Name: subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice
Uploaded: 2011-09-08T13:00:00
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यह काम पेशी Dystrophy एसोसिएशन, एनआईएच, (NS062320) द्वारा समर्थित किया गया.

1. Muscarinic acetylcholine रिसेप्टर गरम (mAChR) के चमड़े के नीचे प्रशासन <ol><li> 1.5mL प्रतिक्रिया ट्यूब में बाँझ शारीरिक खारा में दवा भंग करके सड़न रोकनेवाला mAChR प्रतिपक्षी की उचित खुराक की स्थिति, (cf., टेबल) के तहत तैयार करें. पीछा ...

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

यहाँ प्रस्तुत विधि subtype विशेष स्तनधारी NMJs की स्थिरता और रखरखाव में संकेत mAChR के पहले से अपरिचित भूमिका की जांच परमिट. इस विधि भी उपयोगी हो neurotrophic कारकों और औषधीय एजेंटों के प्रभाव का परीक्षण करेंगे. उदाहरण क?...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th><th> टिप्पणियाँ </th></tr><tr><td> ketamine </td><td> Hospira </td><td> NDC0409 - +२०५१-05 </td><td> खुराक: 120mg/kg </td></tr><tr><td> xylazine </td><td> लॉयड प्रयोगशालाओं </td><td> LA33806 </td><td> खुराक: 8mg/kg </td></tr><tr><td> atropine </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> A0132 </td><td> (&gt; 98% शुद्धता) खुराक: 0.2mg/kg - 20mg/kg </td></tr><tr><td> atropine </td><td> Voigt ग्लोबल वितरण </td><td> AT105 </td><td> औषधि ग्रेड </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> M105 </td><td> खुराक: 100 - 400m </td></tr><tr><td> 4-नम </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> D142 </td><td> खुराक: 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX - 116 </td><td> बायोसाइंस Tocris </td><td> 1105 </td><td> 250M </td></tr><tr><td> AFDX - 384 </td><td> बायोसाइंस Tocris </td><td> 1345 </td><td> 50M - 500M </td></tr><tr><td> 7 मीट्रिक टन </td><td> अंतर्राष्ट्रीय पेप्टाइड्स </td><td> PMT-4340-s </td><td> 0.1M - 1M </td></tr><tr><td> 1X फास्फेट खारा, 7.4 पीएच buffered </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> मछुआ </td><td> T353-500 </td><td> 10g/100mL de-ionized आसुत जल भंग करके 10% पहले हल करें, 1X पीबीएस के साथ 4%, 7.4 पीएच को समायोजित </td></tr><tr><td> Pentobarbitol सोडियम </td><td> Virbac पशु स्वास्थ्य </td><td> एनडीसी - +०,५१,३११-050-01 </td><td> खुराक: 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> डॉव Corning </td><td> 184 # पार्ट </td><td> निर्देश है कि किट के साथ आने का पालन करें, एकाधिक संस्कृति डिश आकार (30mm, 60mm, 100mm) का उपयोग कर सकते हैं जरूरतों के आधार पर </td></tr><tr><td> 0.1M Glycine </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> जी 7126 </td><td> जोड़ें 0.185g 2% BSA / पीबीएस के 25ml </td></tr><tr><td> 2% गोजातीय सीरम albumin (2% BSA) </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> A3059-100g </td><td> 1X पीबीएस के 100ml में 2g BSA भंग </td></tr><tr><td> 0.2% 2% में ट्राइटन X100 / BSA पीबीएस (अवरुद्ध बफर) </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> T9284-100ml </td><td> 0.2ml/100mL 2% BSA / पीबीएस भंग </td></tr><tr><td> α-bungarotoxin </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> 1:200 की एकाग्रता में प्रयोग </td></tr><tr><td> SMI-312 </td><td> Sternberger Monoclonals </td><td> SMI312 </td><td> 1:1000 की एकाग्रता में प्रयोग </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> विकासात्मक अध्ययन हाइब्रिडोमा बैंक </td><td> SV2 - सतह पर तैरनेवाला </td><td> 1:10 की एकाग्रता में प्रयोग </td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td> 1:400 की एकाग्रता में प्रयोग </td></tr><tr><td> FITC बकरी IgG1 विरोधी माउस </td><td> रॉश </td><td> 03117731001 </td><td> 1:200 की एकाग्रता में प्रयोग करें, लेकिन यदि उच्च पृष्ठभूमि है, 1:400 कोशिश </td></tr><tr><td> एलेक्सा Fluor 647 संयुग्मित विरोधी खरगोश बकरी </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> 1:200 की एकाग्रता में प्रयोग </td></tr><tr><td> Vectashield फ्लोरोसेंट बढ़ते मीडिया </td><td> वेक्टर प्रयोगशालाओं </td><td> एच 1000 </td><td> यह एक कठिन सेट मीडिया नहीं है, आप स्पष्ट नेल पॉलिश के साथ कवर पर्ची सुरक्षित की आवश्यकता होगी. </td></tr><tr><td> लघु स्प्रिंग कैंची </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> विच्छेदन संदंश </td><td> ललित विज्ञान उपकरण </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

Gastrocnemius और tibialis पूर्वकाल जैसे कृन्तकों, हिंद अंग मांसपेशियों अक्सर स्तनधारी NMJs के गठन और रखरखाव के लिए आवश्यक संकेतों के vivo में औषधीय अध्ययन के लिए उपयोग किया जाता है. हालांकि, इन मांसपेशियों में चमड़े के नीचे या इंट्रामस्क्युलर प्रशासन के बाद दवा पैठ अक्सर अधूरी है या असमान और कई NMJs अप्रभावित रह सकता है. हालांकि मिनी पंप के रूप में इस तरह के उपकरणों के साथ प्रणालीगत प्रशासन spatiotemporal प्रभाव में सुधार कर सकते हैं, इस दृष्टिकोण का आक्रामक स्वभाव confounding भड़काऊ प्रतिक्रियाओं और / या प्रत्यक्ष मांसपेशियों की क्षति पैदा कर सकता है. इसके अलावा, पिछले अंग मांसपेशियों में NMJs का पूरा विश्लेषण चुनौती दे रहा है क्योंकि यह समय लेने वाली धारावाहिक सेक्शनिंग और व्यापक immunostaining की आवश्यकता है. माउस लाल मांसपेशियों की एक पतली, फ्लैट शीट पर गर्दन के dorsum अल्पज्ञता स्थित है. यह एक तेजी से चिकोटी मांसपेशियों है कि कार्यों सुफ़ना स्थानांतरित करने के लिए. यह कि cranium के midline से उत्पन्न और प्रत्येक सुफ़ना की नरम हड्डी भाग के लिए laterally विस्तार व्याख्यान चबूतरे वाला और दुम भाग होते हैं. मांसपेशियों चेहरे तंत्रिका कि यह stylomastoid रंध्र से बाहर निकालता है के रूप में caudally परियोजनाओं की एक शाखा के द्वारा आपूर्ति की है. हम और दूसरों के लिए एक सुविधाजनक तैयारी है कि NMJs और मांसपेशियों पर दवाओं के vivo प्रभाव में दोनों छोटी और लंबी अवधि की जांच के लिए लाभ प्रदान करता है लाल पाया है. सबसे पहले, अपने सतही स्थान प्रकाश संज्ञाहरण के तहत दवाओं के कई स्थानीय अनुप्रयोगों की सुविधा है. दूसरा, इसके thinness (मांसपेशी फाइबर के 2-3 परतों) और मांसपेशियों के भीतर लगभग सभी NMJs के दृश्य विश्लेषण परमिट. तीसरा, यह इसकी तंत्रिका बरकरार साथ अपने innervation के पैटर्न के साथ एक साथ विदारक आसानी 9,5 इन विट्रो में पूरक electrophysiological विश्लेषण परमिट . अंतिम है, और शायद सबसे महत्वपूर्ण बात, एक छोटे से लागू मात्रा (~ 50μl) आसानी से पूरे मांसपेशियों की सतह को कवर, एक समान और लंबे समय तक अपने सभी NMJs की दवा के लिए जोखिम प्रदान करता है और एक प्रणालीगत 1,8 दृष्टिकोण के लिए की आवश्यकता eliminates.

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Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

हम दोहराया muscarinic संकेतन के inhibitors के levator AURIS (लाल) longus युवा वयस्क चूहों की मांसपेशियों के लिए प्रशासन के लिए और अपने neuromuscular जंक्शनों के बाद wholemounts में (NMJs) immunostaining के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन. लाल मांसपेशी खुलासा करने के लिए अद्वितीय फायदे हैं<em&gt; Vivo में</em&gt; NMJs पर औषधीय प्रभाव है.

Muscarinic गरम के चमड़े के नीचे प्रशासन और Levator AURIS Longus बलवान चूहे में ट्रिपल Immunostaining

Hind limb muscles of rodents, such as gastrocnemius and tibialis anterior, are frequently used for in vivo  pharmacological studies of the signals ...

Research

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Neuroscience

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

अल्ट्रासोनिक vocalizations चूहे में स्व - प्रशासन औषधि के दौरान मूल्यांकन

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लगातार निकोटीन प्रशासन के साथ चूहे तोड़े fluorescently टैग निकोटिनिक रिसेप्टर्स की वर्णक्रमीय इमेजिंग confocal

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