Name: subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice
Uploaded: 2011-09-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Эта работа была поддержана мышечной дистрофии ассоциации, NIH (NS062320).

1. Подкожное введение ацетилхолина мускариновых рецепторов (mAChR) антагонисты <ol><li> Подготовка в асептических условиях соответствующую дозу mAChR антагонист (см. таблицу) путем растворения препарата в стерильном физиологическом растворе в 1,5 мл трубки реакции. Следующие антагонистов был?...

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

Метод, представленный здесь позволяет исследовать ранее неизвестные роли подтипа конкретных mAChR сигнализации в стабильности и поддержание млекопитающих NMJs. Этот метод также будет полезна для проверки эффектов нейротрофических факторов и фармакологических агентов. Например, наши ла?...

<table border="1"><tbody><tr><th> Название реагента </th><th> Компания </th><th> Номер в каталоге </th><th> Комментарии </th></tr><tr><td> кетамин </td><td> Hospira </td><td> NDC0409-2051-05 </td><td> Доза: 120mg/kg </td></tr><tr><td> ксилазина </td><td> Ллойд лаборатории </td><td> LA33806 </td><td> Доза: 8mg/kg </td></tr><tr><td> атропин </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A0132 </td><td> (&gt; 98% чистоты); Доза: 0.2mg/kg - 20mg/kg </td></tr><tr><td> атропин </td><td> Фойгт Глобальное распределение </td><td> AT105 </td><td> Фармацевтическая класса </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M105 </td><td> Доза: 100 - 400M </td></tr><tr><td> 4-DAMP </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D142 </td><td> Доза: 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX-116 </td><td> Tocris Bioscience </td><td> 1105 </td><td> 250M </td></tr><tr><td> AFDX-384 </td><td> Tocris Bioscience </td><td> 1345 </td><td> 50M - 500M </td></tr><tr><td> MT 7 </td><td> Пептиды Международной </td><td> ПМТ-4340-х годов </td><td> 0,1 - 1M </td></tr><tr><td> 1X фосфатно-солевым буфером, рН 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> Параформальдегид </td><td> Рыболов </td><td> T353-500 </td><td> Сделать 10% раствор путем растворения первых 10g/100mL деионизированной дистиллированной водой, составляет 4% с 1X PBS, отрегулировать рН до 7,4 </td></tr><tr><td> Натрий pentobarbitol </td><td> Virbac здоровья животных </td><td> NDC-051311-050-01 </td><td> Доза: 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Dow Corning </td><td> Часть # 184 </td><td> Следуйте инструкциям, которые поставляются с комплектом, можно использовать несколько размеров блюдо культуры (30мм, 60мм, 100 мм) в зависимости от потребностей </td></tr><tr><td> 0,1 М глицин </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G-7126 </td><td> Добавить 0.185g к 25 мл 2% BSA / PBS </td></tr><tr><td> 2% бычьего сывороточного альбумина (2% BSA) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A3059-100г </td><td> Растворить 2 г в 100 мл BSA в 1X PBS </td></tr><tr><td> 0,2% Triton X100 в 2% BSA / PBS (блокирующего буфера) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9284-100 мл </td><td> Растворите 0.2ml/100mL 2% BSA / PBS </td></tr><tr><td> α-бунгаротоксина </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> Использование при концентрации 1:200 </td></tr><tr><td> SMI-312 </td><td> Sternberger моноклональных антител </td><td> SMI312 </td><td> Использование в концентрации 1:1000 </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> Развивающие Исследования Гибридома банка </td><td> SV2-Супернатант </td><td> Использование при концентрации 1:10 </td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td> Использование при концентрации 1:400 </td></tr><tr><td> FITC-антимышиного IgG1 </td><td> Roche </td><td> 03117731001 </td><td> Использование при концентрации 1:200, но если фон высокий, попробуйте 1:400 </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 647-сопряженных козьего анти-кролик </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> Использование при концентрации 1:200 </td></tr><tr><td> Vectashield флуоресцентные монтажа СМИ </td><td> Векторные лабораторий </td><td> H-1000 </td><td> Это не жесткий набор носителей, то вам нужно обеспечить покрытие скольжения прозрачным лаком ногтей. </td></tr><tr><td> Малый Ножницы весна </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> Препарирование щипцы </td><td> Инструменты изобразительных наук </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

Задние мышцы конечностей грызунов, таких как икроножной и передней большеберцовой, которые часто используются для прижизненного фармакологические исследования сигналов необходимо для формирования и поддержания млекопитающих NMJs. Тем не менее, препарат проникновения в эти мышцы после подкожного или внутримышечного введения часто неполные или неодинаковым и многие NMJs может оставаться неизменным. Хотя системное введение с таких устройств, как мини-насосы могут улучшить пространственно-временных эффектов, инвазивный характер такого подхода может вызвать смешанные воспалительные реакции и / или прямой ущерб мышцы. Более того, полный анализ NMJs в мышцу задней конечности является сложной задачей, поскольку требует много времени последовательный секционирования и обширные иммунной окраски. LAL мыши представляет собой тонкий, плоский лист мышца, расположенная поверхностно на тыльной поверхности шеи. Это быстро сокращающихся мышц, функции, чтобы перемещать ушной раковины. Он содержит ростральной и хвостовой части, которые происходят от средней линии черепа и тянутся по бокам к хрящевой части каждой ушной раковины. Мышцы поставляется ветви лицевого нерва, что проекты, каудально при выходе шилососцевидный отверстия. Мы и другие нашли LAL быть удобной подготовки, что дает преимущества для изучения как краткосрочных, так и долгосрочные в естественных условиях воздействия наркотиков на NMJs и мышц. Во-первых, его поверхностное расположение облегчает несколько локальных приложений наркотиков, находящихся под легкой анестезией. Во-вторых, своей худобой (2-3 слоев мышечных волокон) позволяет визуализации и анализа практически всех NMJs в мышцах. В-третьих, простота рассекает его с ее нетронутыми нервы вместе с образцом его иннервации позволяет дополнительного анализа электрофизиологических в пробирке 9,5. Последнее, возможно, самое главное, малый применяются объема (~ 50 мкл) легко покрывает всю поверхность мышц, обеспечивает равномерную и длительное воздействие всех его NMJs к препарату и устраняет необходимость в системном подходе 1,8.

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

Мы описываем процедуры повторных доз ингибиторов мускариновых сигнализации на Лонг поднимающей Auris (LAL) мышцы молодых взрослых мышей и для последующего иммуноокрашивания его нервно-мышечного соединения (NMJs) в wholemounts. LAL мышц имеет уникальные преимущества для выявления<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Фармакологического воздействия на NMJs.

Подкожного введения мускариновых антагонистов и Triple-Иммуноокрашивание из Лонг Levator Auris мышц у мышей

Hind limb muscles of rodents, such as gastrocnemius and tibialis anterior, are frequently used for in vivo  pharmacological studies of the signals ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Оценка Ультразвуковые Вокализации Во наркотиками Самоуправление у крыс

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

Устные Администрации Ротенон использованием принудительного кормления и анализ изображений Альфа-синуклеина включений в кишечной нервной системы

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

Спектральный конфокальной микроскопии флуоресцентно помеченный никотиновые рецепторы в плей-офф у мышей с хроническим Никотин администрации

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Визуализация проприорецепторов в<em&gt; Drosophila</em&gt; Личинки и куколки

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Микродиализ этанола в течение оперантного этанола самоуправления и определение этанола методом газовой хроматографии

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Проприоцепция и Натяжные Рецепторы в Краб конечностей: Студент лабораторных занятий

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Простой и недорогой метод для определения холодную чувствительность и адаптация в мышах

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

Видео с изображениями и Пространственно-временные Карты для анализа моторику желудочно у мышей

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Протокол для управления реального времени МР-томографию Neurofeedback подготовки

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Recording Brain Electromagnetic Activity During the Administration of the Gaseous Anesthetic Agents Xenon and Nitrous Oxide in Healthy Volunteers

Запись электромагнитной активности мозга во время администрации газообразных анестетиков Ксенон и закиси в здоровых добровольцев

Anesthesia arguably provides one of the only systematic ways to study the neural correlates of global consciousness/unconsciousness. However to date most ...