Name: a method for labeling vasculature in embryonic mice
Uploaded: 2011-10-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice at JoVE.com

Detta arbete stöddes av bidrag nummer R01AI055001 och R01AI082127 från NIAID till NRM och SREB Disputation Fellowship Award till JLB.

1. Fluoresceinmärkt dextran och GSL I-isolectin B 4 ansikts ven injektioner att märka embryonal vaskulatur <ol><li> Framställ FITC-dextran (50ug/mL) i fosfatbuffrad saltlösning (PBS) eller GSL 1 - isolectin B 4 (20ug/200uL) i PBS i ett 1,5 mL Eppendorf-rör och värm till 37 ° C. Lägg 100 ul av 1,25 mM lager Fast Green / PBS till FITC-dextran-lösning (total volym 1 ml) och 180uL slut 1,25 mM Fast Green / PBS till GSL 1 - isolectin B 4 (total volym 200uL), så att lösningen är ...

<ol>
	<li>Cuddihy, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VEGF-mediated+cross-talk+within+the+neonatal+murine+thymus.">VEGF-mediated cross-talk within the neonatal murine thymus.</a> Blood. 113, 2723-2731 (2009).</li><li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gene+targeting+of+VEGF-A+in+thymus+epithelium+disrupts+thymus+blood+vessel+architecture.">Gene targeting of VEGF-A in thymus epithelium disrupts thymus blood vessel architecture.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 102, 10587-10592 (2005).</li><li>Muller, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neural+crest+origin+of+perivascular+mesenchyme+in+the+adult+thymus.">Neural crest origin of perivascular mesenchyme in the adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 5344-5351 (2008).</li><li>Foster, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Contribution+of+neural+crest-derived+cells+in+the+embryonic+and+adult+thymus.">Contribution of neural crest-derived cells in the embryonic and adult thymus.</a> J. Immunol. 180, 3183-3189 (2008).</li><li>Liu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coordination+between+CCR7-+and+CCR9-mediated+chemokine+signals+in+prevascular+fetal+thymus+colonization.">Coordination between CCR7- and CCR9-mediated chemokine signals in prevascular fetal thymus colonization.</a> Blood. 108, 2531-2539 (2006).</li><li>Lavine, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibroblast+growth+factor+signals+regulate+a+wave+of+Hedgehog+activation+that+is+essential+for+coronary+vascular+development.">Fibroblast growth factor signals regulate a wave of Hedgehog activation that is essential for coronary vascular development.</a> Genes Dev. 20, 1651-1666 (2006).</li><li>Lavine, K. J., Kovacs, A., Ornitz, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hedgehog+signaling+is+critical+for+maintenance+of+the+adult+coronary+vasculature+in+mice.">Hedgehog signaling is critical for maintenance of the adult coronary vasculature in mice.</a> J. Clin Invest. 118, 2404-2414 (2008).</li><li>Mukouyama, Y. S., Gerber, H. P., Ferrara, N., Gu, C., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+nerve-derived+VEGF+promotes+arterial+differentiation+via+neuropilin+1-mediated+positive+feedback.">Peripheral nerve-derived VEGF promotes arterial differentiation via neuropilin 1-mediated positive feedback.</a> Development. 132, 941-952 (2005).</li><li>Mukouyama, Y. S., Shin, D., Britsch, S., Taniguchi, M., Anderson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensory+nerves+determine+the+pattern+of+arterial+differentiation+and+blood+vessel+branching+in+the+skin.">Sensory nerves determine the pattern of arterial differentiation and blood vessel branching in the skin.</a> Cell. 109, 693-705 (2002).</li><li>Murphy, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial+Notch4+signaling+induces+hallmarks+of+brain+arteriovenous+malformations+in+mice.">Endothelial Notch4 signaling induces hallmarks of brain arteriovenous malformations in mice.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 105, 10901-10906 (2008).</li></ol>

Hel-fäste och PECAM-1 (CD31) färgning på sektioner är de konventionella metoderna för märkning av kärlen i embryonala möss. Dessa metoder kräver användning av direkt och / eller indirekt immunofluorescens, och tvättmedel till permeabilisering musvävnad. Det visar sig vara en ganska lägligt process. Här har vi använt FITC-dextran eller isolectin B 4 ansikts injektioner vein att direkt märka embryonala vaskulaturen, vilket eliminerar kravet på steg antikroppsmärkning. Vidare medger denna metod...

<table border="1"><tbody><tr><th> Namnet av reagenset </th><th> Företag </th><th> Katalognummer </th></tr><tr><td> FITC-dextran </td><td> Sigma </td><td> FD150S-1G </td></tr><tr><td> Fluoresceinmärkt GSL 1 - isolectin B 4 </td><td> Vector Laboratories </td><td> FL-1201 </td></tr><tr><td> Fast Green </td><td> MP Biomedicals </td><td> 195.178 </td></tr><tr><td> PFA </td><td> Fluka </td><td> 76.240 </td></tr><tr><td> Fetalt bovint serum </td><td> Atlanta Biologicals </td><td> S11550 </td></tr><tr><td> Optimal Cutting Temperature förening (oktober </td><td> VWR </td><td> 25608-930 </td></tr><tr><td> Aceton </td><td> JT Baker </td><td> 9006-33 </td></tr><tr><td> Donkey Serum </td><td> Jackson </td><td> 017-000-121 </td></tr><tr><td> råtta anti-mus CD31, </td><td> BD Pharmingen </td><td> 558.736 </td></tr><tr><td> get-anti-mus-PDGFR-β </td><td> R &amp; D Systems </td><td> AF1042 </td></tr><tr><td> åsne-anti-rått-CD31 Alexa 647 (Invitrogen) </td><td> Biolegend </td><td> 102.516 </td></tr><tr><td> åsna anti-get Alexa 594 (Invitrogen) </td><td> Invitrogen </td><td> A11058 </td></tr><tr><td> Triton X -100 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> X-100 </td></tr><tr><td> Låg smältpunkt agaros / PBS </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A9414-25G </td></tr><tr><td> Metanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A413-4 </td></tr><tr><td> Bensylalkohol </td><td> Acros Scientific </td><td> 148390010 </td></tr><tr><td> Bensylbensoat </td><td> Acros Scientific </td><td> 105860010 </td></tr><tr><td> Depression bilder </td><td> Fisher Scientific </td><td> S175201 </td></tr><tr><td> Fluorogel </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 17.985-10 </td></tr><tr><td> Cover Glas (22x22) -1,5 </td><td> Thermo vetenskapligtc </td><td> 152.222 </td></tr><tr><td> Zeiss LSM 510 Meta konfokalmikroskop </td><td> Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Micro dissekera pincett </td><td> Roboz </td><td> RS-5135 </td></tr><tr><td> Parafilm Nej OM992 </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-374-16 </td></tr><tr><td> 12 och 24 brunnars mikroplattor </td><td> Evergreen Scientific </td><td> 222-8044-01F </td></tr><tr><td> SuperFrost / Plus objektglas </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> 4 ml klara injektionsflaskor </td><td> Nationella vetenskapliga </td><td> B7800-2 </td></tr></tbody></table>

a method for labeling vasculature in embryonic mice

Inrättandet av en fungerande blodkärl nätverk är en viktig del av organogenesen, och krävs för optimal organfunktion. Till exempel, i tymus korrekt vaskulaturen bildning och mönstring är nödvändig för tymocyt inträde i organet och mogna T-cell-utgång till periferin. Den rumsliga arrangemanget av blodkärl i tymus är beroende signaler från den lokala mikromiljön, nämligen tymiska epitelceller (TEC). Flera färska rapporter tyder på att störningar av dessa signaler ger tymus blodkärl brister 1,2. Tidigare studier har beskrivit tekniker som används för att märka den neonatala och vuxna bräss vaskulatur 1,2. Vi visar här en teknik för märkning blodkärl i embryonala tymus. Denna metod kombinerar användningen av FITC-dextran eller Griffonia (Bandeiraea) simplicifolia lektin I (GSL 1 - isolectin B 4) ansikts ven injektioner och CD31 antikroppsfärgning att identifiera tymus vascular strukturer och PDGFR-β att märka tymus perivaskulära mesenkym 3-5. Alternativet att använda kryosnitt eller vibratom sektioner tillhandahålls också. Detta protokoll kan användas för att identifiera tymus vaskulära defekter, vilket är avgörande för att definiera roller TEC-härledda molekyler i tymus blodkärlsbildning. Eftersom metoden märker hela kärlsystemet, kan den också användas för att analysera de vaskulära nätverk i flera organ och vävnader i hela embryot inklusive hud och hjärta 6-10.

Watch this Scientific Journal Video about A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice at JoVE.com

A Method for Labeling Vasculature in Embryonic Mice

I den här artikeln beskrivs en metod för märkning embryonala hud och tymus blodkärl.

En metod för märkning vaskulatur i embryonala möss

The establishment of a functional blood vessel network is an essential part of organogenesis, and is required for optimal organ function. For example, in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Using Bioluminescent Imaging to Investigate Synergism Between Streptococcus pneumoniae and Influenza A Virus in Infant Mice

Använda Bioluminescent Imaging för att undersöka synergi mellan Streptococcus pneumoniae Och influensa A-virus i modersmjölksersättning Möss

During the 1918 influenza virus pandemic, which killed approximately 50 million people worldwide, the majority of fatalities were not the result of ...

Genotypic Inference of HIV-1 Tropism Using Population-based Sequencing of V3

Genotypisk Inferens av HIV-1 Tropism Använda Befolkning-sekvensering av V3

Background: Prior to receiving a drug from CCR5-antagonist class in HIV therapy, a patient must undergo an HIV tropism test to confirm that his or her ...

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

Visualisering Dengue genom Alexa Fluor Labeling

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

Non-invasive Optical Imaging of the Lymphatic Vasculature of a Mouse

Icke-invasiv optisk avbildning av det lymfatiska vaskulaturen hos en mus

The lymphatic  vascular system is an important component of the circulatory system that  maintains fluid homeostasis, provides immune surveillance, and ...

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodality Imaging of Citrobacter rodentium Infections in Mice

4D Multimodalitet Imaging av<em&gt; Citrobacter rodentium</em&gt; Infektioner hos möss

This protocol outlines the steps required to  longitudinally monitor a bioluminescent bacterial infection using composite 3D diffuse light imaging ...

A Non-invasive and Technically Non-intensive Method for Induction and Phenotyping of Experimental Bacterial Pneumonia in Mice

En icke-invasiv och tekniskt icke intensiva metod för induktion och fenotypning av experimentell bakteriell lunginflammation hos möss

Although community-acquired pneumonia remains a major public health problem, murine models of bacterial pneumonia have recently facilitated significant ...

Induction of Paralysis and Visual System Injury in Mice by T Cells Specific for Neuromyelitis Optica Autoantigen Aquaporin-4

Induktion av förlamning och visuella systemet skada hos möss av T celler specifika för Neuromyelitis Optica Autoantigen akvaporin-4

While it is recognized that aquaporin-4 (AQP4)-specific T cells and antibodies participate in the pathogenesis of neuromyelitis optica (NMO), a human ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metod för mätning av Saliv-körtel funktion hos möss

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...

Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography

Djup ventrombos som induceras av Stasis hos möss som övervakas av högfrekvent ultraljud

Venous thrombosis is a common condition affecting 1 - 2% of the population, with an annual incidence of 1 in 500. Venous thrombosis can lead to death ...

A Silver Nanoparticle Method for Ameliorating Biliary Atresia Syndrome in Mice

En Silver nanopartiklar metod för Ameliorating biliär atresi syndrom hos möss

Biliary atresia (BA) is a severe type of cholangitis with high mortality in children of which the etiology is still not fully understood. Viral infections ...