Name: quantifying agonist activity at g protein-coupled receptors
Uploaded: 2011-12-26T12:00:00
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이 작품은 건강 그랜트 GM 69,829의 국립 연구소에 의해 지원되었다.

1. 작용제 농도 - 반응 곡선의 측정 : 없음 제정 활동 <ol><li> 상대 작용제 K B 값의 추정 (RA I)에 대한, 적어도 두 작용제 농도 - 반응 곡선의 연속이 필요합니다. GPCR의 기능 반응에 대한 시험 관내 분석의 모든이 작용제의 농도가 제어 및 수용체 mediates의 단일 유형의 응답 수를 제공 측정할 수 있습니다. 적합 셀 기반 assays 캠프 4,7의 측정 및 재조합 수용?...

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	<li>Stephenson, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+modification+of+receptor+theory.">A modification of receptor theory.</a> British Journal of Pharmacology. 11, 379-393 (1956).</li><li>Furchgott, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+b-haloalkylamines+in+the+differentiation+of+receptors+and+in+the+determination+of+dissociation+constants+of+receptor-agonist+complexes.">The use of b-haloalkylamines in the differentiation of receptors and in the determination of dissociation constants of receptor-agonist complexes.</a> Advances in Drug Research. 3, 21-55 (1966).</li><li>Ehlert, F. J., Suga, H., Griffin, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+agonism+and+inverse+agonism+in+functional+assays+with+constitutive+activity:+Estimation+of+orthosteric+ligand+affinity+constants+for+active+and+inactive+receptor+states.">Analysis of agonism and inverse agonism in functional assays with constitutive activity: Estimation of orthosteric ligand affinity constants for active and inactive receptor states.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 33, 671-686 (2011).</li><li>Griffin, M. T., Figueroa, K. W., Liller, S., Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+Agonist+Activity+at+G+Protein-Coupled+Receptors:+Analysis+of+M2+Muscarinic+Receptor+Signaling+through+Gi/o,Gs,+and+G15.">Estimation of Agonist Activity at G Protein-Coupled Receptors: Analysis of M2 Muscarinic Receptor Signaling through Gi/o,Gs, and G15.</a> J. Pharmacol. Exp. Ther. 321, 1193-1207 (2007).</li><li>Black, J. W., Leff, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Operational+models+of+pharmacological+agonism.">Operational models of pharmacological agonism.</a> Proceedings of the Royal Society of LondonSeries B: Biological Sciences. 220, 141-162 (1983).</li><li>Tran, J. A., Chang, A., Matsui, M., Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+relative+microscopic+affinity+constants+of+agonists+for+the+active+state+of+the+receptor+in+functional+studies+on+M2+and+M3+muscarinic+receptors.">Estimation of relative microscopic affinity constants of agonists for the active state of the receptor in functional studies on M2 and M3 muscarinic receptors.</a> Mol. Pharmacol. 75, 381-396 (2009).</li><li>Schultz, J., Hamprecht, B., Daly, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accumulation+of+adenosine+3':5'-cyclic+monophosphate+in+clonal+glial+cells:+labeling+of+intracellular+adenine+nucleotides+with+radioactive+adenine.">Accumulation of adenosine 3':5'-cyclic monophosphate in clonal glial cells: labeling of intracellular adenine nucleotides with radioactive adenine.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 69, 1266-1270 (1972).</li><li>Berridge, M. J., Downes, C. P., Hanley, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium+amplifies+agonist-dependent+phosphatidylinositol+responses+in+brain+and+salivary+glands.">Lithium amplifies agonist-dependent phosphatidylinositol responses in brain and salivary glands.</a> Biochemical Journal. 206, 587-595 (1982).</li><li>Kendall, D. A., Hill, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Methods in Neurotransmitter Receptor Analysis. , 68-87 (1990).</li><li>Pulido-Rios, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vitro+Isolated+Tissue+Functional+Muscarinic+Receptor+Assays.">Vitro Isolated Tissue Functional Muscarinic Receptor Assays.</a> Current Protocols in Pharmacology. 48, 4-15 (2010).</li><li>Kenakin, T., Enna, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Current Protocols in Pharmacology. , (2001).</li><li>Ehlert, F. J., Griffin, M. T., Sawyer, G. W., Bailon, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=simple+method+for+estimation+of+agonist+activity+at+receptor+subtypes:+comparison+of+native+and+cloned+M3+muscarinic+receptors+in+guinea+pig+ileum+and+transfected+cells.">simple method for estimation of agonist activity at receptor subtypes: comparison of native and cloned M3 muscarinic receptors in guinea pig ileum and transfected cells.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 289, 981-992 (1999).</li><li>Burstein, E. S., Spalding, T. A., Brann, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pharmacology+of+muscarinic+receptor+subtypes+constitutively+activated+by+G+proteins.">Pharmacology of muscarinic receptor subtypes constitutively activated by G proteins.</a> Mol. Pharmacol. 51, 312-319 (1997).</li></ol>

RA I (상대 K B 값)을 계산하는 우리의 방법은 작용제 농도 - 반응 곡선의 측정을 필요로하기 때문에이 곡선이 측정 언제든지, 우리의 분석을 할 수 있습니다. 실험 준비 (예 : 세포 또는 조직)의 응답에 매일 변동이 큰 경우, 각각의 농도 - 반응 곡선의 응답 성능은의 표준 작용제의 &quot;상위&quot;추정 상대적 정상화 수있는 매일 매일의 실험. 상?...

quantifying agonist activity at g protein-coupled receptors

작용제는 G 단백질 결합 수용체 (GPCRs)의 인구를 활성화하면 세포 또는 조직의 반응에 culminates 신호 경로를 elicits. 이 과정은 하나의 수용체, 수용체의 인구, 또는 스트림 응답의 수준에서 분석할 수 있습니다. 여기 하나의 수용체의 활성 상태에 대한 지속적인 작용제 선호도의 추정치를 얻을 수있는 스트림 응답을 분석하는 방법을 설명합니다. 수용체는 quantal 스위치로 동작되는 활성 및 비활성 상태 (그림 1) 사이의 대체. 활성 상태가 특정 G 단백질 신호 또는 기타 파트너와 상호 작용합니다. 리간드의 부재에서 비활성 상태 predominates. 작용제의 바인딩은 활성 상태 (K B)에 대한 상수의 친화력은 비활성 상태 (K)에 대한보다 훨씬 더 때문에 수용체가 활성 상태로 전환됩니다 그 확률을 증가시킵니다. 의 요약인구에있는 수용체의 모든 임의의 출력 시간 수용체 활성화의 일정 수준을 산출. 절반 최대한 수용체 활성을 도출 작용제의 농도의 상호는 관찰 친화 상수 (K obs)에 해당되며, 활성 상태로 작용제 - 수용체 단지의 분율은 효능 (ε) (그림 2)로 정의됩니다. GPCRs의 스트림 응답을 분석하는 방법은 K obs 및 작용제의 1,2의 상대적 효능의 견적을 설정하는 것이 개발되었습니다. 이 보고서에서는, 우리는 다른 작용제의 상대 작용제 K B 값을 추정이 분석을 수정하는 방법을 보여줍니다. 제정 활동을 전시 assays 위해, 우리는 M -1 절대 단위로 K B를 추정하는 방법을 보여줍니다. 작용제 농도 - 반응 곡선 3,4을 분석 우리의 방법으로 구성되어 있습니다운영 모델 5를 사용하고 글로벌 비선형 회귀니다. 우리는 소프트웨어 응용 프로그램, 프리즘 (GraphPad 소프트웨어, 주식, 샌디에고, CA)을 사용하여 프로 시저를 설명합니다. 분석 K의 제품 obs과 효능 (τ)에 비례 매개 변수 견적을 산출. 다른의에 의해 조각나 작용제의 τK obs,의 추정치는 K B의 상대 측정 (RA I) 6입니다. 제정 활동을 전시하는 수용체에 대한, 그것은 무료 수용체 복합의 효능 (τ 치세요)에 비례 매개 변수를 추정하는 것이 가능합니다. 이 경우, 작용제의 K B 값은 τK obs / τ 치세요 3 동일합니다. 우리의 방법은 수용체 subtypes에 대한 작용제의 선택도를 결정하고 다른 G 단백질을 통해 작용제 - 수용체의 신호를 quantifying하는 데 유용합니다.

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Quantifying Agonist Activity at G Protein-coupled Receptors

활성 상태 작용제의 친화력이 상수 계산하는 방법 (<em&gt; K<sub&gt; B</sub</em&gt;) G 단백질 결합 수용체의이 설명되어 있습니다. 분석의 절대 또는 상대 조치를 제공합니다<em&gt; K<sub&gt; B</sub</em&gt; 제정 수용체​​ 활성화는 측정 여부에 따라 다릅니다. 우리의 방법은 수용체 활성화 다양한 응답 스트림에 적용됩니다.

G 단백질 결합 수용체에 작용제 활동 Quantifying

When an agonist activates a population of G protein-coupled receptors (GPCRs), it elicits a signaling pathway that culminates in the response of the cell ...

Research

JoVE Journal

Biology

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

개인 Presynaptic 터미널에서 도파민 릴리스 FFNs와 시각

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. To observe neurotransmitter uptake and ...

연구

생물학

In vivo Quantification of G Protein Coupled Receptor Interactions using Spectrally Resolved Two-photon Microscopy

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Spectrally 해결된 두 광자 현미경을 사용하여 G 단백질 결합 수용체 상호 작용의 생체내 부량에서

The study of protein interactions in living cells is an important area of research because the information accumulated both benefits industrial ...

Imaging G-protein Coupled Receptor (GPCR)-mediated Signaling Events that Control Chemotaxis of Dictyostelium Discoideum

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이미징 G - 단백질 결합 수용체 (GPCR) - 중재 신호 행사 그 제어 Chemotaxis Dictyostelium Discoideum</em

Many eukaryotic cells can detect gradients of chemical signals in their environments and migrate accordingly 1.  This guided cell migration is referred as ...

Genetically-encoded Molecular Probes to Study G Protein-coupled Receptors

유전자 인코딩 분자 프로브는 G 단백질 결합 수용체를 연구하는

To facilitate structural and dynamic studies of G protein-coupled receptor (GPCR) signaling complexes, new approaches are required to introduce ...

Characterization of G Protein-coupled Receptors by a Fluorescence-based Calcium Mobilization Assay

형광 기반의 칼슘 동원 분석에 의해 G 단백질 결합 수용체의 특성

For more than 20 years, reverse pharmacology has been the preeminent strategy to discover the activating ligands of orphan G protein-coupled receptors ...

Visualizing Clathrin-mediated Endocytosis of G Protein-coupled Receptors at Single-event Resolution via TIRF Microscopy

TIRF 현미경을 통해 단일 ​​이벤트 해상도에서 G 단백질 결합 수용체의 Clathrin 매개 엔도 시토 시스를 시각화

Many important signaling receptors are internalized through the well-studied process of clathrin-mediated endocytosis (CME). Traditional cell biological ...

Correlating Gene-specific DNA Methylation Changes with Expression and Transcriptional Activity of Astrocytic KCNJ10 (Kir4.1)

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유전자 특이 발현과 DNA 메틸화 변화와 성상 세포의 전사 활동의 상관 관계<em&gt; KCNJ10</em&gt; (Kir4.1)

DNA methylation serves to regulate gene expression through the covalent attachment of a methyl group onto the C5 position of a cytosine in a ...

Comparative Analysis of Human Growth Hormone in Serum Using SPRi, Nano-SPRi and ELISA Assays

SPRI, 나노 SPRI 및 ELISA 분석 실험을 사용하여 혈청에있는 인간 성장 호르몬의 비교 분석

Sensitive and selective methods for the detection of human growth hormone (hGH) over a wide range of concentrations (high levels of 50-100 ng ml&#8722;1 ...

Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells

이미징 G의 호중구와 같은 HL60 세포에서 화성과 시그널링 이벤트 수용체가 매개 단백질 결합

Eukaryotic cells sense and move towards a chemoattractant gradient, a cellular process referred as chemotaxis. Chemotaxis plays critical roles in many ...

Detection of Ligand-activated G Protein-coupled Receptor Internalization by Confocal Microscopy

공 초점 현미경으로 리간드 - 활성화 된 G 단백질 결합 수용체 내재화 검출

Confocal laser scanning microscopy (CLSM) is an optical imaging technique for high-contrast imaging. It is a powerful approach to visualize fluorescent ...