Name: subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice
Uploaded: 2011-09-08T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Bu çalışma Müsküler Distrofi Derneği, NIH (NS062320) tarafından desteklenmiştir.

1. Muskarinik asetilkolin reseptör (mAChR) antagonistleri subkutan uygulanması <ol><li> 1.5mL reaksiyon tüp içinde steril serum fizyolojik uyuşturucu eriterek mAChR antagonisti aseptik koşullarda, uygun doz, (bkz. Tablo) altında hazırlayın. Aşağıdaki antagonistleri kullanıldı: atropin, Methoctramine, 4-DAMP AFDX-116, AFDX-384, MT 7. </li><li> A1cc insülin enjektörü çözüm 50μl çizin ve her bir fare için ayrı bir şırınga kullanın. Ayrıca, sadece kontrol grubunda her fare için serum fizyoloj...

<ol>
	<li>Wright, M. C., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+is+not+required+for+terminal+sprouting+and+compensatory+reinnervation+of+neuromuscular+synapses:+re-evaluation+of+CNTF+null+mice.">Ciliary neurotrophic factor is not required for terminal sprouting and compensatory reinnervation of neuromuscular synapses: re-evaluation of CNTF null mice.</a> Exp Neurol. 205, 437-448 (2007).</li><li>Gurney, M. E., Yamamoto, H., Kwon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+motor+neuron+sprouting+in+vivo+by+ciliary+neurotrophic+factor+and+basic+fibroblast+growth+factor.">Induction of motor neuron sprouting in vivo by ciliary neurotrophic factor and basic fibroblast growth factor.</a> J Neurosci. 12, 3241-3247 (1992).</li><li>Caroni, P., Aigner, L., Schneider, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrinsic+neuronal+determinants+locally+regulate+extrasynaptic+and+synaptic+growth+at+the+adult+neuromuscular+junction.">Intrinsic neuronal determinants locally regulate extrasynaptic and synaptic growth at the adult neuromuscular junction.</a> J Cell Biol. 136, 679-692 (1997).</li><li>Witzemann, V., Brenner, H. R., Sakmann, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+factors+regulate+AChR+subunit+mRNAs+at+rat+neuromuscular+synapses.">Neural factors regulate AChR subunit mRNAs at rat neuromuscular synapses.</a> J Cell Biol. 114, 125-141 (1991).</li><li>Angaut-Petit, D., Molgo, J., Connold, A. L., Faille, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+levator+auris+longus+muscle+of+the+mouse:+a+convenient+preparation+for+studies+of+short-+and+long-term+presynaptic+effects+of+drugs+or+toxins.">The levator auris longus muscle of the mouse: a convenient preparation for studies of short- and long-term presynaptic effects of drugs or toxins.</a> Neurosci Lett. 82, 83-88 (1987).</li><li>Lanuza, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-+and+postsynaptic+maturation+of+the+neuromuscular+junction+during+neonatal+synapse+elimination+depends+on+protein+kinase.">Pre- and postsynaptic maturation of the neuromuscular junction during neonatal synapse elimination depends on protein kinase.</a> C. J Neurosci Res. 67, 607-617 (2002).</li><li>Garcia, N., Santafe, M. M., Tomas, M., Lanuza, M. A., Tomas, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+beta-amyloid25-35+peptide+aggregates+on+transmitter+release+in+neuromuscular+synapses.">Short-term effects of beta-amyloid25-35 peptide aggregates on transmitter release in neuromuscular synapses.</a> J Neuropathol Exp Neurol. 67, 250-259 (2008).</li><li>Wright, M. C., Cho, W. J., Son, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+patterns+of+motor+nerve+terminal+sprouting+induced+by+ciliary+neurotrophic+factor+vs.+botulinum+toxin.">Distinct patterns of motor nerve terminal sprouting induced by ciliary neurotrophic factor vs. botulinum toxin.</a> J Comp Neurol. 504, 1-16 (2007).</li><li>Wright, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+muscarinic+acetylcholine+receptor+subtypes+contribute+to+stability+and+growth,+but+not+compensatory+plasticity,+of+neuromuscular+synapses.">Distinct muscarinic acetylcholine receptor subtypes contribute to stability and growth, but not compensatory plasticity, of neuromuscular synapses.</a> J Neurosci. 29, 14942-14955 (2009).</li><li>Voss, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extracellular+ATP+inhibits+chloride+channels+in+mature+mammalian+skeletal+muscle+by+activating+P2Y1+receptors.">Extracellular ATP inhibits chloride channels in mature mammalian skeletal muscle by activating P2Y1 receptors.</a> J Physiol. 587, 5739-5752 (2009).</li><li>Murray, L. M., Gillingwater, T. H., Parson, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+mouse+cranial+muscles+to+investigate+neuromuscular+pathology+in+vivo.">Using mouse cranial muscles to investigate neuromuscular pathology in vivo.</a> Neuromuscul Disord. 20, 740-743 (2009).</li><li>Dorje, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antagonist+binding+profiles+of+five+cloned+human+muscarinic+receptor+subtypes.">Antagonist binding profiles of five cloned human muscarinic receptor subtypes.</a> J Pharmacol Exp Ther. 256, 727-733 (1991).</li><li>Caulfield, M. P., Birdsall, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=International+Union+of+Pharmacology.+XVII.+Classification+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">International Union of Pharmacology. XVII. Classification of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Pharmacol Rev. 50, 279-290 (1998).</li></ol>

Burada sunulan yöntem memeli NMJs istikrar ve bakım sinyalizasyon alt tipi özel mAChR önceden tanınmayan rolleri soruşturma izin verir. Bu yöntem ayrıca nörotrofik faktörler ve farmakolojik ajanların etkilerini test etmek için faydalı olacaktır. Örneğin, laboratuar Silier Nörotrofik Faktör (CNTF) yetişkin farelerde neredeyse tüm LAL sinir terminallerinden çimlenme yol açtığını <a>1</a> . Bu sonuç ca az çimlenme orta bildirdi CNTF ile tedavi edilen arka bacak kasları, önceki çalışmalarla ...

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar </th></tr><tr><td> ketamin </td><td> Hospira </td><td> NDC0409-2051-05 </td><td> Doz: 120mg/kg </td></tr><tr><td> ksilizin </td><td> Lloyd Laboratuvarları </td><td> LA33806 </td><td> Doz: 8mg/kg </td></tr><tr><td> atropin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A0132 </td><td> (&gt;% 98 saflıkta); Doz: 0.2mg/kg - 20mg/kg </td></tr><tr><td> atropin </td><td> Voigt Global Dağıtım </td><td> AT105 </td><td> İlaç grade </td></tr><tr><td> Methoctramine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> M105 </td><td> Doz: 100 - 400M </td></tr><tr><td> 4-DAMP </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D142 </td><td> Doz: 2.5mg/kg </td></tr><tr><td> AFDX-116 </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 1105 </td><td> 250M </td></tr><tr><td> AFDX-384 </td><td> Bioscience Tocris </td><td> 1345 </td><td> 50M - 500M </td></tr><tr><td> MT 7 </td><td> Peptitler Uluslararası </td><td> PMT-4340-s </td><td> 0.1M - 1M </td></tr><tr><td> 1X Fosfat Tuzlu, pH 7.4 Tamponlu </td><td> Invitrogen </td><td> 10010049 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Balıkçı </td><td> T353-500 </td><td> 10g/100mL deiyonize distile su eriterek ilk% 10&#39;luk olun; 1X PBS ile% 4, pH 7.4 &#39;e ayarlamak </td></tr><tr><td> Pentobarbitol Sodyum </td><td> Virbac Hayvan Sağlık </td><td> NDC-051.311-050-01 </td><td> Doz: 390mg/kg </td></tr><tr><td> Sylgard </td><td> Dow Corning </td><td> Bölüm # 184 </td><td> Ihtiyaçlarına bağlı olarak birden fazla ölçekli kültür çanak kullanabilirsiniz (30mm, 60mm, 100mm), kit ile birlikte gelen yönergeleri izleyin </td></tr><tr><td> 0.1M Glycine </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G-7126 </td><td> % 2 BSA / PBS 0.185g için 25ml </td></tr><tr><td> % 2 Sığır serum albumin (% 2 BSA) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A3059-100g </td><td> 1X PBS 100 ml içine 2g BSA çözülür </td></tr><tr><td> % 2% 0.2 Triton X 100 BSA / PBS (Engelleme Tampon) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T9284-100 ml </td><td> 0.2ml/100mL% 2 BSA / PBS çözülür </td></tr><tr><td> α-bungarotoxin </td><td> Invitrogen </td><td> T1175 </td><td> 1:200, konsantrasyon kullanın </td></tr><tr><td> SMI-312 </td><td> Sternberger Monoclonals </td><td> SMI312 </td><td> 1:1000 konsantrasyon kullanın </td></tr><tr><td> SV2 </td><td> Gelişim Çalışmaları Hibridoma Bankası </td><td> SV2-Süzüntü </td><td> 1:10 konsantrasyonda kullanın </td></tr><tr><td> S100 </td><td> Dako </td><td> Z0311 </td><td> 1:400, konsantrasyon kullanın </td></tr><tr><td> FITC-keçi anti-fare IgG1 </td><td> Roche </td><td> 03117731001 </td><td> Konsantrasyonu 1:200 kullanın, ama arka planda yüksek ise, 1:400 deneyin </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 647 konjuge keçi anti-tavşan </td><td> Invitrogen </td><td> A21244 </td><td> 1:200, konsantrasyon kullanın </td></tr><tr><td> Vectashield floresan montaj medya </td><td> Vektör laboratuvarlar </td><td> H-1000 </td><td> Bu sert ayarlanmış bir medya değil, açık bir oje ile kapak kayma güvenliğini sağlamak için gerekecektir. </td></tr><tr><td> Küçük Bahar Makas </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 15002-08 </td><td></td></tr><tr><td> Diseksiyon forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11295-51 </td><td></td></tr></tbody></table>

subcutaneous administration of muscarinic antagonists and triple-immunostaining of the levator auris longus muscle in mice

Gastroknemius ve tibialis anterior gibi kemirgenler, Hind bacak kasları memeli NMJs oluşumu ve korunması için gerekli sinyalleri in vivo farmakolojik çalışmalarda sık sık kullanılır . Ancak, subkutan veya intramusküler uygulamadan sonra bu kasların içine ilaç penetrasyonu genellikle eksik ya da düzensiz ve birçok NMJs etkilenmez. Mini pompaları gibi cihazlar ile sistemik yönetim Spatiotemporal etkilerini artırabilir olsa da, bu yaklaşımın invaziv doğası karıştırıcı inflamatuvar yanıtları ve / veya doğrudan kas hasarına neden olabilir. Ayrıca, zaman alıcı bir seri kesit ve kapsamlı immün gerektirdiğinden bir arka bacak kas NMJs tam analizi zordur. Fare LAL boyun dorsum yüzeysel olarak bulunan ince bir kas, düz levha. Bu, hızlı kasılan kas fonksiyonları kulak kepçesi taşımak için. Kafatası orta hat kaynaklanan ve her kepçesi kıkırdak kısmının yanal uzatmak rostral ve kaudal kısımları içerir. Kas çıkar Stylomastoid foramen olarak kaudal projeler yüz sinirinin bir şube tarafından verilir. Biz ve diğerleri, hem de kısa ve uzun vadeli NMJs ve kasları ilaçların in vivo etkilerinin araştırılması için avantaj sunan uygun bir hazırlık olması amacıyla LAL bulduk . İlk olarak, yüzeysel bir konumda, hafif anestezi altında ilaçlar birden fazla yerel uygulamaları kolaylaştırır. İkincisi, inceliği (2-3 kat kas liflerinin), kas içinde hemen hemen tüm NMJs görselleştirme ve analiz izin verir. Üçüncü olarak, onun innervasyon deseni ile birlikte sinir bozulmadan diseksiyon kolaylığı, ek elektrofizyolojik analizi, in vitro 9,5 izin verir. Belki de son ve en önemlisi, uygulanan küçük bir hacim (~ 50μl) kolayca tüm kas yüzeyi kapsayan tüm NMJs ilaç düzgün ve uzun süreli maruz kalma sağlar ve sistemik bir yaklaşım 1,8 ihtiyacını ortadan kaldırır .

Watch this Scientific Journal Video about Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice at JoVE.com

Subcutaneous Administration of Muscarinic Antagonists and Triple-Immunostaining of the Levator Auris Longus Muscle in Mice

Levator auris longus (LAL) genç erişkin farelerin kas muskarinik sinyalizasyon inhibitörleri tekrarlanan yönetim ve wholemounts nöromüsküler kavşak sonraki immün (NMJs) için prosedürleri açıklar. LAL kas ifşa ettiği için benzersiz avantajları vardır.<em&gt; In vivo</em&gt; NMJs farmakolojik etkileri.

Subkutan Muskarinik Antagonistleri Yönetim ve Farelerde levator Auris longus&#39;un Triple-immün

Hind limb muscles of rodents, such as gastrocnemius and tibialis anterior, are frequently used for in vivo  pharmacological studies of the signals ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Sıçanlar İlaç Öz-yönetim sırasında Ultrasonik seslenmelere Değerlendirilmesi

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System

Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi

In Parkinson's disease (PD) patients, the associated pathology follows a characteristic pattern involving inter alia the enteric nervous system (ENS) 1,2, ...

Spectral Confocal Imaging of Fluorescently tagged Nicotinic Receptors in Knock-in Mice with Chronic Nicotine Administration

Kronik Nikotin İdaresi fareler Knock-in içinde floresan etiketli Nikotinik Reseptör Spektral Konfokal Görüntüleme

Ligand-gated ion channels in the central nervous system (CNS) are implicated in numerous conditions with serious medical and social consequences.  For ...

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Visualization of Proprioceptors in Drosophila Larvae and Pupae

Içinde proprioseptörlere Görselleştirmesi<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva ve Pupa

Proprioception is the ability to sense the motion, or position, of body parts by responding to stimuli arising within the body. In fruitflies and other ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Gaz kromatografisi ile operant etanol kendi kendine uygulama ve etanol belirleme sırasında etanol mikrodivaliz

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Proprioception and Tension Receptors in Crab Limbs: Student Laboratory Exercises

Yengeç Parmak Propriyoseptör ve Gerilim reseptörleri: Öğrenci Laboratuvarı Egzersizler

The primary purpose of these procedures is to demonstrate for teaching and research purposes how to record the activity of living primary sensory neurons ...

A Simple and Inexpensive Method for Determining Cold Sensitivity and Adaptation in Mice

Fareler Soğuk Hassasiyeti ve Uyum belirlenmesi için Basit ve ucuz Yöntem

Cold hypersensitivity is a serious clinical problem, affecting a broad subset of patients and causing significant decreases in quality of life.  The cold ...

Video Imaging and Spatiotemporal Maps to Analyze Gastrointestinal Motility in Mice

Video Görüntüleme ve Spatiotemporal Haritalar Fare Gastrointestinal Motilite Analiz

The enteric nervous system (ENS) plays an important role in regulating gastrointestinal (GI) motility and can function independently of the central ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

Gerçek zamanlı yönetim fMRI psikoterapi eğitimi için bir iletişim kuralı

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Recording Brain Electromagnetic Activity During the Administration of the Gaseous Anesthetic Agents Xenon and Nitrous Oxide in Healthy Volunteers

Kayıt beyin elektromanyetik aktivite sırasında gaz halinde olan yakıtlar anestezik ajanların Xenon ve sağlıklı gönüllü olarak azot oksit İdaresi

Anesthesia arguably provides one of the only systematic ways to study the neural correlates of global consciousness/unconsciousness. However to date most ...