Name: subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice
Uploaded: 2011-09-08T13:00:00
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이 작품은 근육질 영양 장애 협회, NIH (NS062320)에 의해 지원되었다.

1. muscarinic 아세틸콜린 수용체 (mAChR) antagonists의 피하 관리 <ol><li> 1.5mL 반응 관에 멸균 생리 식염수에 마약을 분해하여 무균 조건 mAChR 길항제의 적절한 복용량 (참조하라, 테이블)에서 준비합니다. 다음 antagonists 사용되었습니다 아트로 핀, Methoctramine, 4 축축한, AFDX - 116, AFDX - 384, MT 7. </li><li> a1cc 인슐린 주사기로 솔루션의 50μl를 그려 각 마우스에 대해 별도의 주사기를 사용합니다. 또한 전용 컨트...

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

여기서 제시하는 방법은 포유 동물 NMJs의 안정성과 유지 보수에 신호 subtype 특정 mAChR의 이전에 인식되지 않는 역할의 조사를 허용합니다. 이 방법은 또한 neurotrophic 요인과 약리 대리인의 효과를 테스트하기 위해 도움이 될 것입니다. 예를 들어, 저희 연구실은 Ciliary Neurotrophic 팩터 (CNTF)는 성인 생쥐의 거의 모든 랄 신경 터미널에서 돋아 elicited 것으로 나타났습니다 <a>1</a> . 이 결과는 CA에서 돋아 ...

<table border="1"><tbody><tr><th> 시약의 이름 </th><th> 회사 </th><th> 카탈로그 번호 </th><th> 댓글 </th></tr><tr><td> 마취제 </td><td> Hospira </td><td> NDC0409 - 2051-05 </td><td> 복용량 : 120mg/kg </td></tr><tr><td> xylazine </td><td> 로이드 레버 토리스 </td><td> LA33806 </td><td> 복용량 : 8mg/kg </td></tr><tr><td> 아트로 핀 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> A0132 </td><td> (&gt; 98 % 순도); 복용 : 0.2mg/kg - 20mg/kg </td></tr><tr><td> 아트로 핀 </td><td> 보이트 글로벌 유통 </td><td> AT105 </td><td> 제약 학년 </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> M105 </td><td> 복용량 : 100 - 400M </td></tr><tr><td> 4 - 습기 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> D142 </td><td> 복용량 : 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX - 116 </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 1105 </td><td> 250M </td></tr><tr><td> AFDX - 384 </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 1345 </td><td> 50M - 500 미터 </td></tr><tr><td> MT 7 </td><td> 펩티드 국제 </td><td> PMT - 4340 - S </td><td> 0.1M - 1M </td></tr><tr><td> 1X 인산은 살린, 산도 7.4 버퍼 </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> 어부 </td><td> T353 - 500 </td><td> 10g/100mL 드 이온화 증류수를 용해하여 처음 10 %의 솔루션을 만들어, 1X PBS로 4 % 수 있도록, 7.4으로 산도를 조절 </td></tr><tr><td> pentobarbitol 나트륨 </td><td> Virbac 동물 보건 </td><td> NDC - 051311 - 050-01 </td><td> 복용량 : 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> 다우 코닝 </td><td> 부품 # 184 </td><td> 필요에 따라 (30mm, 60mm, 100mm) 크기의 여러 문화 요리를 사용할 수 키트와 함께 지시 사항을 따르십시오 </td></tr><tr><td> 0.1M 글리신 </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> G - 7126 </td><td> 추가 2% BSA / PBS의 0.185g을 25mL </td></tr><tr><td> 2퍼센트 소 혈청 알부민 (2 % BSA) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> A3059 - 100g </td><td> 1X PBS의 100mL에 2g BSA를 디졸브 </td></tr><tr><td> 2퍼센트에서 0.2 % 트리톤 X100 BSA / PBS (차단 버퍼) </td><td> 시그마 - 알드리치 </td><td> T9284 - 100mL </td><td> 0.2ml/100mL 2% BSA / PBS를 디졸브 </td></tr><tr><td> α - bungarotoxin </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> 1:200의 농도에서 사용 </td></tr><tr><td> SMI - 312 </td><td> Sternberger의 Monoclonals </td><td> SMI312 </td><td> 1:1000의 농도에서 사용 </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> 발달 연구 브리 도마 뱅크 </td><td> SV2 - 뜨는 </td><td> 1시 10분의 농도에서 사용 </td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td> 1:400의 농도에서 사용 </td></tr><tr><td> FITC - 염소 방지 마우스 IgG1 </td><td> 로체 </td><td> 03117731001 </td><td> 1:200의 농도에서 사용하지만, 배경이 높으면, 1:400을 시도 </td></tr><tr><td> 알렉사 - 플루어 647 복합 염소 안티 - 토끼 </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> 1:200의 농도에서 사용 </td></tr><tr><td> Vectashield 형광 설치 미디어 </td><td> 벡터 실험실 </td><td> H - 1000 </td><td> 이것은 하드 세트 미디어 아니라, 당신이 투명 매니큐어로 커버 슬립을 확보해야합니다. </td></tr><tr><td> 소형 스프링 가위 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> 해부의 포셉 </td><td> 파인 과학 도구 </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

이러한 gastrocnemius 및 정강뼈 앞쪽에 같은 설치류 동물, 뒷다리의 사지 근육은 자주 포유 동물 NMJs의 형성 및 유지에 필수적인 신호의 생체내 약리 연구에 사용됩니다. 그러나, 피하 또는 근육 관리 후이 근육에 약물 침투가 종종 불완전하거나 고르지이며 많은 NMJs는 영향을받지 남아있을 수 있습니다. 이러한 미니 펌프와 같은 장치와 함께 체계적인 관리가 spatiotemporal 효과를 향상시킬 수 있지만,이 방법의 침략 자연 혼란함을 주죠 염증 반응 및 / 또는 직접 근육 손상을 일으킬 수 있습니다. 그것이 시간이 많이 걸리는 시리얼 sectioning 및 광범위한 immunostaining을 필요로하기 때문에 또한 뒷다리 근육에 NMJs 완벽하게 분석 도전이다. 마우스 랄은 목 dorsum에 피상적으로있는 근육의 얇은 평면 시트입니다. 이 기능은 날개를 이동하는 빠른 트위치 근육이다. 이것은 두개골의 정중선에서 발생한 각 날개의 연골 부분에 옆으로 확장 주동이의와 꼬리 부분을 포함하고 있습니다. 근육은 그것이 종료 stylomastoid 구멍을 같은 caudally 프로젝트 안면 신경의 한 분과로 제공됩니다. 우리와 다른 NMJs 및 근육에 약물의 생체내 효과의 단기 및 장기 모두의 조사에 대한 이점을 제공하는 편리 준비하는 랄 발견했다. 첫째, 그 표면 위치는 가벼운 마취 약품의 여러 지역의 애플 리케이션을 용이하게합니다. 둘째, 그 두께 (근육 섬유로부터 2-3 층)은 근육 내의 거의 모든 NMJs의 시각화 및 분석을 수 있습니다. 셋째, 그 innervation의 패턴과 함께 자사의 신경 손상으로 해부의 용이성은 체외 9,5에 보충 electrophysiological 분석이 이루어질 수 있습니다. 아마도 마지막으로, 그리고 가장 중요한, 작은 볼륨 적용 (~ 50μl)는 쉽게 전체 근육의 표면을 커버 약물에 모든 NMJs의 유니폼 및 장기 노출을 제공하고 체계적인 접근 1,8의 필요성을 없애줍니다.

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Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

우리는 levator auris의 longus (랄) 젊은 성인 마우스의 근육을 muscarinic 신호의 억제제의 반복 관리와 wholemounts 년에 신경근육학 분기점의 후속 immunostaining (NMJs)에 대한 절차를 설명합니다. 랄 근육이 공개에 대해 고유한 장점이 있습니다<em&gt; 생체내에</emNMJs에&gt; 약리 효과.

피하 Muscarinic Antagonists의 관리 및 마우스에 Levator Auris의 Longus 근육의 트리플 - Immunostaining

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