Name: tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy
Uploaded: 2011-09-24T14:00:00
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इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान कनाडा (CIHR, एमओपी - 86,749) से एक शोध अनुदान द्वारा समर्थित किया गया. एल लियू CIHR नई अन्वेषक पुरस्कार (MSH 95,374) के एक प्राप्तकर्ता है.

1. Chemoattractant के agarose जेल में तैयार <ol><li> पिपेट एक 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूब में 2 × पीबीएस के 10 एमएल, और यह एक गर्म पानी से युक्त बीकर में डाल कर गर्म ट्यूब. </li><li> आसुत पानी के 10 एमएल और एक और 50 एमएल शंक्वाकार ट्यूब में 0.4 छ agaro...

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	<li>Liu, L., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+leukocyte+recruitment:+organ-specific+mechanisms+of+action.">Molecular mechanisms of leukocyte recruitment: organ-specific mechanisms of action.</a> Thromb. Haemost. 89, 213-220 (2003).</li><li>Petri, B., Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+leukocyte+recruitment:+an+in+vivo+perspective.">The physiology of leukocyte recruitment: an in vivo perspective.</a> J. Immunol. 180, 6439-6446 (2008).</li><li>Phillipson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+crawling+of+neutrophils+to+emigration+sites:+a+molecularly+distinct+process+from+adhesion+in+the+recruitment+cascade.">Intraluminal crawling of neutrophils to emigration sites: a molecularly distinct process from adhesion in the recruitment cascade.</a> J. Exp. Med. 203, 2569-2575 (2006).</li><li>Wong, C. H., Heit, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulators+of+leucocyte+chemotaxis+during+inflammation.">Molecular regulators of leucocyte chemotaxis during inflammation.</a> Cardiovasc. Res. 86, 183-191 (2010).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Bullen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+imaging+techniques+for+drug+discovery.">Microscopic imaging techniques for drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 7, 54-67 (2008).</li><li>Hazelwood, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entering+the+Portal:+Understanding+the+Digital+Image+Recorded+Through+a+Microscope.">Entering the Portal: Understanding the Digital Image Recorded Through a Microscope.</a> Imaging Cellular and Molecular Biological Functions. , 3-43 (2007).</li><li>Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-selectin+facilitates+emigration+and+extravascular+locomotion+of+leukocytes+during+acute+inflammatory+responses+in+vivo.">L-selectin facilitates emigration and extravascular locomotion of leukocytes during acute inflammatory responses in vivo.</a> J. Immunol. 165, 7164-7170 (2000).</li><li>Cara, D. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+as+a+tool+for+studying+recruitment+and+chemotaxis.">Intravital microscopy as a tool for studying recruitment and chemotaxis.</a> Methods Mol. Biol. 239, 123-132 (2004).</li><li>Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LSP1+is+an+endothelial+gatekeeper+of+leukocyte+transendothelial+migration.">LSP1 is an endothelial gatekeeper of leukocyte transendothelial migration.</a> J. Exp. Med. 201, 409-418 (2005).</li><li>Heit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+accelerates,+but+is+not+required+for,+neutrophil+chemotaxis+to+fMLP.">PI3K accelerates, but is not required for, neutrophil chemotaxis to fMLP.</a> J. Cell Sci. 121, 205-214 (2008).</li></ol>

Intravital माइक्रोस्कोपी सूजन के दौरान ल्युकोसैट भर्ती के सेलुलर और आणविक तंत्र का खुलासा करने के लिए आवश्यक उपकरण है. ल्युकोसैट cremaster मांसपेशियों और अन्त्रपेशी जैसे transluscent ऊतकों के microvasculature में endothelial सेल बातचीत क...

तालिका: सामग्री, विशिष्ट अभिकर्मकों और उपकरण <table border="1"><tr><td> अभिकर्मक / उपकरण का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> Polyethylene टयूबिंग, PE10 </td><td> Becton Dickinson </td><td> 427401 </td><td> आयुध डिपो आईडी × 0.28mm 0.61mm </td></tr><tr><td> भारत स्याही </td><td> स्पीड बॉल कला </td><td> सुपर ब्लैक </td><td> कोई रंजक 100% कार्बन ब्लैक वर्णक </td></tr><tr><td> दाग़ना </td><td> हारून चिकित्सा </td><td> AA03 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> बायर हेल्थकेयर, बायर इंक </td><td> 02169592 दीन </td><td></td></tr><tr><td> Ketamine हाइड्रोक्लोराइड </td><td> Bioniche पशु स्वास्थ्य कनाडा, इंक </td><td> 01989529 दीन </td><td></td></tr><tr><td> Murine रीकॉम्बीनैंट एमआईपी 2 </td><td> आर एंड डी सिस्टम </td><td> 452-M2 </td><td></td></tr><tr><td> WKYMVm </td><td> फीनिक्स फार्मास्यूटिकल्स इंक, </td><td> 072-12 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Invitrogen </td><td> 15510-027 </td><td> Ultrapure </td></tr><tr><td> हेपरिन </td><td> सिग्मा </td><td> एच - 3393 </td><td></td></tr><tr><td> ईमानदार माइक्रोस्कोप </td><td> ओलिंप </td><td> BX61WI </td><td></td></tr><tr><td> 3CCD रंग वीडियो कैमरा </td><td> SONY </td><td> DXC-990 </td><td></td></tr><tr><td> HD-डीवीडी वीडियो रिकॉर्डर </td><td> एलजी इलेक्ट्रॉनिक्स इंक </td><td> RH398H - एम </td><td></td></tr><tr><td> टीवी मॉनीटर </td><td> एलजी इलेक्ट्रॉनिक्स इंक </td><td> 22LG30 </td><td></td></tr><tr><td> जल फैलानेवाला </td><td> थर्मो वैज्ञानिक </td><td> HAAKE DC10 </td><td></td></tr><tr><td> क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप </td><td> Gilson, Pharmacia </td><td> Gilson MINIPULS 3; Pharmacia P-3 </td><td></td></tr><tr><td> Cremaster मांसपेशियों बोर्ड </td><td> Saskatchewan के विश्वविद्यालय </td><td></td><td> होम </td></tr></table>

tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy

रक्त प्रवाह से सूजन ऊतक leukocytes परिसंचारी की भर्ती सूजन 1,2 की एक महत्वपूर्ण और जटिल प्रक्रिया है. सूजन ऊतक के postcapillary venules में शुरू venular दीवार के luminal सतह पर पगहा और रोल leukocytes. Endothelium पर रोलिंग leukocytes गिरफ्तारी और केमोकाइन या venular सतह पर अन्य chemoattractants के जवाब में फर्म आसंजन गुजरना. कई अनुयायी leukocytes endothelium में junctional परिस्त्राव साइट के लिए आसंजन के प्रारंभिक स्थल से स्थानांतरित करने के लिए, एक प्रक्रिया intraluminal 3 रेंगने करार दिया. रेंगने के बाद, leukocytes endothelium (स्थानांतरगमन) के पार चाल और chemoattractant के स्रोत (chemotaxis) 4 की ओर extravascular ऊतकों में विस्थापित. Intravital माइक्रोस्कोपी vivo में ल्युकोसैट endothelial सेल बातचीत visualizing और ल्युकोसैट 2,5 भर्ती के सेलुलर और आणविक तंत्र का खुलासा करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है. इस रिपोर्ट में, हम brightfield intravital माइक्रोस्कोपी का उपयोग करने के लिए कल्पना और न्युट्रोफिल chemoattractant की ढाल के जवाब में माउस cremaster मांसपेशियों में न्युट्रोफिल भर्ती की विस्तृत प्रक्रियाओं का निर्धारण करने के लिए एक व्यापक वर्णन प्रदान करते हैं. न्युट्रोफिल भर्ती agarose जेल की एक छोटा सा टुकड़ा (~ 1 मिमी आकार 3) न्युट्रोफिल chemoattractant (CXCL2, एक CXC केमोकाइन) एमआईपी-2 या WKYMVm (टीआरपी - Lys - Tyr वैल डी - मेट, एक कृत्रिम अनुरूप युक्त प्रेरित बैक्टीरियल पेप्टाइड) मांसपेशी मनाया postcapillary venule के लिए आसन्न ऊतकों पर रखा गया है. समय व्यपगत वीडियो फोटोग्राफी और कंप्यूटर सॉफ्टवेयर ImageJ, न्युट्रोफिल endothelium, न्युट्रोफिल transendothelial प्रवास और प्रवास और ऊतकों में chemotaxis पर intraluminal रेंगने कल्पना और ट्रैक किए गए हैं. इस प्रोटोकॉल intraluminal रेंगने वेग, स्थानांतरगमन समय, टुकड़ी समय, प्रवास वेग, chemotaxis वेग और ऊतकों में chemotaxis सूचकांक जैसे कई न्युट्रोफिल भर्ती मापदंडों के विश्वसनीय और मात्रात्मक विश्लेषण की अनुमति देता है. हमें दिखाना है कि इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए, इन न्युट्रोफिल भर्ती मापदंडों stably हो सकता है और निर्धारित कर सकते हैं एकल कक्ष हरकत सुविधा vivo में पता लगाया.

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Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

हम vivo में न्युट्रोफिल chemoattractant के स्रोत के जवाब में न्युट्रोफिल भर्ती के दौरान गतिशील न्युट्रोफिल endothelial सेल बातचीत को मापने के लिए brightfield intravital माइक्रोस्कोपी के एक प्रोटोकॉल का वर्णन. न्युट्रोफिल intraluminal रेंगने, transendothelial और माउस cremaster मांसपेशियों के ऊतकों में प्रवास chemotaxis समय व्यपगत वीडियो फोटोग्राफी और ImageJ साथ ट्रैक के साथ कल्पना कर रहे हैं.

ट्रैकिंग न्युट्रोफिल Intraluminal क्रॉलिंग, Transendothelial प्रवासन और intravital वीडियो माइक्रोस्कोपी द्वारा chemotaxis ऊतक में

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

न्युट्रोफिल कोशिकी जाल: कैसे उत्पन्न करने के लिए और उन्हें कल्पना

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

वंक्षण लिम्फ नोड के intravital माइक्रोस्कोपी

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

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The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

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In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

इन विट्रो रोगजनक प्रेरित न्यूट्रोफिल ट्रांस-एपिथेलियल माइग्रेशन का आकलन करने के लिए कोकल्चर परख

Mucosal surfaces serve as protective barriers against pathogenic organisms.&#160;Innate immune responses are activated upon sensing pathogen leading to ...

Quantitative Assessment of Human Neutrophil Migration Across a Cultured Bladder Epithelium

एक सभ्य मूत्राशय उपकला भर में मानव न्युट्रोफिल प्रवास के गुणात्मक मूल्यांकन

The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

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Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

रीयल टाइम में anaesthetized चूहों पर intravital माइक्रोस्कोपी द्वारा Mesenteric रगों में न्यूट्रोफिल और monocytes इमेजिंग

Efficient immune response is dependent on rapid mobilization of blood leukocytes to the site of infection or injury. Investigating leukocyte migration in ...

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न्युट्रोफिल भड़काना के intravital इमेजिंग आईएल 1β प्रमोटर संचालित DsRed रिपोर्टर चूहों का उपयोग

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An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

रैपिड न्युट्रोफिल केमोटाक्सिस के लिए एक ऑल-ऑन-चिप विधि रक्त के एक बूंद से सीधे विश्लेषण

Neutrophil migration and chemotaxis are critical for our body's immune system. Microfluidic devices are increasingly used for investigating neutrophil ...

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

इन विट्रो में कुत्ते न्युट्रोफिल Extracellular जाल गठन: प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी द्वारा गतिशील और मात्रात्मक विश्लेषण

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...