Name: packaging hiv- or fiv-based lentivector expression constructs &amp; transduction of vsv-g pseudotyped viral particles
Uploaded: 2012-04-08T14:00:00
Duration: 11 min 8 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles at JoVE.com

Мы хотели бы выразить признательность сотрудникам и ученые ВОО за их поддержку в разработке и тестировании этих протоколов.

1. Трансфекция 293TN Клетки с упаковки плазмиды и выражений Построить <ol><li> Семенной 7.0 - 8.0 х 10 6 клеток на 293TN 15 см 2 пластины культуры в 20 мл культуральной среде, содержащей DMEM среде с 4 мМ L-глутамина, 4,5 г / л, глюкоза, и эмбриональной телячьей сыворотки (10%) без антибиотиков. Расти в течение 18-24 часов при 37 ° C с 5% CO 2, так что плотность клеток достигает 60-80% слияния во время трансфекции. В некоторых случаях может оказаться необходимым, чтобы семена нескольких пластин клеток получить достаточно высокий титр для трансдукции клеток-мишеней. </li><li> Для каждой пластине клеток, добавляют 1,6 мл бессывороточной DMEM в автоклаве 2 трубками мл Eppendorff. Добавьте 45 мкл pPACKH1 или pPACKF1 и 4,5 мкг ваш lentivector построить в DMEM и перемешать с помощью пипетки вверх и вниз. </li><li> Добавить 55 мкл PureFection в ту же трубу. Vortex в течение 10 секунд. Инкубируйте DMEM-плазмиды-PureFection смесь при комнатной температуре еили 15 мин. </li><li> Добавить DMEM-плазмиды-PureFection смесь на плиту культуры тканей каплям и водоворот осторожно, чтобы равномерно рассеять по всему пластины. Вернуться блюдо в инкубатор и расти при температуре 37 ° C с 5% CO 2. </li><li> Существует нет необходимости менять СМИ после трансфекции. Если lentivector конструкция выражает ген, кодирующий флуоресцентный белок GFP, как, проверьте ваши клетки под микроскопом 12-24 часов после трансфекции. Вы должны быть в состоянии видеть&gt; 90% GFP-положительных клеток, что указывает на трансфекции была успешной. </li><li> Соберите супернатант культуры клеток через 48 и 72 часов в 50 мл стерильной пробирке центрифуги. Это супернатант культуры клеток в настоящее время содержит инфекционных pseudoviral частиц. (Следовать рекомендациям руководства по работе с классом безопасности BSL-2). Центрифуга на 1500 мкг в течение 15 мин при комнатной температуре в гранулах сотовой мусора. Передача вирусной супернатант в новую пробирку, обеспечивая, чтобы не нарушить гранул. </li><li> 293TN клетки, которые были использованы для вирусной упаковку следует выбрасывать в контейнер для биологически опасных и не могут быть использованы для дальнейших раундов вирусной упаковке. </li></ol> 2. Концентрация вирусной Супернатант <ol><li> Добавить 1 объем холодного (4 ° С) PEG-это вирус осадков Решение каждые 4 объема лентивирусов частиц содержащих супернатант. Осаждение лентивирусов частиц из больших объемов может быть достигнуто с Corning 250 мл полипропиленовые трубы центрифуги. Смешать решения путем обращения труб в несколько раз, но не вихрь смеси. </li><li> Охладите раствор при температуре 4 ° С в течение не менее 12 часов (до 4 дней приемлемо). Не трясите и не повернуть трубы в холодильной шаг. </li><li> Центрифуга супернатант / PEG-это смесь при 1500 мкг в течение 30 минут при 4 ° C. После центрифугирования лентивирусов частицы будет выглядеть как бежевый или белый шарик в нижней части трубы. Вылейте supernataNT. </li><li> Удалите все следы жидкости стремления, стараясь не нарушить осажденного лентивирусов частиц в гранулах. Следы остаточных PEG-это разбавить вирус (тем самым уменьшая титр), но не влияет на целостность клетки-мишени с PEG-он инертен и не токсичен. </li><li> Ресуспендируйте и объединить лентивирусов частиц в 1/100 первоначального объема с использованием холодного (4 ° С), стерильный фосфатный буферный раствор или DMEM, содержащей 25 мМ HEPES буфера. </li><li> Алиготе в стерильные флаконы и криогенных магазине при -70 ° С до готовности к использованию. </li></ol> 3. Вирусный Titering и трансдукция клеток-мишеней <ol><li> Мы рекомендуем titering лентивирусов частиц до трансдукции клеток-мишеней, из интереса и расчета соответствующих множественности заражения (МВД) на клетки-мишени для согласованности между экспериментами. Для вирусного titering, мы рекомендуем использовать HT1080 клеток простой в заразить положительного контроля линии. Plпростота отметить, что протокол предполагает titering трансдуцирующих HT1080 клетки с небольшим аликвоту лентивирусов частиц вы упаковке. После титров известно, клетки-мишени интересов, также может быть трансдуцированных производится лентивирусов частиц. Рекомендуется titering протокола можно найти по адресу: <a href="http://www.systembio.com/downloads/manual_titer_kit_web.pdf" target="_blank">http://www.systembio.com/downloads/manual_titer_kit_web.pdf</a> 7. </li><li> Пластина 50000 клеток-мишеней интересов, на лунку в 24-луночного планшета в средствах массовой культуре клеток. Использование средств массовой информации, что клетки, как правило, культивировали дюйма Рост клеток в течение ночи при определенных условиях их культуры. Клетки должны быть в пределах от 50 до 70% сливающийся в день трансдукции. </li><li> В день трансдукции, аспирации средства массовой информации от клетки. Комбинат питательной среде с TransDux до 1 х конечной концентрации (например, 2,5 мкл TransDux до 500 мкл питательной среды). Затем перенесите TransDux-сеLL смесь питательной среды в каждую лунку. </li><li> Пипетировать соответствующий объем вирус, который соответствует оптимальному МВД на клетки-мишени в каждую лунку. Если оптимальный МВД неизвестно, мы рекомендуем попробовать целый ряд различных Mois (например, МВД 1, 2 и 5 простых в инфицировать клетки культуры ткани и МВД 1, 10 и 20 для более трудных для заразить первичные клетки). Если концентрация частиц лентивирусов не известна (определяется на основе протокола titering вируса), различных объемов вируса можно попробовать, например, 1, 2 и 5 мкл вируса. Вирус может находиться в контакте с клетками-мишенями на срок до 72 часов. </li><li> Дальнейшие эксперименты с клетками-мишенями трансдуцированных интересов, может быть начато через 72 часа после трансдукции, когда вирусные конструкции интегрировался в геном клетки-хозяина. Изменение средних и прохождение клеток-мишеней интересов, в соответствии с их конкретными потребностями. </li></ol> 4. Представитель Результаты <pкласс = &quot;jove_step&quot;&gt; Трансфекция 293TN клеток Начальная плотность 293TN клеток имеет решающее значение для успешной вирусной упаковке. 293TN клетки должны быть от 60 до 80% сливной день трансфекции (рис. 2). Если 293TN клеток менее 60% вырожденная, дать им возможность расти в течение нескольких часов, прежде чем трансфекции. Если 293TN клеток&gt; 80% вырожденная, то они должны быть replated до трансфекции. При использовании lentivector выражения GFP, по крайней мере 90% 293TN клетки должны светиться зеленым через 24 часа после трансфекции, что указывает на успешное трансфекции (рис. 3). Если менее чем 90% клеток GFP-положительных, не переходите к следующему шагу, потому что это означает, что трансфекция не была успешной, и вирусные титры будет низкой. Вместо пластины нового 293TN клетки и начать заново, убедившись, что 293TN клетки на должном плотность клеток до трансфекции. 293TN клетки могут снять плиты культуре тканей 48-72 часов после трансфекции. Это не оказывает негативного воздействия производства лентивирусов частиц. Titering с HT1080 клетки Вирусные титры можно вычислить с помощью глобальной сверхбыстрой комплект ВОО Titering в соответствии с инструкциями производителя. Эта система использует КПЦР для измерения вирусной интеграции WPRE последовательность из лентивирусов вектора в клетки HT1080 и сравнивает их со стандартной кривой, на основе геномной последовательности ссылку, чтобы точно измерить инфекционных единиц на мл (рис. 4). Трансдукция клеток-мишеней При использовании лентивирусов частиц выразил конститутивно GFP маркер, GFP-положительных клеток должны начать появляться в течение 12-24 часов трансдукции, если трансдукции реакции работает. GFP выражение должно продолжаться после того, как конструкция лентивирусов стабильно интегрируется в тОн пройдет геном клетки. Если трансдукции с различными Mois, GFP флуоресценции должно примерно соответствовать МВД, где низкая Mois показать флуоресценции GFP меньше и выше Mois шоу увеличилось флуоресценция GFP (рис. 5). <img src="/files/ftp_upload/3171/3171fig1.jpg" alt="Рисунок 1" /> Рисунок 1. Обзор вирусной Протокол производства. Lentivector и pPACK плазмиды упаковки смешиваются и совместно трансфекции в 293TN клеток. Через 48 -72 часов, вирусная супернатант собирали, и вирусные частицы осаждаются PEG-он. После titering лентивирусов частиц, они могут быть использованы для трансдукции клеток-мишеней, из интереса. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3171/3171fig1large.jpg" target="_blank">Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок</a> . <img src="/files/ftp_upload/3171/3171fig2.jpg" alt="Рисунок 2" /> Рисунок 2. Фазового контраста изображения 293TN клеток. Сотовые DensitУ должна быть в пределах 60-80% сливной день трансфекции. <img src="/files/ftp_upload/3171/3171fig3.jpg" alt="Рисунок 3" /> Рисунок 3. Флуоресцентное изображение GFP-положительных клеток 293TN 24 часов после трансфекции Purefection, pPACKH1 и lentivector кодирования конструкции GFP. <img src="/files/ftp_upload/3171/3171fig4.jpg" alt="Рисунок 4" /> Рисунок 4. WPRE КПЦР результатов и стандартной кривой полученные с помощью глобальной сверхбыстрой комплект ВОО в Titering рассчитать МВД и соответствующим титром упакованных вирусных частиц. <img src="/files/ftp_upload/3171/3171fig5.jpg" alt="Рисунок 5" /> Рисунок 5. Флуоресцентные изображения HT1080 клеток трансдуцированных с увеличением количества лентивирусов. Изображения с 72 часов после трансдукции.

<ol>
	<li>Cann, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> RNA Viruses. A Practical Approach. , (2000).</li><li>Gould, D. J., Favorov, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vectors+for+the+treatment+of+autoimmune+diseases.">Vectors for the treatment of autoimmune diseases.</a> Gene Therapy. 10, 912-927 (2003).</li><li>Naldini, L., Blomer, U., Gage, F. H., Trono, D., Verma, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+transfer,+integration,+and+sustained+long-term+expression+of+the+transgene+in+adult+rat+brains+injected+with+a+lentiviral+vector.">Efficient transfer, integration, and sustained long-term expression of the transgene in adult rat brains injected with a lentiviral vector.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93, 11382-11388 (1996).</li><li>Naldini, L., Blomer, U., Gallay, P., Ory, D., Mulligan, R., Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+gene+delivery+and+stable+transduction+of+nondividing+cells+by+a+lentiviral+vector.">In vivo gene delivery and stable transduction of nondividing cells by a lentiviral vector.</a> Science. 272, 263-267 (1996).</li><li>Dull, T., Zufferey, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+third-generation+lentivirus+vector+with+a+conditional+packaging+system.">A third-generation lentivirus vector with a conditional packaging system.</a> J. Virol. 72, 8463-8471 (1998).</li><li>Federico, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lentivirus Gene Engineering Protocols. , (2003).</li><li>Curran, M. A., Kaiser, S. M., Achacoso, P. L., Nolan, G. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficient+transduction+of+nondividing+cells+by+optimized+feline+immunodeficiency+virus+vectors.">Efficient transduction of nondividing cells by optimized feline immunodeficiency virus vectors.</a> Mol. Ther. 1, 31-38 (2000).</li><li>Kahlig, K. M., Saridey, S. K., Kaja, A., Daniels, M. A., George, A. L., Wilson, M. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplexed+transposon-mediated+stable+gene+transfer+in+human+cells.">Multiplexed transposon-mediated stable gene transfer in human cells.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107 (4), 1343-1348 (2010).</li><li>Kim, A., Pyykko, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Size+matters:+versatile+use+of+PiggyBac+transposons+as+a+genetic+manipulation+tool.">Size matters: versatile use of PiggyBac transposons as a genetic manipulation tool.</a> Mol. Cell Biochem. , (2011).</li></ol>

Производство и свободного доступа к этому видео статьи поддержке системы биологических наук.

Это вирусное упаковки и трансдукции протокол клетки-мишени был оптимизирован для использования с вирусными реагентов ВОО на упаковке. Замена других реагентов может повлиять на исход протокола. Этот протокол был только оптимизирован для лентивирусов производства и не могут быть пригодны для производства других типов вирусов или pseudoviruses. Успешные вирусные упаковки зависит от нескольких ключевых этапов. 293TN клетки экспрессируют SV40 большой Т-антиген, который является абсолютно необходимым для секреции лентивирусов частиц в супернатант культуры клеток. Плотность, при которой 293TN клетки во время трансфекции особенно важно для того, чтобы PureFection реагента достаточно передать lentivector и упаковка плазмиды в клетки. Добавление PureFection смесь на плиту культуры тканей в каплям образом следует тщательно закрученной пластины важно для разгона упаковке плазмидыlentivector и построить по всей клетки. Отсутствие надлежащего распространения векторов может привести к недостаточной лентивирусов частиц производится. Вирусной реакции упаковки могут быть расширены для производства высококачественных титра вируса, основанный на поверхность пластины тканевой культуры. Можно выбрать несколько пластин культуры тканей блюда 293TN клеток на конструкцию, которая должна быть упакована. Концентрация вирусной супернатантах особенно полезно при создании высоким титром вируса. Вирусный супернатант из нескольких пластин клетки могут быть объединены и сконцентрированы для использования в в естественных условиях эксперименты, или клетки, которые являются трудными для трансдукции. Titering производится лентивирусов частиц важна для расчета точной МВД использовать для трансдукции клеток-мишеней. Зная, МВД, которая была использована в данном трансдукции позволяет устранения в том случае, трансдукция не увенчались успехом. Например, с помощью МВД, которыйслишком низком уровне может привести к очень мало клеток-мишеней выражает конструкция, из интереса. Использование МВД, что слишком высокая, однако, может привести к клеткам-мишеням, которые показывают признаки стресса. Цель заключается в использовании МВД, которая максимизирует выражение конструкция интересов, сохраняя здоровье клеток. Хотя мы рекомендуем КПЦР основе titering протокол, который измеряет интегрированных копий лентивирусов конструкцию в HT1080 клеток, другие подходы titering также может быть использован, например, p24 ELISA или оценка процентов GFP-положительных клеток. Успешное трансдукции клеток-мишеней зависит также и от нескольких ключевых факторов. TransDux уникальный реагент инфекция, которая позволяет с высокой эффективностью трансдукции, но это не токсичен для клеток. TransDux могут быть использованы вместо polybrene, который часто токсичны для клеток-мишеней. Включение TransDux в трансдукции клеток-мишеней помогает нейтрализовать заряды на вирусные частицы и позволяет вируса в клеткус. С TransDux не токсичен для клеток, можно позволить лентивирусов частицы остаются в контакте с клетками в течение 72 часов (время, когда вирусные конструкции были интегрированы в геном клетки-хозяина), тем самым увеличивая вероятность того, что вирусных частиц, поступающих в клетку. Для некоторых трудных для трансдукции клеток, трансдукции может быть повторена в последующие дни, чтобы повысить эффективность трансдукции. Например, трансдукции клеток в 1 день, позволяют клеткам отдохнуть на 2-й день, а затем преобразовывать клетки снова на 3-й день. Важно, чтобы ждать 72 часов после последнего трансдукции перед началом отбора, дальнейшие эксперименты или характеристик клеток-мишеней. Эффективность вирусной упаковке зависит также от размера лентивирусов конструкция, между 5 и 3&#39;LTR регионах. В этом разделе лентивирусов конструкция должна быть около 9 кб или меньше, что соответствует размеру родной генома ВИЧ. Превышение 9 кб может де-увеличение титра производится pseudoviral частиц. Новые технологии, такие как piggyBac векторов транспозонов, позволяют надежной, стабильной интеграции трансгенов до 100 кб через один трансфекции. Такой подход может быть использован для конструкций, которые превышают предельный размер для лентивирусов векторов, в тех случаях, где это возможно для трансфекции клеток-мишеней, а также предоставляет дополнительное преимущество, не требующие вирусных шаг упаковке 9,10. Pseudoviral частиц, полученные с использованием этого протокола являются инфекционными, что они могут заразить большинство типов клеток млекопитающих. Продукты, используемые в настоящем протоколе, однако это третье поколение biosafe в том, что они производят, не репликативной и самостоятельно инактивируют pseudoviruses. Поэтому, как только преобразуются в клетки-мишени или животных, клетки-мишени или животных, не инфекционной или заразной. Замена других lentivector плазмиды, которые не являются третьего поколения biosafe возможно, хотя и не рекомендуется с биобезопасностьюперспективу. Вирусной Протокол производства и последующей трансдукции клеток-мишеней должно осуществляться под 2-го уровня биобезопасности, в соответствии с руководящими принципами NIH 11, и исследователи должны всегда носить халат и перчатки при работе с вирусными частицами. Используется 293TN клеток производителя труб вирусных частиц, а также одноразовые пипетки следует выбрасывать в контейнер для биологически опасных соответствующий. Многоразовые пипетки и посуда должны быть обеззаражены с отбеливателем и автоклавирования для уменьшения облучения персонала.

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> DMEM Высокий Средний Глюкоза </td><td> Гибко </td><td> 11995-073 </td><td></td></tr><tr><td> 293TN клетки </td><td> ВОО </td><td> LV900A-1 </td><td></td></tr><tr><td> pPACKH1 </td><td> ВОО </td><td> LV500A-1 </td><td> Для ВИЧ-инфекции на основе lentivectors </td></tr><tr><td> pPACKF1 </td><td> ВОО </td><td> LV100A-1 </td><td> Для FIV основе lentivectors </td></tr><tr><td> Любой вектор лентивирусов </td><td> ВОО </td><td> Различный </td><td> кДНК, ShRNA, микроРНК, журналисты транскрипции </td></tr><tr><td> PureFection </td><td> ВОО </td><td> LV750A-1 LV750A-5 </td><td></td></tr><tr><td> PEG-он </td><td> ВОО </td><td> LV810A-1 LV825A-1 </td><td></td></tr><tr><td> Глобальный сверхбыстрой комплект Titering </td><td> ВОО </td><td> LV961A-1 </td><td> Не описана в этом протоколе, но необходимые для титровать вирусных частиц </td></tr><tr><td> TransDux </td><td> ВОО </td><td> LV850A-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

packaging hiv- or fiv-based lentivector expression constructs &amp; transduction of vsv-g pseudotyped viral particles

As with standard plasmid vectors, it is possible to transfect lentivectors in plasmid form into cells with low-to-medium efficiency to obtain transient expression of effectors. Packaging lentiviral expression constructs into pseudoviral particles, however, enables up to 100% transduction, even with difficult-to-transfect cells, such as primary, stem, and differentiated cells. Moreover, the lentiviral delivery does not produce the specific cellular responses typically associated with chemical transfections, such as cell death resulting from toxicity of the transfection reagent 1, 2. When transduced into target cells, the lentiviral construct integrates into genomic DNA and provides stable expression of the small hairpin RNA (shRNA), cDNA, microRNA or reporter gene 3, 4. Target cells stably expressing the effector molecule can be isolated using a selectable marker contained in the expression vector construct such as puromycin or GFP. After pseudoviral particles infect target cells, they cannot replicate within target cells because the viral structural genes are absent and the long terminal repeats (LTRs) are designed to be self-inactivating upon transduction 5, 6.
There are three main components necessary for efficient lentiviral packaging 1, 5, 6, 7. 
1. The lentiviral expression vector that contains some of the genetic elements required for packaging, stable integration of the viral expression construct into genomic DNA, and expression of the effector or reporter. 
2. The lentiviral packaging plasmids that provide the proteins essential for transcription and packaging of an RNA copy of the expression construct into recombinant pseudoviral particles. This protocol uses the pPACK plasmids (SBI) that encode for gag, pol, and rev from the HIV or FIV genome and Vesicular Stomatitis Virus g protein (VSV-G) for the viral coat protein. 
3. 293TN producer cells (derived from HEK293 cells) that express the SV40 large T antigen, which is required for high-titer lentiviral production and a neomycin resistance gene, useful for reselecting the cells for maintenance.
An overview of the viral production protocol can be seen in Figure 1. Viral production starts by co-transfecting 293TN producer cells with the lentiviral expression vector and the packaging plasmids. Viral particles are secreted into the media. After 48-72 hours the cell culture media is harvested. Cellular debris is removed from the cell culture media, and the viral particles are precipitated by centrifugation with PEG-it for concentration. Produced lentiviral particles are then titered and can be used to transduce target cells. Details of viral titering are not included in this protocol, but can be found at:
<a href="http://www.systembio.com/downloads/global_titer_kit_web_090710.pdf" target="_blank">http://www.systembio.com/downloads/global_titer_kit_web_090710.pdf</a> 8.
This protocol has been optimized using the specific products indicated. Other reagents may be substituted, but the same results cannot be guaranteed.

Watch this Scientific Journal Video about Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles at JoVE.com

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs & Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Лентивирусов векторов экспрессии является наиболее эффективным средством стабильно, выражающих различные эффекторные молекулы или репортер конструкций в разделении и без деления клеток млекопитающих и целые организмы. Здесь мы предоставляем протокол о том, как упаковать lentivector конструкций выражение в pseudoviral частиц и преобразовывать клетки-мишени использованием pseudoviral частиц.

Упаковка с ВИЧ или FIV основе Lentivector Конструкции выражения и трансдукции VSV-G Pseudotyped вирусных частиц

As with standard plasmid vectors, it is possible to transfect lentivectors in plasmid form into cells with low-to-medium efficiency to obtain transient ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Packaging HIV- or FIV-based Lentivector Expression Constructs &amp; Transduction of VSV-G Pseudotyped Viral Particles

Visualizing Cell-to-cell Transfer of HIV using Fluorescent Clones of HIV and Live Confocal Microscopy

Визуализация сотовый к клетке передачи ВИЧ-инфекции с помощью флуоресцентного клоны ВИЧ и жить конфокальной микроскопии

By fusing the green fluorescent protein to their favorite proteins, biologists now have the ability to study living complex cellular processes using ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Генотипическая вывода ВИЧ-1 тропизм Использование Популяционные Секвенирование V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Amplifying and Quantifying HIV-1 RNA in HIV Infected Individuals with Viral Loads Below the Limit of Detection by Standard Clinical Assays

Усиление и Количественная РНК ВИЧ-1 у ВИЧ-инфицированных с вирусной нагрузки ниже предела обнаружения стандартными клиническими Анализы

Amplifying viral genes and quantifying HIV-1 RNA in HIV-1 infected individuals with viral loads below the limit of detection by standard assays (below ...

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

В пробирке раздевания ВИЧ-1 сердечников

The genome of the retroviruses is encased in a capsid surrounded by a lipid envelope. For lentiviruses, such as HIV-1, the conical capsid shell is ...

Rapid Screening of HIV Reverse Transcriptase and Integrase Inhibitors

Быстрого скрининга ВИЧ обратной транскриптазы и ингибиторы интегразы

Although a number of anti HIV drugs have been approved, there are still problems with toxicity and drug resistance. This demonstrates a need to identify ...

Vaccinia Reporter Viruses for Quantifying Viral Function at All Stages of Gene Expression

Коровьей оспы Reporter Вирусы для Количественная Вирусный функции на всех этапах экспрессии генов

Poxviruses are a family of double stranded DNA viruses that include active human pathogens such as monkeypox, molluscum contagiousum, and Contagalo virus. ...

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

The Development of Lyophilized Loop-mediated Isothermal Amplification Reagents for the Detection of Coxiella burnetii

Развитие Лиофилизированный Loop опосредованных изотермических реагенты для амплификации для обнаружения<em&gt; Coxiella burnetii</em

Coxiella burnetii, the agent causing Q fever, is an obligate intracellular bacterium. PCR based diagnostic assays have been developed for detecting C. ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Оценка эффективности и токсичности РНК Ориентация ВИЧ-1 Производство для использования в генной или терапии наркотиками

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Measuring Influenza Neuraminidase Inhibition Antibody Titers by Enzyme-linked Lectin Assay

Измерение гриппа нейраминидазы ингибирования Титры антител методом ферментативного лектина Пробирной

Antibodies to neuraminidase (NA), the second most abundant surface protein on influenza virus, contribute toward protection against influenza. Traditional ...

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Single-cell Quantitation of mRNA and Surface Protein Expression in Simian Immunodeficiency Virus-infected CD4+ T Cells Isolated from Rhesus macaques

Одноклеточных Quantitation мРНК и поверхности белков в инфицированных Обезьяний вирус иммунодефицита CD4+ T клетки изолированы от макак резус

Single-cell analysis is an important tool for dissecting heterogeneous populations of cells. The identification and isolation of rare cells can be ...