Name: tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy
Uploaded: 2011-09-24T14:00:00
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この作品は、カナダ衛生研究所（CIHR、MOP - 86749）から研究助成金によってサポートされていました。 L. LiuはCIHR新奨励賞（MSH - 95374）の受信者です。

1。アガロースゲルでの誘引物質の調製<ol><li>ピペット10 50 - mLコニカルチューブに2 × PBSの添加、および熱水を入れたビーカーに入れておくことによりチューブのウォームアップを行います。 </li><li>ピペット10の蒸留水を加えて、別の50 mLコニカルチューブに0.4 Gアガロースの粉末を加える（少し緩め、キャップ付き）、混合物を加熱（700ワットの電子レンジで約1分間）電子レンジのちょう?...

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	<li>Liu, L., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+of+leukocyte+recruitment:+organ-specific+mechanisms+of+action.">Molecular mechanisms of leukocyte recruitment: organ-specific mechanisms of action.</a> Thromb. Haemost. 89, 213-220 (2003).</li><li>Petri, B., Phillipson, M., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+physiology+of+leukocyte+recruitment:+an+in+vivo+perspective.">The physiology of leukocyte recruitment: an in vivo perspective.</a> J. Immunol. 180, 6439-6446 (2008).</li><li>Phillipson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraluminal+crawling+of+neutrophils+to+emigration+sites:+a+molecularly+distinct+process+from+adhesion+in+the+recruitment+cascade.">Intraluminal crawling of neutrophils to emigration sites: a molecularly distinct process from adhesion in the recruitment cascade.</a> J. Exp. Med. 203, 2569-2575 (2006).</li><li>Wong, C. H., Heit, B., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+regulators+of+leucocyte+chemotaxis+during+inflammation.">Molecular regulators of leucocyte chemotaxis during inflammation.</a> Cardiovasc. Res. 86, 183-191 (2010).</li><li>Gavins, F. N., Chatterjee, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+for+the+study+of+mouse+microcirculation+in+anti-inflammatory+drug+research:+focus+on+the+mesentery+and+cremaster+preparations.">Intravital microscopy for the study of mouse microcirculation in anti-inflammatory drug research: focus on the mesentery and cremaster preparations.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 49, 1-14 (2004).</li><li>Bullen, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microscopic+imaging+techniques+for+drug+discovery.">Microscopic imaging techniques for drug discovery.</a> Nat. Rev. Drug Discov. 7, 54-67 (2008).</li><li>Hazelwood, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Entering+the+Portal:+Understanding+the+Digital+Image+Recorded+Through+a+Microscope.">Entering the Portal: Understanding the Digital Image Recorded Through a Microscope.</a> Imaging Cellular and Molecular Biological Functions. , 3-43 (2007).</li><li>Hickey, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-selectin+facilitates+emigration+and+extravascular+locomotion+of+leukocytes+during+acute+inflammatory+responses+in+vivo.">L-selectin facilitates emigration and extravascular locomotion of leukocytes during acute inflammatory responses in vivo.</a> J. Immunol. 165, 7164-7170 (2000).</li><li>Cara, D. C., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+as+a+tool+for+studying+recruitment+and+chemotaxis.">Intravital microscopy as a tool for studying recruitment and chemotaxis.</a> Methods Mol. Biol. 239, 123-132 (2004).</li><li>Liu, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LSP1+is+an+endothelial+gatekeeper+of+leukocyte+transendothelial+migration.">LSP1 is an endothelial gatekeeper of leukocyte transendothelial migration.</a> J. Exp. Med. 201, 409-418 (2005).</li><li>Heit, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PI3K+accelerates,+but+is+not+required+for,+neutrophil+chemotaxis+to+fMLP.">PI3K accelerates, but is not required for, neutrophil chemotaxis to fMLP.</a> J. Cell Sci. 121, 205-214 (2008).</li></ol>

生体顕微鏡検査は、炎症時に白血球動員の細胞および分子メカニズムを明らかにするための不可欠なツールです。このような精巣挙筋および腸間膜としてtransluscent組織の微小血管系における白血球-内皮細胞の相互作用を測定するための定量的可視化は、技術1,5のアプリケーションのためのゴールドスタンダードのまま。従来の明視野生体顕微鏡は、多くのユニークな技術的特徴を有?...

表：材料、具体的な試薬および器具<table border="1"><tr><td> 試薬/装置の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>ポリエチレンチューブ、PE10 </td><td>ベクトンディッキンソン</td><td> 427401 </td><td> ID 0.28ミリメートル×外径0.61ミリメートル</td></tr><tr><td>インドインク</td><td>スピードボールアート</td><td>スーパーブラック</td><td> 100％のカーボンブラック顔料、無色素</td></tr><tr><td>焼灼</td><td>アーロンメディカル</td><td> AA03 </td><td></td></tr><tr><td>キシラジン</td><td>バイエルヘルスケア社、バイエル（株） </td><td> DIN 02169592 </td><td></td></tr><tr><td>塩酸ケタミン</td><td> Bionicheアニマルヘルスカナダ、（株） </td><td> DIN 01989529 </td><td></td></tr><tr><td>マウス組換え型MIP - 2 </td><td> R＆Dシステムズ</td><td> 452 - M2 </td><td></td></tr><tr><td> WKYMVm </td><td>フェニックスファーマシューティカルズ</td><td> 072から12 </td><td></td></tr><tr><td>アガロース</td><td>インビトロジェン</td><td> 15510-027 </td><td>超高純度</td></tr><tr><td>ヘパリン</td><td>シグマ</td><td> H - 3393 </td><td></td></tr><tr><td>正立顕微鏡</td><td>オリンポス</td><td> BX61WI </td><td></td></tr><tr><td> 3CCDカラービデオカメラ</td><td> SONY </td><td> DXC - 990 </td><td></td></tr><tr><td> HD - DVDビデオレコーダー</td><td> LG電子（株） </td><td> RH398H - M </td><td></td></tr><tr><td>テレビモニター</td><td> LG電子（株） </td><td> 22LG30 </td><td></td></tr><tr><td>水循環装置</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td> HAAKEのDC10 </td><td></td></tr><tr><td>蠕動ポンプ</td><td>ギルソン;ファルマシア</td><td>ジルソンMINIPULS 3;ファルマシアP - 3 </td><td></td></tr><tr><td>精巣挙筋板</td><td>サスカチュワン州の大学</td><td></td><td>自家製の</td></tr></table>

tracking neutrophil intraluminal crawling, transendothelial migration and chemotaxis in tissue by intravital video microscopy

血流から炎症組織への循環白血球の動員は、炎症の1,2の重要かつ複雑なプロセスです。炎症組織のpostcapillary細静脈では、細静脈壁の内腔表面に最初にテザーとロールを白血球。内皮に​​白血球の逮捕を圧延し、細静脈の表面のケモカインまたは他の化学誘引物質に応答して、強固な接着を受ける。多くの接着白血球が接着の初期のサイトから内皮の接合部の血管外漏出のサイトに移転、プロセスが3クロール腔内と呼ばれる。クロールに続いて、白血球は内皮上を移動（移住）と誘引物質のソース（走化性）4に向かって血管外組織に移行する。生体顕微鏡は、 生体内で白血球-内皮細胞の相互作用を可視化し、白血球動員2,5の細胞および分子メカニズムを明らかにするための強力なツールです。このレポートでは、我々は、好中球走化性因子の勾配に応答してマウス精巣挙筋の好中球動員の詳細なプロセスを視覚化し、決定するために明生体顕微鏡を用いての包括的な説明を提供しています。好中球動員、好中球走化MIP - 2（CXCL2、CXCケモカイン）またはWKYMVm（TRP -リジン-チロシン- VAL - D - Metは、合成アナログを含むアガロースゲルの小片（〜1 mmの3サイズ）を誘導する細菌ペプチドの）観測postcapillary細静脈に隣接した筋肉組織に配置されます。時間経過したビデオの撮影とコンピューターソフトImageJのと、好中球内皮上腔クロール、好中球内皮遊走や組織におけるマイグレーションと走化性を可視化し、追跡されます。このプロトコルは、管腔内クロール速度、移住の時、剥離の時間、移動速度、組織における走化性の速度と走化性指数などの多くの好中球動員のパラメータの信頼性と定量分析が可能になります。我々は、このプロトコルを使用して、これらの好中球動員のパラメータが安定的に決定され、単一の細胞移動が便利にin vivoで追跡することができることを示している。

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Tracking Neutrophil Intraluminal Crawling, Transendothelial Migration and Chemotaxis in Tissue by Intravital Video Microscopy

我々は、in vivoでの好中球走化性因子のソースに対応して好中球動員中に動的な好中球 - 内皮細胞の相互作用を測定するための明生体顕微鏡検査のプロトコルを記述する。好中球内腔クロール、マウス精巣挙筋の組織の経内皮移動と走化性は、時間の経過したビデオ撮影すると、ImageJで追跡と視覚化されます。

生体内ビデオ顕微鏡による組織内好中球腔内クロールを追跡、経内皮移動と走

The recruitment of circulating leukocytes from blood stream to the inflamed tissue is a crucial and complex process of inflammation1,2. In the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

好中球細胞外トラップ：それらを生成して可視化する方法

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

免疫・感染学

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

鼠径リンパ節の生体顕微鏡

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

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脾臓の生体顕微鏡検査：寄生虫モビリティと血流​​の定量的解析

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

In vitro Coculture Assay to Assess Pathogen Induced Neutrophil Trans-epithelial Migration

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The recruitment of immune cells from the periphery to the site of inflammation is an essential step in the innate immune response at any mucosal surface. ...

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胚中心の高解像度生体内ストライプ照明顕微鏡

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Imaging Neutrophils and Monocytes in Mesenteric Veins by Intravital Microscopy on Anaesthetized Mice in Real Time

リアルタイムで麻酔したマウスに生体顕微鏡により腸間膜静脈に好中球および単球のイメージング

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Intravital Imaging of Neutrophil Priming Using IL-1&#946; Promoter-driven DsRed Reporter Mice

IL-1βプロモーター駆動のDsRedレポーターマウスを用いた好中球プライミングの生体内イメージング

Neutrophils are the most abundant leukocytes in human blood circulation and are quickly recruited to inflammatory sites. Priming is a critical event that ...

An All-on-chip Method for Rapid Neutrophil Chemotaxis Analysis Directly from a Drop of Blood

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In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

In Vitro Canine Neutrophil Extracellular Trap Formation: Dynamic and Quantitative Analysis by Fluorescence Microscopy

体外蛍光顕微鏡による犬の好中球細胞外トラップ形成: ダイナミックな定量的分析

In response to invading pathogens, neutrophils release neutrophil extracellular traps (NETs), which are extracellular networks of DNA decorated with ...