Name: patterning of embryonic stem cells using the bio flip chip
Uploaded: 2007-10-01T13:21:11
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip at JoVE.com

<p> Diese Arbeit wurde vom NIH EB007278 unterstützt. </p>

<p class="jove_title"> Einen BFC </p><p class="jove_content"><strong></strong> BFCS werden durch Formen Polydimethylsiloxan (PDMS) über einen 4 &quot;Si-Wafer Meister gemacht. </p><p class="jove_step"> Einen Master-Wafer </p><ol><li> Starten Sie durch Dehydratisierung der Si-Wafer für 30 min bei 130 ° C. </li><li> Legen Sie die Wafer auf einem Spin-Coater, pour SU8-2050 (Microchem) auf den Wafer, Rampe von 300 rpm / s 3000-4000 Umdrehungen pro Minute und Spin für 30 s auf Funktion Höhen von 40-30 mm Ausbeute. </li><li> Nach dem Spinnen, st...

<ol>
	<li>Rosenthal, A., Macdonald, A., Voldman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Patterning+Chip+for+Controlling+the+Stem+Cell+Microenvironment.">Cell Patterning Chip for Controlling the Stem Cell Microenvironment.</a> <em style='font-style: italic'>Biomaterials</em>. <b>28</b>, 3208-3216 (2007).</li></ol>

<p> Obwohl das Protokoll und Video hier gezeigt beschreiben mit dem BFC <sup>1</sup> bis Muster embryonalen Stammzellen der Maus (mESCs), kann BFCS verwendet, um Muster praktisch jeder Zelltyp von Interesse sein. Die einzige Veränderung braucht man, um möglicherweise ist es, die Größe der Kavitäten zu ändern. In unserer Erfahrung, die BFC, um Muster einzelner Zellen eines anderen Zelltyp, ein Mikrotiterplatten Durchmesser und Höhe gleich 10 Mikrometer größer als die ungebundenen Zelldurchmesser verwenden am besten funktioniert. </p><p>...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PDMS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dw Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicon master mould</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>35-3001</td>
<td>35 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>3/4" binder clips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hexamethyldisiloxane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Shin-Etsu MicroSi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Microchem</td>
<td>SU8-2050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PM acetate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>7.5% Bovine Serum Albumin </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patterning of embryonic stem cells using the bio flip chip

<p class="jove_content"> Zell-Zell-Interaktionen, bestehend aus diffusible Signal-und Zell-Zell-Kontakt (juxtacrine Signalisierung) werden in zahlreichen biologischen Prozessen wie Tumorwachstum, Stammzell-Differenzierung und Stammzell-Selbsterneuerung wichtig. Eine Reihe von Methoden gibt es derzeit zu modulieren Zellsignalisierung in vitro. Ein Verfahren zur Modulation der Gesamtbetrag der diffusible Signalisierung ist für die Zelle Aussaatdichte während der Kultur variieren. Durch die zufällige Natur Zellaussaat, führt dies zu erheblichen Abweichungen der tatsächlichen Zell-Zell-Abstand und Höhe der Zell-Zell-Kontakt, und können nicht vorschreiben, das lokale Umfeld. Ein Ansatz zur Modulation Zellsignalisierung ist es, molekulare Inhibitoren oder genetische Ansätze nutzen, um knock down spezifische Signalproteine, aber diese beiden Methoden sind am besten zu manipulieren kleine Anzahl von Molekülen geeignet. Hier zeigen wir einen neuen Ansatz zur Modulation von Zell-Zell-Signalisierung, dass die lokale Umgebung aus einem Cluster von Zellen, indem sie eine unterschiedliche Anzahl von Zellen an gewünschten Stellen auf einem Substrat moduliert. Diese Methode stellt eine ergänzende Möglichkeit, die lokalen diffusionsfähig und juxtacrine Signalisierung zwischen Zellen steuern. Unsere Methode nutzt die Bio Flip Chip (BFC), einem mikrostrukturierten Silikon-Chip mit Hunderten zu Tausenden von Vertiefungen, die jeweils so bemessen, dass entweder eine einzelne Zelle oder eine kleine Anzahl von Zellen zu halten. Wir laden den Chip mit Zellen einfach durch Pipettieren sie auf die Anordnung von Brunnen und waschen unbelasteten Zellen aus dem Array. Der Chip wird dann umgedreht auf ein Substrat, wobei die Zellen aus Fall der Brunnen und auf das Substrat, Erhaltung ihrer Strukturierung. Nachdem die Zellen angeschlossen haben, kann der Chip entfernt (oder links) zu unterstützen. Dieser Ansatz zur Zelle Musterung ist einzigartig, da es: 1) ändert nichts an der Chemie des Substrats, so dass Zellen sich zu vermehren und zu migrieren, 2) ermöglicht Musterung auf ein beliebiges Substrat, einschließlich Gewebe-Kultur Polystyrol, Glas, Matrigel und sogar Feeder Zellschichten, und 3) ist verträglich mit traditionellen Mikrokontaktdrucken, so dass die Schaffung von extrazellulären Matrix Inseln mit Zellen innerhalb dieser Inseln platziert. In diesem Video zeigen wir die Strukturierung von embryonalen Stammzellen der Maus auf Gewebekultur-Polystyrol mit dem BFC. </p>

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Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

<p class="jove_content">Wir zeigen eine einfache Methode für die Platzierung Zellen an gewünschten Stellen auf einem Substrat. Diese Methode Mustern Zellen, indem ein Silikon-Chip mit Vertiefungen, die mit Zellen auf dem Substrat gefüllt. Diese Methode bietet eine neue Art und Weise zu modulieren diffusionsfähig und juxtacrine Signalisierung zwischen den Zellen.</p>

Strukturierung von embryonalen Stammzellen mit dem Bio Flip Chip

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Vermehrung von humanen embryonalen Stammzellen (ES-Zellen)

Forschung

Biologie

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Ableitung von hämatopoetischen Stammzellen aus embryonalen Stammzellen der Maus

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-Lymphozyten Erfassen mit einem Einweg-Mikrofluidik-Chip für HIV

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

RNA Extraktion aus Neuroprecursor Zellen unter Verwendung des Bio-Rad Total RNA Kit

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Gewinnung menschlicher embryonaler Stammzellen durch Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Chromatin Immunopräzipitation von humanen embryonalen Stammzellen

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

In-vitro-Differenzierung von embryonalen Stammzellen der Maus (mES) Zellen unter Verwendung des Hanging-Drop-Methode

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Kultur und Wartung von humanen embryonalen Stammzellen

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Einfrieren und Auftauen humanen embryonalen Stammzellen

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolation und Ableitung von embryonalen Maus-Keimzellen

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...