Name: mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00
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Pesquisa para prevenir a cegueira; Bartly J. Mondino MD, Diretor do Jules Stein Eye Institute, UCLA, e Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui Branco, e Jeanne Estabel no Instituto Sanger, Wellcome Trust Genome Campus. Esta pesquisa está em conformidade com a Declaração de ARVO para o Uso de Animais em Oftalmologia e Pesquisa Visual.

1. Dissecção Blunt: Enucleação do olho do rato em amostras não corrigidos <ol><li> Separar as pálpebras para melhorar a exposição e o acesso ao mundo posterior (globo ocular) de superfície. </li><li> Coloque uma pinça de vestir curva por trás (abaixo) o globo na órbita (órbita). O Mahajan Sharptip vestir fórceps é um instrumento personalizado com pontas para facilitar essa etapa (ver materiais e reagentes de mesa). </li><li> Feche a pinça e captar o tecido conjuntivo orbital e nervo óptico atrás do g...

<ol>
	<li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy.">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li><li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System.">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li><li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In Research Methods For Mutant Mice. , (2002).</li><li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li><li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA/2J+mice.">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li><li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+fundus+photography+and+angiography:+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes.">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li><li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+resources+for+vision+research.">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li><li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus.">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li><li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy,+electroretinograms,+and+histology.">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li><li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase.">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li><li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+(PDE6B)+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness.">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li></ol>

Camundongos transgênicos mais existem em laboratórios que não examinam os olhos. Nossa técnica vídeo mostra um método simples e padronizada para a transferência remota de habilidade cirúrgica para otimizar a aquisição de tecidos a partir de laboratórios com pouca experiência com os olhos. Esta técnica de vídeo ajuda a superar um grande armadilha em alto rendimento fenotipagem, que é a utilização de um número limitado de locais especializados devido a métodos não normalizados de recolha de tecidos e q...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome </th><th> Companhia </th><th> Número de catálogo </th><th> Comentários </th></tr><tr><td> Pinça curva Vestir </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip vestir fórceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> Curvas Tesoura Westcott </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver Microsurgical Lâmina </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 Fine-Castroviejo Fórceps suturando </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0,12 Colibri fórceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> Calibre 30 agulha </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Pescador </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Vidro de cintilação frascos </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldeído 16% </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15700 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% paraformaldeído Glutaraldeído / 2,5% em 0,1 M de tampão fosfato de sódio </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15700 e 16300 </td><td> Misturados em laboratório </td></tr><tr><td> O glutaraldeído a 50% </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 16300 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% Formvar </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15810 </td><td></td></tr><tr><td> PolicialGrade por slot </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> Tetróxido de ósmio a 4% </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 19140 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-anticorpo SOD3 </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> Cabra anti-coelho Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Resina Spurr incorporação de </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 14300 </td><td></td></tr></tbody></table>

mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping

O olho do rato é um modelo genético importante para o estudo da doença de translação oftálmica humana. Doenças que causam cegueira em humanos, tais como a degeneração macular, a degeneração de fotorreceptores, cataratas, glaucoma, retinoblastoma, e retinopatia diabética foram recapitulado em ratinhos transgénicos. 1-5 ratinhos transgénicos e knockout maioria foram gerados por laboratórios para estudar doenças não oftálmicas, mas conservação genética entre os sistemas de órgãos sugere que muitos dos mesmos genes podem também desempenhar um papel no desenvolvimento ocular e doenças. Assim, estes ratos representam um recurso importante para a descoberta de novas correlações genótipo-fenótipo no olho. Porque esses ratos estão espalhados por todo o mundo, é difícil de adquirir, manter e fenótipo-los de forma eficiente, boa relação custo-benefício. Assim, a maioria de alto rendimento telas fenotipagem oftálmicas são restritos a alguns locais que necessitam no local, a perícia oftalmológica para examinar os olhos em camundongos vivos. 6-9 Uma abordagem alternativa desenvolvida pelo nosso laboratório é um método para o controle remoto de aquisição tecido que pode ser utilizado em estudos de grandes dimensões ou de pequena escala de olhos de ratinhos transgénicos. Procedimentos padronizados para vídeo baseado em transferência de habilidade cirúrgica, fixação do tecido, e transporte permitem que qualquer laboratório para coletar olhos inteiros de animais mutantes e enviá-las para fenotipagem molecular e morfológica. Neste artigo de vídeo, nós apresentamos técnicas para enuclear e transferir ambos não corrigidos e perfusão olhos de rato fixos para análises fenotípicas remotos.

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Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

A técnica de dissecção ilustra enucleação do olho do rato para fixação do tecido para realizar fenotipagem em alto rendimento telas.

Enucleação Rato Olho para fenotipagem de alta capacidade remota

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Research

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High Throughput ELISA sequencial para a validação dos biomarcadores da doença enxerto-versus-hospedeiro aguda

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Um Sistema Organotípicas alta taxa de transferência para Caracterização de Drogas de sensibilidade de células de mieloma múltiplo primárias

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Etiquetagem de corantes fluorescentes de eritrócitos e leucócitos para estudar a dinâmica do fluxo na circulação da retina do mouse

The retinal and choroidal blood flow dynamics may provide insight into the pathophysiology and sequelae of various ocular diseases, such as glaucoma, ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

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Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

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