Name: patterning of embryonic stem cells using the bio flip chip
Uploaded: 2007-10-01T13:21:11
Description: Watch this Scientific Journal Video about Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip at JoVE.com

<p> Detta arbete stöddes av NIH bidrag EB007278. </p>

<p class="jove_title"> Göra en BFC </p><p class="jove_content"><strong></strong> BFCs sker genom gjutning Polydimetylsiloxan (PDMS) under en 4 &quot;Si mästare wafer. </p><p class="jove_step"> Göra en mästare wafer </p><ol><li> Börja med att torkning av Si wafers i 30 min vid 130 ° C. </li><li> Placera rånet på en spin-bestrykare, häll SU8-2050 (Microchem) på skivan, rampen från 300 rpm / s till 3000-4000 rpm, och snurra i 30 s för att ge inslag höjder av 40-30 mm, respektive. </li><li> Efter spinning, placera skivan på en 65 ° C...

<ol>
	<li>Rosenthal, A., Macdonald, A., Voldman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Patterning+Chip+for+Controlling+the+Stem+Cell+Microenvironment.">Cell Patterning Chip for Controlling the Stem Cell Microenvironment.</a> <em style='font-style: italic'>Biomaterials</em>. <b>28</b>, 3208-3216 (2007).</li></ol>

<p> Även om protokollet och video visas här beskriva med BFC <sup>1</sup> till embryonala mönster mus stamceller (mESCs) kan BFCs användas för att mönstret nästan alla celltyper av intresse. Den enda förändring man kan behöva göra är att ändra storleken på mikrobrunnarna. Enligt vår erfarenhet att använda BFC att mönstret enstaka celler av en annan celltyp, en brunn diameter och höjd som motsvarar 10 mikrometer större än den fria cellen diameter fungerar bäst. </p><p> BFCs kan också användas för att mönster celler på a...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>PDMS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dw Corning</td>
<td>Sylgard 184</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Silicon master mould</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tissue culture dishes</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Falcon</td>
<td>35-3001</td>
<td>35 mm</td>
</tr>
<tr>
<td>3/4" binder clips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PBS</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>hexamethyldisiloxane</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Shin-Etsu MicroSi</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>New Item</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Microchem</td>
<td>SU8-2050</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>PM acetate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Isopropanol</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BSA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>7.5% Bovine Serum Albumin </td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>
	

patterning of embryonic stem cells using the bio flip chip

<p class="jove_content"> Cell-cell interaktioner som består av diffusionsväte signalering och cell-cell kontakt (juxtacrine signalering) är viktiga i många biologiska processer som tumörtillväxt, stamceller differentiering och stamceller självförnyelse. Ett antal metoder finns för närvarande för att modulera cellsignalering in vitro. En metod att modulera den totala mängden diffusionsväte signalering är att variera densiteten cellen sådd under kultur. På grund av den slumpmässiga karaktären av cellens kärna ur, detta resulterar i stor variation i den faktiska cell-cell avstånd och mängden av cell-cell kontakt och kan inte ordinera den lokala miljön. En mer specifik metod för modulerande cellsignalering är att använda molekylära inhibitorer eller genetiska metoder för att slå ner specifika signalproteiner, men båda dessa metoder är bäst lämpade att manipulera litet antal molekyler. Här visar vi en ny metod för modulerande cell-cell signalering som modulerar den lokala miljön av ett kluster av celler genom att placera olika antal celler vid önskade platser på ett substrat. Denna metod ger ett kompletterande sätt att styra den lokala diffusionsväte och juxtacrine signalering mellan celler. Vår metod använder sig av Bio Flip Chip (BFC), en mikrofabricerade silikon chip som innehåller hundratals till tusentals mikrobrunnar, varje storlek antingen att inneha en enskild cell eller ett litet antal celler. Vi lastar chipet med celler genom att pipettera dem på rad brunnarna och tvätta lossas celler från matrisen. Chipet är sedan vänt på ett substrat, där cellerna falla ut ur brunnar och på underlaget, behålla sina mönster. När cellerna har bifogat, kan chipet tas bort (eller vänster på). Detta sätt att cellen mönster är unikt genom att det: 1) inte ändrar kemin i underlaget, vilket gör att cellerna att föröka sig och flytta, 2) gör mönster på alla underlag, inklusive vävnad-kultur polystyren, glas, matrigel och även feeder cellager, och 3) är förenlig med traditionella microcontact utskrift, som möjliggör skapandet av extracellulära matrix öar med celler som placeras inuti dessa öar. I denna video visar vi den mönstring av musen embryonala stamceller på vävnader-kultur polystyren med BFC. </p>

Watch this Scientific Journal Video about Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip at JoVE.com

Patterning of Embryonic Stem Cells Using the Bio Flip Chip

<p class="jove_content">Vi visar en enkel metod för att placera celler på önskade platser på ett substrat. Denna metod mönster celler genom att bläddra en silikon-chip som innehåller mikrobrunnar fylld med celler på underlaget. Denna metod ger ett nytt sätt att modulera diffusionsväte och juxtacrine signalering mellan celler.</p>

Mönstring av embryonala stamceller med hjälp av Bio Flip Chip

Cell-cell interactions consisting of diffusible signaling and cell-cell contact (juxtacrine signaling) are important in numerous biological processes such ...

Research

JoVE Journal

Biology

Propagation of Human Embryonic Stem (ES) Cells

Propagation of Human Embryonic Stem ES Cells

Spridning av mänskliga embryonala stamceller (ES-celler)

Derivation of Hematopoietic Stem Cells from Murine Embryonic Stem Cells

Härledning av hematopoetiska stamceller från Murine embryonala stamceller

A stem cell is defined as a cell with the capacity to both self-renew and generate multiple differentiated progeny.  Embryonic stem cells (ESC) are ...

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-lymfocyter ta med en engångs Mikroflödessystem Chip för HIV

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

RNA-extraktion från Neuroprecursor celler med Bio-Rad Totalt RNA Kit

Derivation of Human Embryonic Stem Cells by Immunosurgery

Derivering av mänskliga embryonala stamceller genom Immunosurgery

The ability of human embryonic stem cells to self-renew and differentiate into all cell types of 
the body suggests that they hold great promise for both ...

Chromatin Immunoprecipitation from Human Embryonic Stem Cells

Kromatin Immunoprecipitation från mänskliga embryonala stamcellslinjer

The functional and structural complexity of the myriad of cells in metazoan organisms arises from a small number of stem cells. Stem cells are ...

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem (mES) Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro Differentiation of Mouse Embryonic Stem mES Cells Using the Hanging Drop Method

In vitro-differentiering av Mouse embryonala stamceller (MES) celler med hängande släpp-metoden

Stem cells have the remarkable potential to develop into many different cell types. When a stem cell divides, each new cell has the potential to either ...

Culture and Maintenance of Human Embryonic Stem Cells  

Kultur och underhåll av mänskliga embryonala stamcellslinjer

Human embryonic stem (hES) cells must be monitored and cared for in order to maintain healthy, undifferentiated cultures. At minimum, the cultures must be ...

Freezing and Thawing Human Embryonic Stem Cells

Nedfrysning och upptining mänskliga embryonala stamcellslinjer

Since James Thomson et al developed a technique in 1998 to isolate and grow hES in culture, freezing cells for later use and thawing and expanding cells ...

Isolation and Derivation of Mouse Embryonic Germinal Cells

Isolering och Härledning av Mouse Embryonala Germinal celler

The ability of embryonic germinal cells (EG) to differentiate into primordial germinal cells (PGCs) and later into gametes during early developmental ...