Name: patterning of embryonic stem cells using the bio flip chip
Uploaded: 2007-10-01T13:21:11
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip at JoVE.com

<p> Dit werk werd ondersteund door NIH subsidie ​​EB007278. </p>

<p class="jove_title"> Het maken van een BFC </p><p class="jove_content"><strong></strong> BFCs zijn gemaakt door het vormen polydimethylsiloxaan (PDMS) over een 4 &quot;Si meester wafer. </p><p class="jove_step"> Maken van een master wafer </p><ol><li> Begin met het drogen van Si wafers gedurende 30 minuten bij 130 ° C. </li><li> Plaats de wafer op een spin-coater, giet SU8-2050 (Microchem) op de wafer, helling van 300 rpm / s tot +3.000 tot 4000 rpm, en de spin voor de 30 s te voorzien van een hoogte van 40-30 mm opbrengst, respectievelijk. ...

<ol>
	<li>Rosenthal, A., Macdonald, A., Voldman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Patterning+Chip+for+Controlling+the+Stem+Cell+Microenvironment.">Cell Patterning Chip for Controlling the Stem Cell Microenvironment.</a> <em style='font-style: italic'>Biomaterials</em>. <b>28</b>, 3208-3216 (2007).</li></ol>

<p> Hoewel het protocol en de video hier weergegeven beschrijven met behulp van de CBF <sup>1</sup> tot en met patroon muis embryonale stamcellen (mESCs), kan BFCs worden gebruikt om patronen praktisch elk celtype van belang. De enige verandering kan men moet maken is te wijzigen van de grootte van de microwells. In onze ervaring, om de CBF te gebruiken om het patroon enkele cellen van een ander celtype, een microwell diameter en hoogte gelijk is aan 10 micron groter is dan de losse cel diameter het beste werkt. </p><p> BFCs kan ook worden gebr...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PDMS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dw Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicon master mould</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>35-3001</td>
<td>35 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>3/4" binder clips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hexamethyldisiloxane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Shin-Etsu MicroSi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Microchem</td>
<td>SU8-2050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PM acetate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>7.5% Bovine Serum Albumin </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patterning of embryonic stem cells using the bio flip chip

<p class="jove_content"> Cel-cel interacties, bestaande uit diffundeerbare signalering en cel-cel contact (juxtacrine signalering) zijn van belang in tal van biologische processen, zoals de groei van tumoren, stamcel differentiatie en stamcellen zelfvernieuwing. Een aantal van de methoden die momenteel bestaan ​​om moduleren cell signaling in vitro. Een methode van het moduleren van de totale hoeveelheid diffundeerbare signalering is om de cel te zaaien dichtheid variëren gedurende cultuur. Als gevolg van de willekeurige aard van de cel zaaien, leidt dit tot een aanzienlijke variatie in de feitelijke cel-cel afstand en de hoeveelheid van cel-cel contact, en kan niet voorschrijven de lokale omgeving. Een meer specifieke aanpak voor het moduleren van cell signaling is aan moleculaire remmers of genetische benaderingen te gebruiken om knock down specifieke signaaleiwitten, maar beide methoden zijn het meest geschikt voor het manipuleren van kleine aantallen moleculen. Hier tonen we een nieuwe benadering van het moduleren van cel-cel signalering dat de lokale omgeving van een cluster van cellen door het plaatsen van een verschillend aantal cellen op de gewenste locaties op een substraat moduleert. Deze methode biedt een aanvullende manier om de lokale diffundeerbare en juxtacrine signalering tussen cellen te controleren. Onze methode maakt gebruik van de Bio Flip Chip (CBF), een microfabricated siliconen chip met honderden-to-duizenden microwells, iedere grootte om ofwel een enkele cel of kleine aantallen cellen te houden. We laden de chip met cellen gewoon door pipetteren ze op de array van putten en het wassen gelost cellen uit de array. De chip wordt dan omgedraaid op een substraat, waarbij de cellen vallen uit de putten en op de ondergrond, met behoud van hun patroon. Nadat de cellen hebben aangesloten, kan de chip worden verwijderd (of links op). Deze benadering van cel patronen is uniek in die zin dat: 1) verandert niets aan de chemie van de ondergrond, waardoor cellen te laten groeien en te migreren, 2) maakt het mogelijk patronen op elke ondergrond, inclusief weefselkweek polystyreen, glas, Matrigel, en zelfs feeder cellagen, en 3) is compatibel met de traditionele microcontact drukken, waardoor de creatie van extracellulaire matrix eilanden met cellen geplaatst in deze eilanden. In deze video, tonen we de patronen van muis embryonale stamcellen op tissue-cultuur polystyreen met behulp van de CBF. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip at JoVE.com

Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

<p class="jove_content">Demonstreren we een eenvoudige methode voor het plaatsen van cellen op de gewenste locaties op een substraat. Deze methode patronen cellen door het opgooien van een siliconen chip met microwells gevuld met cellen op de ondergrond. Deze methode biedt een nieuwe manier te moduleren diffundeerbare en juxtacrine signalering tussen cellen.</p>

Patroonvorming van embryonale stamcellen Met behulp van de Bio Flip Chip

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Verspreiding van menselijke embryonale stamcellen (ES) cellen

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Afleiding van hematopoietische stamcellen van muriene embryonale stamcellen

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-lymfocyten Capture Met behulp van een Wegwerp Microfluïdische Chip voor HIV

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

RNA-extractie uit Neuroprecursor cellen met behulp van de Bio-Rad Totaal RNA Kit

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Afleiding van menselijke embryonale stamcellen door Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatine immunoprecipitatie van menselijke embryonale stamcellen

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro differentiatie van muis embryonale stamcellen (MES) cellen met behulp van de Opknoping neerzetten

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Cultuur en onderhoud van menselijke embryonale stamcellen

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Invriezen en ontdooien van menselijke embryonale stamcellen

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolatie en Afleiding van muis embryonale cellen Germinal

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...