Name: mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00
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Investigación para Prevención de la Ceguera; Bartly J. Mondino MD, Director del Jules Stein Eye Institute de UCLA, y Ramiro Ramírez-Solís, Jacqui Blanca, y Jeanne Estabel en el Instituto Sanger, Wellcome Trust Genoma Campus. Esta investigación cumple con la Declaración de ARVO para el Uso de Animales en Investigación Oftalmológica y Visual.

1. Disección Blunt: Enucleación del ojo del ratón en las muestras no fijadas <ol><li> Separar los párpados para mejorar la exposición y el acceso al mundo posterior (globo ocular) superficie. </li><li> Coloque un vendaje fórceps curvo detrás (en) el mundo en la órbita (cuenca del ojo). El Mahajan Sharptip aderezo fórceps es un instrumento de medida con puntas de hacer este paso más fácil (ver materiales y reactivos de mesa). </li><li> Cierre la pinza y agarrar el tejido conectivo orbital y el nervio óptico...

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	<li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy.">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li><li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System.">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li><li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In Research Methods For Mutant Mice. , (2002).</li><li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li><li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA/2J+mice.">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li><li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+fundus+photography+and+angiography:+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes.">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li><li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+resources+for+vision+research.">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li><li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus.">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li><li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy,+electroretinograms,+and+histology.">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li><li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase.">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li><li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+(PDE6B)+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness.">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li></ol>

Mayoría de los ratones transgénicos que existen en laboratorios que no examinan los ojos. Nuestra técnica de vídeo ilustra un método simple estandarizado para la transferencia remota habilidad quirúrgica para optimizar la adquisición de tejido de laboratorios con poca experiencia con los ojos. Esta técnica ayuda a vídeo superar un escollo importante en alto rendimiento fenotipificación, que es el uso de un número limitado de sitios de expertos por razones de métodos no normalizados de recogida de tejido y la...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nombre </th><th> Empresa </th><th> Número de Catálogo </th><th> Comentarios </th></tr><tr><td> Fórceps curvo Vestir </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip aderezo fórceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64520) </td><td></td></tr><tr><td> Curvas Tijeras Westcott </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver Microsurgical hoja </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374881 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 Fine-Castroviejo Pinza para Sutura </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0,12 Colibri fórceps </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> 30-aguja de calibre </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Pescador </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Pescador </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Viales de centelleo de vidrio </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 16% de paraformaldehído </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 15700 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% de paraformaldehído / 2,5% de glutaraldehído en tampón de fosfato sódico 0,1 M </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 15700 y 16300 </td><td> Mezclado en laboratorio </td></tr><tr><td> 50% de glutaraldehído </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 16300 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% Formvar </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 15810 </td><td></td></tr><tr><td> Policíapor cuadrícula Slot </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> 4% de tetróxido de osmio </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 19140 </td><td></td></tr><tr><td> Anticuerpo anti-SOD3 </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> De cabra anti-conejo Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Incrustación de resina de Spurr </td><td> Microscopía Electrónica de Ciencias </td><td> 14300 </td><td></td></tr></tbody></table>

mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping

El ojo del ratón es un modelo genético importante para el estudio de traslación de la enfermedad oftálmica humano. Enfermedades que causan ceguera en los seres humanos, como la degeneración macular, degeneración de los fotorreceptores, las cataratas, el glaucoma, el retinoblastoma y la retinopatía diabética se han recapitulado en ratones transgénicos. 1-5 mayoría de los ratones transgénicos y knock-out han sido generados por los laboratorios para estudiar las enfermedades no oftalmológicas, pero conservación genética entre los sistemas de órganos sugiere que muchos de los mismos genes también puede desempeñar un papel en el desarrollo y la enfermedad ocular. Por lo tanto, estos ratones representan un recurso importante para el descubrimiento de nuevas correlaciones genotipo-fenotipo en el ojo. Debido a que estos ratones se encuentran dispersos en todo el mundo, es difícil de adquirir, mantener y fenotipo ellos de una manera eficiente y rentable manera. Así, la mayoría de alto rendimiento pantallas fenotipificación oftálmicas se limita a unos pocos lugares que requieren en el lugar, la experiencia oftálmica para examinar los ojos en ratones vivos. 6-9 Un enfoque alternativo desarrollado por nuestro laboratorio es un método para la adquisición remota de tejido que se puede utilizar en grandes encuestas o en pequeña escala de los ojos de ratones transgénicos. Los procedimientos estandarizados de vídeo basado en la transferencia de habilidades quirúrgicas, la fijación del tejido, y el envío permitir que cualquier laboratorio para recolectar los ojos enteros de animales mutantes y enviarlos por fenotipificación molecular y morfológica. En este artículo, video, presentamos las técnicas de la enucleación y transferir los ojos fijos tanto no fijadas y la perfusión de ratón para el análisis fenotípicos remotos.

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Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

La técnica de disección ilustra la enucleación del ojo del ratón para la fijación del tejido para realizar el fenotipado de alto rendimiento pantallas.

Ratón enucleación del ojo por remoto de alto rendimiento fenotipificación

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

Una plataforma automatizada de alto rendimiento para el desarrollo de líneas celulares de fabricación de proteínas terapéuticas

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

Investigación

Medicina

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

Un modelo de ratón de la Prueba de bolsillo para el Estudio de la angiogénesis de córnea

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Hiperinsulinémico euglucémico abrazaderas en ratones conscientes, sin freno

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Navegación magnética remota de información precisa, la posición del catéter en tiempo real y la ablación en Electrofisiología Cardiaca Procedimientos

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Alto rendimiento secuencial ELISA para la Validación de Biomarcadores de aguda injerto contra huésped

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

Alto rendimiento caracterización de células madre adultas de ingeniería para la entrega de los factores terapéuticos de estrategias neuroprotectoras

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

Fluorescent Dye Labeling of Erythrocytes and Leukocytes for Studying the Flow Dynamics in Mouse Retinal Circulation

Etiquetado de colorantes fluorescentes de eritrocitos y leucocitos para estudiar la dinámica de flujo en la circulación de la retina del ratón

The retinal and choroidal blood flow dynamics may provide insight into the pathophysiology and sequelae of various ocular diseases, such as glaucoma, ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Tratamiento quirúrgico de la hiperplasia prostática benigna: Holmium láser enucleación de la próstata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

Neovascularization del diafragma como un modelo de ratón de iridis del rubeosis inducida por la punción

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled Cholesterol Efflux Assay

Ensayo de eflujo de colesterol marcado con Nitrobenzoxadiazole de alto rendimiento

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in ...