Name: tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy
Uploaded: 2011-09-24T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי מענק מחקר קנדי ​​Institutes of Health Research (CIHR, MOP-86749). ל ליו הוא חתן פרס החוקר CIHR חדש (MSH-95374).

1. הכנת Chemoattractant ב agarose ג&#39;ל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 10 מ&quot;ל של 2 × PBS בצינור 50 מ&quot;ל חרוטי, ואת לחמם את הצינור על ידי הכנסתו לתוך כוס המכילה מים חמים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פיפטה 10 מ&quot;ל של מים מזוקקים ולהוסיף 0.4 גרם אבקת agarose בצינור 50 ?...

<ol>
	<li>Liu, L., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+leukocyte+recruitment:+organ-specific+mechanisms+of+action.">Molecular mechanisms of leukocyte recruitment: organ-specific mechanisms of action.</a> Thromb. Haemost. 89, 213-220 (2003).</li><li>Petri, B., Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+leukocyte+recruitment:+an+in+vivo+perspective.">The physiology of leukocyte recruitment: an in vivo perspective.</a> J. Immunol. 180, 6439-6446 (2008).</li><li>Phillipson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+crawling+of+neutrophils+to+emigration+sites:+a+molecularly+distinct+process+from+adhesion+in+the+recruitment+cascade.">Intraluminal crawling of neutrophils to emigration sites: a molecularly distinct process from adhesion in the recruitment cascade.</a> J. Exp. Med. 203, 2569-2575 (2006).</li><li>Wong, C. H., Heit, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulators+of+leucocyte+chemotaxis+during+inflammation.">Molecular regulators of leucocyte chemotaxis during inflammation.</a> Cardiovasc. Res. 86, 183-191 (2010).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Bullen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+imaging+techniques+for+drug+discovery.">Microscopic imaging techniques for drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 7, 54-67 (2008).</li><li>Hazelwood, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entering+the+Portal:+Understanding+the+Digital+Image+Recorded+Through+a+Microscope.">Entering the Portal: Understanding the Digital Image Recorded Through a Microscope.</a> Imaging Cellular and Molecular Biological Functions. , 3-43 (2007).</li><li>Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-selectin+facilitates+emigration+and+extravascular+locomotion+of+leukocytes+during+acute+inflammatory+responses+in+vivo.">L-selectin facilitates emigration and extravascular locomotion of leukocytes during acute inflammatory responses in vivo.</a> J. Immunol. 165, 7164-7170 (2000).</li><li>Cara, D. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+as+a+tool+for+studying+recruitment+and+chemotaxis.">Intravital microscopy as a tool for studying recruitment and chemotaxis.</a> Methods Mol. Biol. 239, 123-132 (2004).</li><li>Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LSP1+is+an+endothelial+gatekeeper+of+leukocyte+transendothelial+migration.">LSP1 is an endothelial gatekeeper of leukocyte transendothelial migration.</a> J. Exp. Med. 201, 409-418 (2005).</li><li>Heit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+accelerates,+but+is+not+required+for,+neutrophil+chemotaxis+to+fMLP.">PI3K accelerates, but is not required for, neutrophil chemotaxis to fMLP.</a> J. Cell Sci. 121, 205-214 (2008).</li></ol>

מיקרוסקופיה Intravital הוא כלי חיוני לחשוף את מנגנוני תאית ומולקולרית של גיוס לויקוציטים במהלך דלקת. ויזואליזציה כמותיים לקביעת ליקוציט-אנדותל האינטראקציות תא microvasculature transluscent של רקמות כמו שריר cremaster ו mesentery נותר תקן הזהב עבור היישום של הטכניקה 1,5. מיקרוסקופיה קונב?...

טבלה: חומרים, ריאגנטים ספציפיים ציוד <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> שם מגיב / ציוד </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> תגובות </td></tr><tr><td> צינורות פוליאתילן, PE10 </td><td> בקטון דיקינסון </td><td> 427401 </td><td> מזהה 0.28mm × 0.61mm OD </td></tr><tr><td> הודו דיו </td><td> כדור האש לאמנות </td><td> שחורים סופר </td><td> פיגמנט לא 100% פחמן שחור צבעים </td></tr><tr><td> כויה </td><td> אהרון רפואי </td><td> AA03 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Bayer בריאות, באייר בע&quot;מ </td><td> DIN 02169592 </td><td></td></tr><tr><td> קטמין הידרוכלוריד </td><td> Bioniche לבריאות בעלי חיים קנדה, Inc </td><td> DIN 01989529 </td><td></td></tr><tr><td> MIP-2 רקומביננטי Murine </td><td> R &amp; D מערכות </td><td> 452-M2 </td><td></td></tr><tr><td> WKYMVm </td><td> הפניקס Pharmaceuticals, Inc </td><td> 072-12 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td> Ultrapure </td></tr><tr><td> הפרין </td><td> סיגמא </td><td> H-3393 </td><td></td></tr><tr><td> זקוף מיקרוסקופ </td><td> אולימפוס </td><td> BX61WI </td><td></td></tr><tr><td> צבע 3CCD מצלמת וידאו </td><td> SONY </td><td> DXC-990 </td><td></td></tr><tr><td> HD-DVD מקליט וידאו </td><td> LG אלקטרוניקה בע&quot;מ </td><td> RH398H-M </td><td></td></tr><tr><td> טלוויזיה צג </td><td> LG אלקטרוניקה בע&quot;מ </td><td> 22LG30 </td><td></td></tr><tr><td> מים circulator </td><td> Thermo Scientific </td><td> HAAKE DC10 </td><td></td></tr><tr><td> Peristaltic משאבה </td><td> Gilson; Pharmacia </td><td> Gilson MINIPULS 3; Pharmacia P-3 </td><td></td></tr><tr><td> Cremaster לוח שריר </td><td> אוניברסיטת Saskatchewan </td><td></td><td> מתוצרת בית </td></tr></table>

tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy

מחזורי גיוס של לויקוציטים מזרם הדם אל הרקמה הדלקתית היא תהליך חיוני ומורכב של 1,2 דלקת. ב venules postcapillary של רקמה דלקתית, leukocytes בתחילה לקשור אנד רול על פני השטח של הקיר luminal venular. רולינג מעצר leukocytes על האנדותל ולעבור הידבקות המשרד בתגובה chemokine או chemoattractants אחרים על פני venular. Leukocytes חסיד רבים לעבור מאתר הראשונית של הידבקות לאתר extravasation junctional ב האנדותל, תהליך שמכונה intraluminal זחילה 3. לאחר זחילה, leukocytes לנוע על פני האנדותל (גלגול) ולהעביר ברקמות extravascular לעבר מקור chemoattractant (chemotaxis) 4. מיקרוסקופיה Intravital הוא כלי רב עוצמה המאפשר הדמיה ליקוציט-אנדותל האינטראקציות תא in vivo ו חושף מנגנונים תאית ומולקולרית של גיוס לויקוציטים 2,5. בדו&quot;ח זה, אנו מספקים תיאור מקיף של באמצעות מיקרוסקופ brightfield intravital לחזות ולקבוע את תהליכי מפורט של גיוס נויטרופילים בשריר cremaster עכבר בתגובה שיפוע של chemoattractant נויטרופילים. כדי לגרום לגיוס נויטרופילים, פיסה קטנה של ג&#39;ל agarose (~ 1-3 מ&quot;מ גודל) המכיל chemoattractant נויטרופילים MIP-2 (CXCL2, chemokine CXC) או WKYMVm (TRP-Lys-Tyr-Val-D-Met, אנלוגי סינתטי של פפטיד חיידקי) מושם על ברקמת השריר הסמוך ורדיד postcapillary ציין. עם הזמן שחלף צילום וידאו במחשב תוכנה ImageJ, זחילה נויטרופילים intraluminal על האנדותל, הגירה transendothelial נויטרופילים ואת הגירה chemotaxis ברקמות הם דמיינו מסומנים. פרוטוקול זה מאפשר ניתוח אמין כמותי של פרמטרים רבים לגיוס נויטרופילים כגון מהירות זחילה intraluminal, גלגול זמן, זמן הניתוק, מהירות העברה, מהירות chemotaxis ומדד chemotaxis ברקמות. אנו מראים כי בפרוטוקול זה, פרמטרים אלה גיוס נויטרופילים ניתן לקבוע ביציבות לבין תנועה תא בודד מעקב נוח in vivo.

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy at JoVE.com

Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

אנו מתארים פרוטוקול של מיקרוסקופיה brightfield intravital למדידת דינמי נויטרופילים-אנדותל האינטראקציות התא במהלך לגיוס נויטרופילים בתגובה מקור chemoattractant נויטרופילים in vivo. זחילה נויטרופילים intraluminal, הגירה chemotaxis transendothelial ו ברקמת השריר cremaster העכבר הם דמיינו עם הצילום בזמן שחלף וידאו מעקב עם ImageJ.

מעקב זחילה Intraluminal נויטרופילים, הגירה Chemotaxis Transendothelial ועל רקמות על ידי מיקרוסקופית וידאו Intravital

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

מלכודות תאי נויטרופילים: כיצד ליצור מדמיינים אותם

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

מיקרוסקופית Intravital של הצומת לימפה מפשעתי

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

מיקרוסקופית Intravital של הטחול: ניתוח כמותי של ניידות טפיל ואת זרימת הדם

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

במבחנה Coculture Assay כדי להעריך פתוגן המושרה נדידת נויטרופילים טרנס אפיתל

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

הערכה כמותית של אדם נויטרופילים הגירה מעבר מתורבת שלפוחית ​​השתן האפיתל

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

מיקרוסקופית Intravital הפסים תאורה נפתר מאוד של מרכזי ז&#39;רמינל

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

הדמיה נויטרופילים ומונוציטים בmesenteric ורידים על ידי מיקרוסקופית Intravital על עכברים מורדמים בזמן אמת

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

Intravital Imaging of Neutrophil Priming Using IL-1&#946; Promoter-driven DsRed Reporter Mice

הדמיה Intravital של Priming נויטרופילים שימוש IL-1β מונחה יזם עכברים Reporter DsRed

Neutrophils are the most abundant leukocytes in human blood circulation and are quickly recruited to inflammatory sites. Priming is a critical event that ...

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

שיטה All-on- שבב עבור ניתוח נויטרופילי מהיר Chemotaxis ישירות מתוך ירידה של דם

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

במבחנה מבנה הכלבי נויטרופילים מלכודת חוץ-תאית: דינמי וניתוח כמותי על-ידי קרינה פלואורסצנטית מיקרוסקופ

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...