ראה לוח) על ידי המסת התרופה מלח פיזיולוגית סטרילית בצינור התגובה 1.5mL. היריבים הבאים שימשו: אטרופין, Methoctramine, 4 לח, AFDX-116,...

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

השיטה המוצגת כאן היתרי חקירה של תפקידים מוכרים בעבר של mAChR-תת ספציפיים איתות ביציבות ותחזוקה של NMJs יונקים. שיטה זו תהיה גם שימושית כדי לבדוק את ההשפעות של גורמים neurotrophic וסוכני תרופתי. לדוגמה, המעבדה שלנו מצאו כי פקטור neurotrophic ריסי (CNTF) שהושרו מבצבצות כמעט כל מסופי LAL העצ...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><th> שם מגיב </th><th> חברה </th><th> מספר קטלוגי </th><th> תגובות </th></tr><tr><td> קטמין </td><td> Hospira </td><td> NDC0409-2051-05 </td><td> מנה: 120mg/kg </td></tr><tr><td> xylazine </td><td> לויד מעבדות </td><td> LA33806 </td><td> מנה: 8mg/kg </td></tr><tr><td> אטרופין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> A0132 </td><td> (&gt; טוהר 98%); מנה: 0.2mg/kg - 20mg/kg </td></tr><tr><td> אטרופין </td><td> וויגט גלובל הפצה </td><td> AT105 </td><td> התרופות כיתה </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> M105 </td><td> מנה: 100 - 400M </td></tr><tr><td> 4 לח </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> D142 </td><td> מנה: 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX-116 </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 1105 </td><td> 250 </td></tr><tr><td> AFDX-384 </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 1345 </td><td> 50 - -500 </td></tr><tr><td> MT 7 </td><td> פפטידים הבינלאומי </td><td> PMT-4340-s </td><td> 0.1M - 1M </td></tr><tr><td> פוספט 1X שנאגרו pH מלוחים, 7.4 </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> דיג </td><td> T353-500 </td><td> הפוך את הפתרון של 10% לראשונה על ידי המסת מים 10g/100mL דה מיונן מזוקקים; לעשות 4% עם 1X PBS, כדי להתאים את ה-pH 7.4 </td></tr><tr><td> Pentobarbitol נתרן </td><td> Virbac לבריאות בעלי חיים </td><td> NDC-051311-050-01 </td><td> מנה: 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Dow Corning </td><td> חלק # 184 </td><td> עקוב אחר ההוראות המצורפות בערכה, ניתן להשתמש תרבות מרובים צלחת בגודל (30 מ&quot;מ, 60 מ&quot;מ, 100 מ&quot;מ), בהתאם לצרכים </td></tr><tr><td> 0.1M גליצין </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> G-7126 </td><td> הוסף 0.185g כדי 25mL של 2% BSA / PBS </td></tr><tr><td> 2% שור בסרום אלבומין (BSA 2%) </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> A3059-100 </td><td> ממיסים 2g BSA לתוך 100 מ&quot;ל של 1X PBS </td></tr><tr><td> טריטון X100 0.2% ב 2% BSA / PBS (Buffer חסימה) </td><td> סיגמא אולדריץ </td><td> T9284-100 מ&quot;ל </td><td> ממיסים 0.2ml/100mL 2% BSA / PBS </td></tr><tr><td> α-bungarotoxin </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> שימוש בריכוז של 1:200 </td></tr><tr><td> SMI-312 </td><td> Sternberger Monoclonals </td><td> SMI312 </td><td> שימוש בריכוז של 1:1000 </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> התפתחותית מחקרים Hybridoma בנק </td><td> SV2-Supernatant </td><td> שימוש בריכוז של 1:10 </td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td> שימוש בריכוז של 1:400 </td></tr><tr><td> FITC-עיזים אנטי עכבר IgG1 </td><td> רוש </td><td> 03117731001 </td><td> שימוש בריכוז של 1:200, אבל אם הרקע הוא גבוה, לנסות 1:400 </td></tr><tr><td> אלקסה, פלואוריד 647 עיזים מצומדות נגד ארנב </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> שימוש בריכוז של 1:200 </td></tr><tr><td> Vectashield פלורסנט הרכבה התקשורת </td><td> וקטור מעבדות </td><td> H-1000 </td><td> זה לא קשה להגדיר התקשורת, תצטרך להבטיח את פליטת לכסות עם לק ברור. </td></tr><tr><td> האביב מספריים קטנים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> Dissection מלקחיים </td><td> המדע כלים פיין </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

שרירי הגפיים האחוריות של מכרסמים, כגון הגסטרוקנמיוס ו tibialis הקדמי, משמשים לעתים קרובות במחקרים פרמקולוגיים vivo של אותות חיוני ליצירת ותחזוקה של NMJs יונקים. עם זאת, חדירת התרופה לתוך השרירים הללו לאחר תת עורית או תוך שרירית הממשל היא לעתים קרובות לא שלם או אחיד NMJs רבים יכולים נותרות בעינן. אמנם הממשל מערכתית עם מכשירים כגון מיני משאבות יכולים לשפר את ההשפעות spatiotemporal, אופי פולשני של גישה זו עלולה לגרום תגובות דלקתיות בלבול ו / או נזק לשרירים ישיר. יתר על כן, ניתוח מלא של NMJs בשריר הגפיים האחוריות הוא מאתגר, מכיוון שהיא דורשת זמן רב חתך סדרתי immunostaining נרחב. LAL העכבר הוא סדין דק, שטוח של שריר הממוקם על שטחי dorsum של הצוואר. הוא עווית שריר מהיר שמתפקד להעביר את פינה. הוא מכיל חלקים מקורי ואת הזנב שמקורם קו האמצע של הגולגולת ולהרחיב רוחבית לחלק סחוסי של כל פינה. השריר מסופק על ידי ענף של עצב הפנים כי פרויקטים caudally מיד עם יציאתו foramen stylomastoid. אנו ואחרים מצאו LAL להיות הכנה נוח כי יתרונות לחקירת הן קצרות וארוכות טווח vivo השפעות של תרופות על NMJs והשרירים. ראשית, המיקום שלה שטחית מקלה יישומים מקומיים רבים של תרופות תחת הרדמה קלה. שנית, הרזון שלה (2-3 שכבות של סיבי שריר) היתרי להדמיה וניתוח של כמעט כל NMJs בתוך השריר. שלישית, את קלות לנתח את זה עם שלם העצב שלה יחד עם דפוס של העצבוב שלו מאפשר ניתוח משלים אלקטרו במבחנה 9,5. לאחרונה, ואולי הכי חשוב, נפח להחיל קטן (~ 50μl) בקלות מכסה את פני השטח כולו שרירים, ומספק חשיפה אחידה וממושכת של כל NMJs שלה לתרופה מבטלת את הצורך בגישה מערכתית 1,8.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

אנו מתארים נהלים לניהול חוזרות ונשנות של מעכבי איתות muscarinic כדי longus levator auris (LAL) השרירים של עכברים בוגרים צעירים עבור immunostaining הבאות של צמתים neuromuscular שלה (NMJs) ב wholemounts. השריר LAL יש יתרונות ייחודיים עבור חושף<em&gt; In vivo</em&gt; השפעות פרמקולוגיות על NMJs.

תת עורי מינהל היריבים Muscarinic ו Triple-Immunostaining של השריר Levator Longus Auris של עכברים

Hind limb muscles of rodents, such as gastrocnemius and tibialis anterior, are frequently used for in vivo  pharmacological studies of the signals ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

הערכת קולות Ultrasonic במהלך והתרופות עצמית הממשל חולדות

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

אוראלית של Rotenone באמצעות Gavage וניתוח מקדימה של Alpha-synuclein תכלילים במערכת העצבים enteric

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

דימות ספקטרלי Confocal של קולטנים ניאציניות מתויג fluorescently ב עקום בעכברים עם מינהל ניקוטין כרונית

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

ויזואליזציה של Proprioceptors ב<em&gt; תסיסנית</em&gt; זחלים וגלמים

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Microdialysis של אתנול במהלך אתנול נחישות ממשל עצמי ואתנול אופרנטית על ידי גז כרומטוגרפיה

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

רצפטורים פרופריוספציה והמתח בסרטן איברים: תרגילי מעבדה הסטודנטים

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

שיטה פשוטה וזולה לקביעה קרה רגישות והסתגלות בעכברים

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

הדמיה וידאו ומפות Spatiotemporal לנתח תנועתיות מערכת העיכול של עכברים

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

פרוטוקול עבור fMRI ניהול בזמן אמת Neurofeedback אימונים

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Recording Brain Electromagnetic Activity During the Administration of the Gaseous Anesthetic Agents Xenon and Nitrous Oxide in Healthy Volunteers

פעילות אלקטרומגנטית הקלטה של המוח במהלך כהונתו של סוכנים הרדמה גז Xenon ו תחמוצת החנקן מתנדבים בריאים

Anesthesia arguably provides one of the only systematic ways to study the neural correlates of global consciousness/unconsciousness. However to date most ...