Name: a method for labeling vasculature in embryonic mice
Uploaded: 2011-10-07T13:00:00
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इस काम अनुदान R01AI055001 और R01AI082127 NIAID से NRM और SREB निबंध फैलोशिप JLB पुरस्कार संख्या के द्वारा समर्थित किया गया.

1. Fluorescein dextran और मैं isolectin जीएसएल बी 4 चेहरे नस इंजेक्शन भ्रूण vasculature लेबल लेबल <ol><li> फास्फेट में FITC dextran (50ug/mL) तैयार खारा (पीबीएस) buffered या जीएसएल 1 - बी isolectin पीबीएस में (20ug/200uL) एक 1.5ml Eppendorf ट्यूब में और 4 37 गर्म सेल्सियस / ग्?...

<ol>
	<li>Cuddihy, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-mediated+cross-talk+within+the+neonatal+murine+thymus.">VEGF-mediated cross-talk within the neonatal murine thymus.</a> Blood. 113, 2723-2731 (2009).</li><li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+targeting+of+VEGF-A+in+thymus+epithelium+disrupts+thymus+blood+vessel+architecture.">Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blood vessel architecture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 10587-10592 (2005).</li><li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+perivascular+mesenchyme+in+the+adult+thymus.">Neural crest origin of perivascular mesenchyme in the adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 5344-5351 (2008).</li><li>Foster, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+neural+crest-derived+cells+in+the+embryonic+and+adult+thymus.">Contribution of neural crest-derived cells in the embryonic and adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 3183-3189 (2008).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+between+CCR7-+and+CCR9-mediated+chemokine+signals+in+prevascular+fetal+thymus+colonization.">Coordination between CCR7- and CCR9-mediated chemokine signals in prevascular fetal thymus colonization.</a> Blood. 108, 2531-2539 (2006).</li><li>Lavine, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+signals+regulate+a+wave+of+Hedgehog+activation+that+is+essential+for+coronary+vascular+development.">Fibroblast growth factor signals regulate a wave of Hedgehog activation that is essential for coronary vascular development.</a> Genes Dev. 20, 1651-1666 (2006).</li><li>Lavine, K. J., Kovacs, A., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+is+critical+for+maintenance+of+the+adult+coronary+vasculature+in+mice.">Hedgehog signaling is critical for maintenance of the adult coronary vasculature in mice.</a> J. Clin Invest. 118, 2404-2414 (2008).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Murphy, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Notch4+signaling+induces+hallmarks+of+brain+arteriovenous+malformations+in+mice.">Endothelial Notch4 signaling induces hallmarks of brain arteriovenous malformations in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 10901-10906 (2008).</li></ol>

वर्गों पर धुंधला हो जाना पूरे माउंट और PECAM-1 (CD31) भ्रूण चूहों में vasculature लेबलिंग के लिए पारंपरिक तरीकों के हैं. इन तरीकों को प्रत्यक्ष और / या अप्रत्यक्ष immunofluorescence, और डिटर्जेंट का उपयोग माउस ऊतक permeabilize की आवश्यकता ...

<table border="1"><tbody><tr><th> अभिकर्मक के नाम </th><th> कंपनी </th><th> सूचीपत्र संख्या </th></tr><tr><td> FITC - dextran </td><td> सिग्मा </td><td> FD150S - 1G </td></tr><tr><td> Fluorescein लेबल जीएसएल 1 - 4 बी isolectin </td><td> वेक्टर प्रयोगशालाओं </td><td> FL-1201 </td></tr><tr><td> फास्ट ग्रीन </td><td> सांसद BIOMEDICALS </td><td> 195178 </td></tr><tr><td> पीएफए </td><td> Fluka </td><td> 76240 </td></tr><tr><td> भ्रूण गोजातीय सीरम </td><td> अटलांटा बायोलॉजिकल </td><td> S11550 </td></tr><tr><td> इष्टतम काटना तापमान यौगिक (अक्टूबर </td><td> VWR </td><td> 25608-930 </td></tr><tr><td> एसीटोन </td><td> JT BAKER </td><td> 9006-33 </td></tr><tr><td> गधा सीरम </td><td> जैक्सन </td><td> 017-000-121 </td></tr><tr><td> CD31 विरोधी माउस चूहा, </td><td> BD Pharmingen </td><td> 558736 </td></tr><tr><td> बकरी विरोधी माउस PDGFR β </td><td> आर एंड डी सिस्टम </td><td> AF1042 </td></tr><tr><td> गधा विरोधी चूहा CD31 647 Alexa (Invitrogen) </td><td> Biolegend </td><td> 102516 </td></tr><tr><td> गधा विरोधी बकरी 594 Alexa (Invitrogen) </td><td> Invitrogen </td><td> A11058 </td></tr><tr><td> Triton एक्स -100 </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> X-100 </td></tr><tr><td> कम पिघल agarose / पीबीएस </td><td> सिग्मा Aldrich </td><td> A9414-25G </td></tr><tr><td> मेथनॉल </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> A413-4 </td></tr><tr><td> लोबान शराब </td><td> Acros वैज्ञानिक </td><td> 148390010 </td></tr><tr><td> लोबान Benzoate </td><td> Acros वैज्ञानिक </td><td> 105860010 </td></tr><tr><td> अवसाद स्लाइड्स </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> S175201 </td></tr><tr><td> Fluorogel </td><td> इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विज्ञान </td><td> 17985-10 </td></tr><tr><td> कवर ग्लास (22X22) -1.5 </td><td> थर्मो scientifiसी </td><td> 152222 </td></tr><tr><td> Zeiss LSM 510 मेटा Confocal माइक्रोस्कोप </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> माइक्रो विदारक संदंश </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 </td></tr><tr><td> Parafilm सं OM992 </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 13-374-16 </td></tr><tr><td> 12 और 24 अच्छी तरह से microplates </td><td> सदाबहार वैज्ञानिक </td><td> 222-8044-01F </td></tr><tr><td> Superfrost / प्लस खुर्दबीन स्लाइड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> 4ml स्पष्ट शीशियों </td><td> राष्ट्रीय वैज्ञानिक </td><td> B7800-2 </td></tr></tbody></table>

a method for labeling vasculature in embryonic mice

एक कार्यात्मक रक्त वाहिका नेटवर्क की स्थापना जीवोत्पत्ति का एक अनिवार्य हिस्सा है, और इष्टतम अंग समारोह के लिए आवश्यक है. उदाहरण के लिए, थाइमस उचित vasculature गठन और patterning में अंग और परिपक्व टी सेल परिधि करने के लिए बाहर निकलने में thymocyte प्रवेश के लिए आवश्यक है. thymus में रक्त वाहिकाओं के स्थानिक व्यवस्था स्थानीय microenvironment, अर्थात् thymic उपकला कोशिकाओं (टीईसी) से संकेतों पर निर्भर है. हाल ही में कई रिपोर्टों थाइमस रक्त वाहिका दोष 1,2 में इन संकेतों के परिणामों की है कि विघटन का सुझाव देते हैं. पिछले अध्ययनों से पता करने के लिए नवजात और वयस्क thymus vasculature 1,2 लेबल किया तकनीकों का वर्णन है. हम यहाँ भ्रूण thymus में रक्त वाहिकाओं की लेबलिंग के लिए एक तकनीक को प्रदर्शित करता है. चेहरे की नस इंजेक्शन और CD31 एंटीबॉडी धुंधला हो थाइमस va की पहचान करने के लिए इस विधि FITC dextran या Griffonia (Bandeiraea) का उपयोग मैं (1 isolectin 4 बी जीएसएल) Simplicifolia Lectin को जोड़ती हैscular संरचनाओं और PDGFR β thymic perivascular mesenchyme 3-5 लेबल. cryosections या vibratome वर्गों का उपयोग करने का विकल्प भी उपलब्ध है. इस प्रोटोकॉल थाइमस नाड़ी दोष, जो thymus रक्त वाहिनियों के गठन में टीईसी व्युत्पन्न अणुओं की भूमिका को परिभाषित करने के लिए महत्वपूर्ण है की पहचान करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. विधि के रूप में पूरे vasculature लेबल, यह भी त्वचा और दिल 6-10 सहित भ्रूण भर में कई अंगों और ऊतकों में संवहनी नेटवर्क का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है.

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A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

यह लेख भ्रूण त्वचा और थाइमस रक्त वाहिकाओं की लेबलिंग के लिए एक विधि का वर्णन है.

भ्रूण चूहों में vasculature लेबल के लिए एक विधि

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Research

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