Name: quantifying agonist activity at g protein-coupled receptors
Uploaded: 2011-12-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Agonist Activity at G Protein-coupled Receptors at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح جنرال موتورز 69829.

1. قياس تركيز منحنيات الاستجابة ناهض : أي نشاط التأسيسية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> لتقدير القيم النسبية ناهض ب K (RA ط) ، لا بد من سلسلة من اثنين على الأقل من منحنيات التركيز على الاستجابة ناهض. ويمكن قياس أي في الفحص المختب?...

<ol>
	<li>Stephenson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modification+of+receptor+theory.">A modification of receptor theory.</a> British Journal of Pharmacology. 11, 379-393 (1956).</li><li>Furchgott, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+b-haloalkylamines+in+the+differentiation+of+receptors+and+in+the+determination+of+dissociation+constants+of+receptor-agonist+complexes.">The use of b-haloalkylamines in the differentiation of receptors and in the determination of dissociation constants of receptor-agonist complexes.</a> Advances in Drug Research. 3, 21-55 (1966).</li><li>Ehlert, F. J., Suga, H., Griffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+agonism+and+inverse+agonism+in+functional+assays+with+constitutive+activity:+Estimation+of+orthosteric+ligand+affinity+constants+for+active+and+inactive+receptor+states.">Analysis of agonism and inverse agonism in functional assays with constitutive activity: Estimation of orthosteric ligand affinity constants for active and inactive receptor states.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 33, 671-686 (2011).</li><li>Griffin, M. T., Figueroa, K. W., Liller, S., Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+Agonist+Activity+at+G+Protein-Coupled+Receptors:+Analysis+of+M2+Muscarinic+Receptor+Signaling+through+Gi/o,Gs,+and+G15.">Estimation of Agonist Activity at G Protein-Coupled Receptors: Analysis of M2 Muscarinic Receptor Signaling through Gi/o,Gs, and G15.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 321, 1193-1207 (2007).</li><li>Black, J. W., Leff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+models+of+pharmacological+agonism.">Operational models of pharmacological agonism.</a> Proceedings of the Royal Society of LondonSeries B: Biological Sciences. 220, 141-162 (1983).</li><li>Tran, J. A., Chang, A., Matsui, M., Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+relative+microscopic+affinity+constants+of+agonists+for+the+active+state+of+the+receptor+in+functional+studies+on+M2+and+M3+muscarinic+receptors.">Estimation of relative microscopic affinity constants of agonists for the active state of the receptor in functional studies on M2 and M3 muscarinic receptors.</a> Mol. Pharmacol. 75, 381-396 (2009).</li><li>Schultz, J., Hamprecht, B., Daly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+adenosine+3':5'-cyclic+monophosphate+in+clonal+glial+cells:+labeling+of+intracellular+adenine+nucleotides+with+radioactive+adenine.">Accumulation of adenosine 3':5'-cyclic monophosphate in clonal glial cells: labeling of intracellular adenine nucleotides with radioactive adenine.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1266-1270 (1972).</li><li>Berridge, M. J., Downes, C. P., Hanley, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+amplifies+agonist-dependent+phosphatidylinositol+responses+in+brain+and+salivary+glands.">Lithium amplifies agonist-dependent phosphatidylinositol responses in brain and salivary glands.</a> Biochemical Journal. 206, 587-595 (1982).</li><li>Kendall, D. A., Hill, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Neurotransmitter Receptor Analysis. , 68-87 (1990).</li><li>Pulido-Rios, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitro+Isolated+Tissue+Functional+Muscarinic+Receptor+Assays.">Vitro Isolated Tissue Functional Muscarinic Receptor Assays.</a> Current Protocols in Pharmacology. 48, 4-15 (2010).</li><li>Kenakin, T., Enna, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2001).</li><li>Ehlert, F. J., Griffin, M. T., Sawyer, G. W., Bailon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=simple+method+for+estimation+of+agonist+activity+at+receptor+subtypes:+comparison+of+native+and+cloned+M3+muscarinic+receptors+in+guinea+pig+ileum+and+transfected+cells.">simple method for estimation of agonist activity at receptor subtypes: comparison of native and cloned M3 muscarinic receptors in guinea pig ileum and transfected cells.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 289, 981-992 (1999).</li><li>Burstein, E. S., Spalding, T. A., Brann, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacology+of+muscarinic+receptor+subtypes+constitutively+activated+by+G+proteins.">Pharmacology of muscarinic receptor subtypes constitutively activated by G proteins.</a> Mol. Pharmacol. 51, 312-319 (1997).</li></ol>

لأن لدينا وسيلة لتقدير RA ط (القيمة النسبية ب K) لا يتطلب سوى قياس منحنيات التركيز على الاستجابة ناهض ، يمكن القيام به في أي وقت تحليلنا تقاس هذه المنحنيات. إذا يوما بعد يوم الاختلاف في الاستجابة لإعداد التجريبية (م?...

quantifying agonist activity at g protein-coupled receptors

عندما ناهض ينشط عدد سكانها مستقبلات البروتين يقترن G (GPCRs) ، فإنه يثير مسارا يشير إلى أن يتوج في استجابة الخلايا او الانسجة. ويمكن تحليل هذه العملية على مستوى واحد من مستقبلات ، بلغ عدد السكان المستقبلات ، أو استجابة المصب. هنا نحن تصف كيفية تحليل استجابة المتلقين للحصول على تقدير للتقارب ناهض المستمر للحالة نشطة من المستقبلات واحدة. مستقبلات تتصرف كما أن تبديل كمي بالتناوب بين الدول النشطة وغير النشطة (الشكل 1). في حالة نشطة تتفاعل مع بروتينات معينة أو مجموعة الشركاء الآخرين في الإشارة. في غياب يغاندس ، وتسود حالة غير نشطة. الربط من ناهض يزيد من احتمال أن مستقبلات ستتحول الى حالة نشطة بسبب التقارب المستمر للحالة نشطة (K ب) هو أكبر بكثير من تلك التي للدولة غير نشطة (K أ). وخلاصة للالنواتج عشوائية من جميع المستقبلات في غلة السكان على مستوى ثابت من تفعيل مستقبلات في الوقت المناسب. والمتبادل للتركيز ناهض انتزاع نصف القصوى تنشيط مستقبلات تعادل ثابت لوحظ تقارب (K OBS) ، ويتم تعريف جزء من ناهض مستقبلات المجمعات في حالة نشطة وفعالية (ε) (الشكل 2). وقد تم تطوير أساليب لتحليل استجابات المتلقين من GPCRs التي تمكن من تقدير K OBS والكفاءة النسبية ل1،2 ناهض. في هذا التقرير ، وتبين لنا كيفية تعديل هذا التحليل لتقدير القيمة النسبية ناهض ب K إلى أن من آخر ناهض. لفحوصات الذي يحمل النشاط التأسيسية ، وتبين لنا كيفية تقدير ب K في وحدات مطلقة من -1 م. لدينا وسيلة لتحليل ناهض التركيز على الاستجابة منحنيات 3،4 يتكونمن الانحدار غير الخطية العالمية باستخدام نموذج تشغيلي 5. نحن تصف الإجراء باستخدام البرنامج التطبيقي ، بريزم (GraphPad برمجيات ، وشركة سان دييغو ، كاليفورنيا). تحليل الغلة تقديرا لنتاج K OBS ومعلمة تتناسب مع فعالية (τ). تقدير τK OBS واحد ناهض ، مقسوما على آخر ، هو قياس نسبي لب K (RA ط) 6. عن أي نشاط مستقبلات المعرض التأسيسي ، فمن الممكن لتقدير معلمة تتناسب مع فعالية مستقبلات معقدة الحرة (τ SYS). في هذه الحالة ، القيمة ب K من ناهض ما يعادل τK OBS / τ SYS 3. لدينا وسيلة مفيدة لتحديد الانتقائية لمستقبلات ناهض لفرعية لقياس وناهض مستقبلات إشارات من خلال مجموعة من البروتينات المختلفة.

Watch this Scientific Journal Video about Quantifying Agonist Activity at G Protein-coupled Receptors at JoVE.com

Quantifying Agonist Activity at G Protein-coupled Receptors

وهناك طريقة لتقدير تقارب مستمر لناهض للدولة النشط (<em&gt; K<sub&gt; ب</sub</emيوصف&gt;) لمستقبلات البروتين يقترن G. التحليل ينص على تدابير المطلقة أو النسبية<em&gt; K<sub&gt; ب</sub</em&gt; اعتمادا على ما إذا التأسيسية تنشيط مستقبلات غير قابلة للقياس. أسلوبنا ينطبق على المصب استجابات مختلفة من التنشيط مستقبلة.

قياس نشاط ناهض في مستقبلات البروتين يقترن G

When an agonist activates a population of G protein-coupled receptors (GPCRs), it elicits a signaling pathway that culminates in the response of the cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

متصور النسخة الدوبامين في محطات قبل المشبكي فردية مع FFNs

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. To observe neurotransmitter uptake and ...

In vivo Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

In vivo Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

الكمي في الجسم الحي من التفاعلات بروتين G مستقبلات اقترن به الطيفي ثنائي الفوتون الميكروسكوب

The study of protein interactions in living cells is an important area of research because the information accumulated both benefits industrial ...

Imaging G-protein Coupled Receptor (GPCR)-mediated Signaling Events that Control Chemotaxis of Dictyostelium Discoideum

Imaging G-protein Coupled Receptor GPCR-mediated Signaling Events that Control Chemotaxis of Dictyostelium Discoideum

التصوير G - مستقبلات البروتين يقترن (GPCR) بوساطة الأحداث يشير إلى أن التحكم في الانجذاب الكيميائي Dictyostelium Discoideum</em

Many eukaryotic cells can detect gradients of chemical signals in their environments and migrate accordingly 1.  This guided cell migration is referred as ...

Genetically-encoded Molecular Probes to Study G Protein-coupled Receptors

المسابر الجزيئية المشفرة وراثيا لدراسة G مستقبلات البروتين يقترن

To facilitate structural and dynamic studies of G protein-coupled receptor (GPCR) signaling complexes, new approaches are required to introduce ...

Characterization of G Protein-coupled Receptors by a Fluorescence-based Calcium Mobilization Assay

توصيف G مستقبلات البروتين يقترن بها الكالسيوم تعبئة الفحص القائم على الإسفار

For more than 20 years, reverse pharmacology has been the preeminent strategy to discover the activating ligands of orphan G protein-coupled receptors ...

Visualizing Clathrin-mediated Endocytosis of G Protein-coupled Receptors at Single-event Resolution via TIRF Microscopy

تصور الإلتقام بالكلاذرين بوساطة من G مستقبلات البروتين يقترن قرار واحد في الحدث عبر الميكروسكوب TIRF

Many important signaling receptors are internalized through the well-studied process of clathrin-mediated endocytosis (CME). Traditional cell biological ...

Correlating Gene-specific DNA Methylation Changes with Expression and Transcriptional Activity of Astrocytic KCNJ10 (Kir4.1)

Correlating Gene-specific DNA Methylation Changes with Expression and Transcriptional Activity of Astrocytic KCNJ10 Kir4.1

ربط الجينات المحددة الحامض النووي التغييرات مع التعبير والترانسكربتي آخر من نجمي<em&gt; KCNJ10</em&gt; (Kir4.1)

DNA methylation serves to regulate gene expression through the covalent attachment of a methyl group onto the C5 position of a cytosine in a ...

Comparative Analysis of Human Growth Hormone in Serum Using SPRi, Nano-SPRi and ELISA Assays

تحليل مقارن لهرمون النمو البشري في المصل عن طريق سبري، نانو-سبري وELISA فحوصات

Sensitive and selective methods for the detection of human growth hormone (hGH) over a wide range of concentrations (high levels of 50-100 ng ml&#8722;1 ...

Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells

يقترن تصوير البروتين G مستقبلات بوساطة الكيميائي والأحداث يشير في خلايا HL60 العدلات مثل

Eukaryotic cells sense and move towards a chemoattractant gradient, a cellular process referred as chemotaxis. Chemotaxis plays critical roles in many ...

Detection of Ligand-activated G Protein-coupled Receptor Internalization by Confocal Microscopy

الكشف عن تنشيط يجند G-إلى جانب البروتين مستقبلات التطبع التي كتبها متحد البؤر المجهري

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) is an optical imaging technique for high-contrast imaging. It is a powerful approach to visualize fluorescent ...