Name: mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping
Uploaded: 2011-11-19T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping at JoVE.com

Forskning för att förhindra blindhet, Bartly J. Mondino MD, chef för Jules Stein Eye Institute, UCLA och Ramiro Ramirez-Solis, Jacqui White och Jeanne Estabel på Sanger Institute, Wellcome Trust Genome Campus. Denna forskning uppfyller ARVO uttalande för användning av djur i Ophthalmic och Visual Research.

1. Dissektion: enucleation av musen ögat ofixerade prover <ol><li> Dra isär ögonlocken för att förbättra exponeringen och tillgång till den bakre världen (ögongloben) yta. </li><li> Placera en böjd förband tång bakom (under) jorden i omloppsbana (ögonhålan). Den Mahajan Sharptip förband tång är en anpassad instrument med spetsiga tips för att göra detta steg enklare (se material och reagenser tabell). </li><li> Stäng tång och ta tag i omloppsbanor bindväv och synnerven bakom världen samtidigt so...

<ol>
	<li>Song, B. J., Tsang, S. H., Lin, C. -. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+models+of+retinal+degeneration+and+targets+for+gene+therapy.">Genetic models of retinal degeneration and targets for gene therapy.</a> Gene Ther. Mol. Biol. 11, 229-262 (2007).</li><li>Mahajan, V. B., Mondino, B. J., Tsang, S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+Mouse+Eye+Phenomics+System.">A high-throughput Mouse Eye Phenomics System.</a> Cold Spring Harbor Laboratories, Mouse Genetics Meeting. , (2010).</li><li>Smith, R. S., John, S. W. M., Nishina, P. M., Sundberg, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> In Research Methods For Mutant Mice. , (2002).</li><li>Chang, B., Hawes, N. L., Hurd, R. E., Davisson, M. T., Nusinowitz, S., Heckenlively, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42, 517-525 (2002).</li><li>Anderson, M. G., Smith, R. S., Hawes, N. L., Zabaleta, A., Chang, B., Wiggs, J. L., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+genes+encoding+melanosomal+proteins+cause+pigmentary+glaucoma+in+DBA/2J+mice.">Mutations in genes encoding melanosomal proteins cause pigmentary glaucoma in DBA/2J mice.</a> Nat. Genet. 30, 81-85 (2002).</li><li>Hawes, N. L., Smith, R. S., Chang, B., Davisson, M., Heckenlively, J. R., John, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+fundus+photography+and+angiography:+a+catalogue+of+normal+and+mutant+phenotypes.">Mouse fundus photography and angiography: a catalogue of normal and mutant phenotypes.</a> Mol. Vis. 5, 22-22 (1999).</li><li>Won, J., Shi, L. Y., Hicks, W., Wang, J., Hurd, R., Naggert, J. K., Chang, B., Nishina, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+resources+for+vision+research.">Mouse model resources for vision research.</a> J. Ophthalmol. 2011, 391384-391384 (2011).</li><li>Pinto, L. H., Vitaterna, M. H., Siepka, S. M., Shimomura, K., Lumayag, S., Baker, M., Fenner, D., Mullins, R. F., Sheffield, V. C., Stone, E. M., Heffron, E., Takahashi, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+from+screening+over+9000+mutation-bearing+mice+for+defects+in+the+electroretinogram+and+appearance+of+the+fundus.">Results from screening over 9000 mutation-bearing mice for defects in the electroretinogram and appearance of the fundus.</a> Vision. Res. 44, 3335-3345 (2004).</li><li>Heckenlively, J. R., Winston, J. V., Roderick, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+for+mouse+retinal+degenerations.+I.+Correlation+of+indirect+ophthalmoscopy,+electroretinograms,+and+histology.">Screening for mouse retinal degenerations. I. Correlation of indirect ophthalmoscopy, electroretinograms, and histology.</a> Doc. Ophthalmol. 71, 229-239 (1989).</li><li>Tsang, S. H., Gouras, P., Yamashita, C. K., Kjeldbye, H., Fisher, J., Farber, D. B., Goff, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+in+mice+lacking+the+gamma+subunit+of+the+rod+cGMP+phosphodiesterase.">Retinal degeneration in mice lacking the gamma subunit of the rod cGMP phosphodiesterase.</a> Science. 272, 1026-1029 (1996).</li><li>Tsang, S. H., Woodruff, M. L., Jun, L., Mahajan, V., Yamashita, C. K., Pedersen, R., Lin, C. S., Goff, S. P., Rosenberg, T., Larsen, M., Farber, D. B., Nusinowitz, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+mice+carrying+the+H258N+mutation+in+the+gene+encoding+the+beta-subunit+of+phosphodiesterase-6+(PDE6B)+provide+a+model+for+human+congenital+stationary+night+blindness.">Transgenic mice carrying the H258N mutation in the gene encoding the beta-subunit of phosphodiesterase-6 (PDE6B) provide a model for human congenital stationary night blindness.</a> Hum. Mutat. 28, 243-254 (2007).</li></ol>

De flesta transgena möss finns i laboratorier som inte undersöka ögonen. Vår videoteknik illustrerar en enkel, standardiserad metod för fjärrstyrning kirurgisk kunskapsöverföring för att optimera mjukpappersförvärvet från laboratorier med liten erfarenhet med ögonen. Denna video teknik hjälper övervinna en stor fallgrop i hög genomströmning fenotypning, vilket är användningen av ett begränsat antal experter platser på grund av icke-standardiserade vävnad insamling och fixering metoder som hindrar m...

<table border="1"><tbody><tr><th> Namn </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th><th> Kommentarer </th></tr><tr><td> Böjd Dressing tång </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1408 </td><td></td></tr><tr><td> Mahajan Sharptip förband tång </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1406 (REF SP7-64.520) </td><td></td></tr><tr><td> Böjda Westcott Sax </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E3321 WH </td><td></td></tr><tr><td> 15 ° BD Beaver mikrokirurgisk Blade </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 374.881 </td><td></td></tr><tr><td> 0,22 Fin-Castroviejo suturering Tång </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> E1805 </td><td></td></tr><tr><td> 0,12 Colibri pincett </td><td> Storz Ophthalmics </td><td> 2/132 </td><td></td></tr><tr><td> 30-gauge nål </td><td> Becton-Dickinson </td><td> 305.128 </td><td></td></tr><tr><td> Biohazard Mailer </td><td> Fisher </td><td> 03-523-4 </td><td></td></tr><tr><td> Parafilm </td><td> Fisher </td><td> 13-374-10 </td><td></td></tr><tr><td> Glas scintillationsflaskor </td><td> Wheaton </td><td> 4500413033 </td><td></td></tr><tr><td> PBS, pH 7,4 </td><td> Invitrogen </td><td> 70011-044 </td><td></td></tr><tr><td> 16% Paraformaldehyd </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15.700 </td><td></td></tr><tr><td> 2,5% paraformaldehyd / 2,5% glutaraldehyd i 0,1 M natriumfosfatbuffert </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15.700 och 16.300 </td><td> Blandas i laboratorium </td></tr><tr><td> 50% Glutaraldehyd </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 16.300 </td><td></td></tr><tr><td> 0,25% Formvar </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 15.810 </td><td></td></tr><tr><td> Copper Slot Grid </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> M2010-CR </td><td></td></tr><tr><td> 4% osmiumtetroxid </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 19.140 </td><td></td></tr><tr><td> Anti-SOD3 antikropp </td><td> Abcam </td><td> Ab21974 </td><td></td></tr><tr><td> Get anti-kanin Alexa Fluor 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A11070 </td><td></td></tr><tr><td> Spurr s bädda harts </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 14.300 </td><td></td></tr></tbody></table>

mouse eye enucleation for remote high-throughput phenotyping

Musen ögat är en viktig genetisk modell för translationella studier av mänsklig oftalmisk sjukdom. Bländande sjukdomar hos människor, såsom makuladegeneration, ljusmätare degeneration, katarakt, glaukom, retinoblastom, och diabetesretinopati har rekapituleras i transgena möss. 1-5 flesta transgena och knockout möss har genererats av laboratorier för att studera icke-ögonsjukdomar, men genetisk bevarande mellan organsystem tyder på att många av de samma gener också kan spela en roll i okulär utveckling och sjukdom. Därför är dessa möss utgör en viktig resurs för att upptäcka nya genotyp-fenotyp korrelationer i ögat. Eftersom dessa möss är utspridda över hela världen, är det svårt att få, underhålla och fenotyp dem på ett effektivt och kostnadseffektivt sätt. Således är de flesta hög kapacitet oftalmiska fenotypning skärmar begränsad till ett fåtal platser som kräver på plats, oftalmisk expertis för att undersöka ögonen på levande möss. 6-9 Ett alternativt tillvägagångssätt som utvecklats av vårt laboratorium är en metod för avlägsen vävnads-förvärv som kan användas i stora eller små skala undersökningar av transgen mus ögon. Standardiserade förfaranden för video-baserade kirurgiska kunskapsöverföring, vävnad fixering och sjöfart tillåta labb för att samla hela ögon muterade djur och skicka dem för Molekylär och morfologisk fenotypning. I den här videon artikeln presenterar vi tekniker för att enucleate och överföra både ofixerade och perfusion fasta mus ögon för avlägsna fenotypning analyser.

Watch this Scientific Journal Video about Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping at JoVE.com

Mouse Eye Enucleation for Remote High-throughput Phenotyping

Dissektion Tekniken visar enucleation av musen öga för vävnadsfixering att utföra fenotypning i hög genomströmning skärmar.

Mus Eye enucleation för Remote hög kapacitet Fenotypning

The mouse eye is an important genetic model for the translational study of human ophthalmic disease. Blinding diseases in humans, such as macular ...

Research

JoVE Journal

Medicine

A High-throughput Automated Platform for the Development of Manufacturing Cell Lines for Protein Therapeutics

En hög kapacitet automatiserad plattform för utveckling av tillverkning cellinjer för proteinläkemedel

The fast-growing biopharmaceutical industry demands speedy development of highly efficient and reliable production systems to meet the increasing ...

A Mouse Model of the Cornea Pocket Assay for Angiogenesis Study

En musmodell av hornhinnan Pocket-analys för Angiogenes Study

A normal cornea is clear of vascular tissues. However, blood vessels can be induced to grow and survive in the cornea when potent angiogenic factors are ...

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps in Conscious, Unrestrained Mice

Hyperinsulinemic-euglycemic Clamps i medvetna, sidostagade Möss

Type 2 diabetes is characterized by a defect in insulin action. The hyperinsulinemic-euglycemic clamp, or insulin clamp, is widely considered the "gold ...

Remote Magnetic Navigation for Accurate, Real-time Catheter Positioning and Ablation in Cardiac Electrophysiology Procedures

Remote magnetnavigering för exakt, realtid kateter Positionering och Ablation i hjärtats elektrofysiologi Procedures

New remote navigation systems have been developed to improve current limitations of conventional manually guided catheter ablation in complex cardiac ...

High Throughput Sequential ELISA for Validation of Biomarkers of Acute Graft-Versus-Host Disease

Hög genomströmning Sekventiell ELISA för validering av biomarkörer för akut graft-versus-Host Disease

Unbiased discovery proteomics strategies have  the potential to identify large numbers of novel biomarkers that can improve  diagnostic and prognostic ...

High Throughput Characterization of Adult Stem Cells Engineered for Delivery of Therapeutic Factors for Neuroprotective Strategies

Hög genomströmning karakterisering av vuxna stamceller Engineered för leverans av terapeutiska faktorer för Nervskyddande Strategier

Mesenchymal stem cells (MSCs) derived from bone marrow are a powerful cellular resource and have been used in numerous studies as potential candidates to ...

Fluorescent Dye Labeling of Erythrocytes and Leukocytes for Studying the Flow Dynamics in Mouse Retinal Circulation

Fluorescerande färgämnesmärkning av erytrocyter och leukocyter för att studera flödesdynamiken i muskelspiralcirkulationen

The retinal and choroidal blood flow dynamics may provide insight into the pathophysiology and sequelae of various ocular diseases, such as glaucoma, ...

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate (HoLEP).

Surgical Treatment for Benign Prostatic Hyperplasia: Holmium Laser Enucleation of the Prostate HoLEP.

Kirurgisk behandling av godartad prostataförstoring: Holmium Laser Enucleation av prostata (HoLEP).

Benign prostatic hyperplasia (BPH) commonly occurs among elderly males. The condition causes symptoms in the lower urinary tract, thereby reducing the ...

Puncture-Induced Iris Neovascularization as a Mouse Model of Rubeosis Iridis

Punktering-inducerad Iris kärlnybildning som en musmodell av Rubeosis Iridis

We describe a model of puncture-induced iris neovascularization as a general model for noninvasive evaluation of angiogenesis. The model is also relevant ...

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled Cholesterol Efflux Assay

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-märkt kolesterol Efflux Assay

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in ...