Name: a method for labeling vasculature in embryonic mice
Uploaded: 2011-10-07T13:00:00
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Ce travail a été soutenu par numéros de subvention et de R01AI055001 R01AI082127 du NIAID à la GRN et le Prix SREB bourse de thèse à JLB.

1. Marqué à la fluorescéine dextrane et GSL I-isolectine B 4 injections veine faciale à l&#39;étiquette vascularisation embryonnaire <ol><li> Préparer FITC-dextran (50ug/mL) en tampon phosphate salin (PBS) ou GSL 1 - isolectine B 4 (20ug/200uL) dans du PBS dans un tube Eppendorf de 1,5 ml et chaud à 37 ° C. Ajouter 100 ul de stock 1,25 vert rapide / PBS à la solution de FITC-dextran (volume total 1 ml) et 180uL de stock 1,25 Fast Green / PBS à l&#39;une GSL - isolectine B 4 (...

<ol>
	<li>Cuddihy, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-mediated+cross-talk+within+the+neonatal+murine+thymus.">VEGF-mediated cross-talk within the neonatal murine thymus.</a> Blood. 113, 2723-2731 (2009).</li><li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+targeting+of+VEGF-A+in+thymus+epithelium+disrupts+thymus+blood+vessel+architecture.">Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blood vessel architecture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 10587-10592 (2005).</li><li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+perivascular+mesenchyme+in+the+adult+thymus.">Neural crest origin of perivascular mesenchyme in the adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 5344-5351 (2008).</li><li>Foster, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+neural+crest-derived+cells+in+the+embryonic+and+adult+thymus.">Contribution of neural crest-derived cells in the embryonic and adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 3183-3189 (2008).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+between+CCR7-+and+CCR9-mediated+chemokine+signals+in+prevascular+fetal+thymus+colonization.">Coordination between CCR7- and CCR9-mediated chemokine signals in prevascular fetal thymus colonization.</a> Blood. 108, 2531-2539 (2006).</li><li>Lavine, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+signals+regulate+a+wave+of+Hedgehog+activation+that+is+essential+for+coronary+vascular+development.">Fibroblast growth factor signals regulate a wave of Hedgehog activation that is essential for coronary vascular development.</a> Genes Dev. 20, 1651-1666 (2006).</li><li>Lavine, K. J., Kovacs, A., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+is+critical+for+maintenance+of+the+adult+coronary+vasculature+in+mice.">Hedgehog signaling is critical for maintenance of the adult coronary vasculature in mice.</a> J. Clin Invest. 118, 2404-2414 (2008).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Murphy, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Notch4+signaling+induces+hallmarks+of+brain+arteriovenous+malformations+in+mice.">Endothelial Notch4 signaling induces hallmarks of brain arteriovenous malformations in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 10901-10906 (2008).</li></ol>

Whole-monter et PECAM-1 (CD31) sur la coloration des sections sont les méthodes classiques pour l&#39;étiquetage de la vascularisation de souris embryonnaires. Ces méthodes nécessitent l&#39;utilisation d&#39;immunofluorescence directe et / ou indirects, et des détergents pour perméabiliser les tissus de la souris. Cela s&#39;avère un processus plutôt rapide. Ici, nous avons employé FITC-dextran ou isolectine B 4 injections veine faciale pour marquer directement la vascularisation embryonnaire, élim...

<table border="1"><tbody><tr><th> Nom du réactif </th><th> Société </th><th> Numéro de catalogue </th></tr><tr><td> FITC-dextran </td><td> Sigma </td><td> FD150S-1G </td></tr><tr><td> Marqué à la fluorescéine GSL 1 - isolectine B 4 </td><td> Vector Laboratories </td><td> FL-1201 </td></tr><tr><td> Fast Green </td><td> MP Biomédical </td><td> 195178 </td></tr><tr><td> PFA </td><td> Fluka </td><td> 76240 </td></tr><tr><td> Sérum de veau fœtal </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S11550 </td></tr><tr><td> Optimal composé température de coupe (PTOM </td><td> VWR </td><td> 25608-930 </td></tr><tr><td> L&#39;acétone </td><td> JT Baker </td><td> 9006-33 </td></tr><tr><td> Sérum âne </td><td> Jackson </td><td> 017-000-121 </td></tr><tr><td> rat anti-souris CD31, </td><td> BD Pharmingen </td><td> 558736 </td></tr><tr><td> chèvre anti-souris PDGFR-β </td><td> R &amp; D Systems </td><td> AF1042 </td></tr><tr><td> d&#39;âne anti-CD31 de rat Alexa 647 (Invitrogen) </td><td> Biolegend </td><td> 102516 </td></tr><tr><td> d&#39;âne anti-chèvre Alexa 594 (Invitrogen) </td><td> Invitrogen </td><td> A11058 </td></tr><tr><td> Triton X -100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X-100 </td></tr><tr><td> Low Melt agarose / PBS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9414-25G </td></tr><tr><td> Méthanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A413-4 </td></tr><tr><td> Alcool benzylique </td><td> Acros scientifique </td><td> 148390010 </td></tr><tr><td> Benzoate de benzyle </td><td> Acros scientifique </td><td> 105860010 </td></tr><tr><td> Dépression diapositives </td><td> Fisher Scientific </td><td> S175201 </td></tr><tr><td> Fluorogel </td><td> Sciences Electron Microscopy </td><td> 17985-10 </td></tr><tr><td> Couverture en verre (22x22) -1,5 </td><td> Thermo Scientific </td><td> 152222 </td></tr><tr><td> Zeiss LSM 510 Meta microscope confocal </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Micro pince à disséquer </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 </td></tr><tr><td> Parafilm n ° OM992 </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-374-16 </td></tr><tr><td> 12 et 24 ainsi microplaques </td><td> Evergreen Scientific </td><td> 222-8044-01F </td></tr><tr><td> Lames de microscope Superfrost / Plus </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> 4mL flacons clairs </td><td> Scientifique national </td><td> B7800-2 </td></tr></tbody></table>

a method for labeling vasculature in embryonic mice

La mise en place d&#39;un réseau de vaisseaux sanguins fonctionnelle est une partie essentielle de l&#39;organogenèse, et est requis pour la fonction des organes optimale. Par exemple, dans la formation adéquate vascularisation du thymus et de structuration est indispensable pour l&#39;entrée dans l&#39;organe thymocytes matures et les cellules T de sortie vers la périphérie. La disposition spatiale des vaisseaux sanguins dans le thymus est dépendante des signaux du micro-environnement local, à savoir les cellules épithéliales thymiques (TEC). Plusieurs rapports récents suggèrent que la perturbation de ces résultats signaux dans la cuve 1,2 thymus défauts sang. Des études précédentes ont décrit les techniques utilisées pour étiqueter les 1,2 vascularisation néonatale et adulte du thymus. Nous démontrons ici une technique de marquage des vaisseaux sanguins dans le thymus embryonnaire. Cette méthode combine l&#39;utilisation de FITC-dextran ou Griffonia (Bandeiraea) lectine Simplicifolia I (GSL 1 - isolectine B 4) injections veine faciale et CD31 coloration des anticorps pour identifier les structures vasculaires du thymus et PDGFR-β à l&#39;étiquette du thymus périvasculaire mésenchyme 3-5. L&#39;option d&#39;utiliser cryocoupes ou sections vibratome est également fourni. Ce protocole peut être utilisé pour identifier les défauts du thymus vasculaire, ce qui est essentiel pour définir les rôles des molécules dérivées de TCE dans la formation des vaisseaux sanguins du thymus. Comme la méthode des étiquettes de la vascularisation entier, il peut aussi être utilisée pour analyser les réseaux vasculaires dans de multiples organes et de tissus dans l&#39;embryon, y compris la peau et le cœur 6-10.

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A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

Cet article décrit une méthode pour l&#39;étiquetage de peau embryonnaire et les vaisseaux sanguins du thymus.

Une méthode pour l&#39;étiquetage dans les vaisseaux sanguins souris embryonnaires

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

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