Name: establishment of epstein-barr virus growth-transformed lymphoblastoid cell lines
Uploaded: 2011-11-08T12:00:00
Duration: 6 min 38 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines at JoVE.com

Это исследование финансировалось за счет грантов NIH K08 AI062732, K12 HD001401 и 1UL1RR024139-02 и Исследования здоровья детей Грант Чарльз Х. Гуда Фонда SB-M. и Фонд исследований в Университете штата Нью-Йорк в Стони Брук.

1. ВЭБ массоподготовки <ol><li> Субкультура экспоненциально растущей В95-8 клеток (АТСС CRL # 1612; 13) при 3 х 10 5 клеток / мл в 75 см 2 культуре ткани колбу с использованием стерильной техники. Клетки, выращенные в полной RPMI 1640, содержащей 10% тепла инактивированной эмбриональной телячьей сыворотки (FBS), пенициллина / стрептомицина на 100U/ml и 100 мкг / мл, соответственно, и амфотерицин на уровне 0,5 мкг / мл при 37 ° С в присутствии 5% CO 2. </li><li> Сорок восемь часов спустя, ресуспендирования клеток в свежей полной RPMI 1640 на 1 х 10 6 клеток / мл. Для стимулирования производства вируса, стимулируют клетки с 20ng/ml tetradecanoyl форбол ацетат (ДТС) в течение 1 часа в стандартной СО 2 инкубатора. Вымойте клетки трижды RPMI 1640, чтобы удалить тонн в год. </li><li> Ресуспендируют клеток в первоначальный объем полной RPMI 1640 (от 1,2) и поместить колбу в CO 2 инкубаторе в течение 96 часов. Этот метод был показан для получения высоких титров инфекционной номинальной вирусчастиц 6. </li><li> Центрифуга при 600 х г в течение 10 мин при 4 ° С до отдельных EBV-содержащих супернатант культуры из клеток. Фильтры супернатанта через 0,45-микронный фильтр, Алиготе, и хранить при температуре -70 ° С в течение более года. Альтернативой является получение супернатант из В95-8 клеток, содержащих EBV из АТСС (VR-1492) и использовать в разведении рекомендованных АТСС. </li></ol> 2. Выделение мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) <ol><li> Ничья 10 мл крови от донора в гепаринизированной шприца или гепаринизированной трубки крови. Развести крови с 20 мл PBS при комнатной температуре в 50 мл коническую трубку. </li><li> Подложка разбавленной крови с 15 мл Ficoll Hypaque лимфоцитов средой разделения. Центрифуга при 225 х г без тормозов при комнатной температуре в течение 30 минут. </li><li> Удалить лейкомассы и передачи в новый 50 мл коническую трубку. Повышение объема до 50 мл PBS и спина при 600 мкг при комнатной температуре в течение 10 минут. </li><li> Pouт от супернатант. Вымойте клеток ресуспендирования гранул в 50 мл PBS и вращается со скоростью 600 х г при комнатной температуре в течение 10 минут. Мыть два раза больше в подобной манере. </li><li> Ресуспендируют отмытых клеток в 1 мл полной RPMI. Используйте 5 мкл клеток для подготовки 1 / 10 разведения в Трипановый синий. Граф живых клеток использованием гемоцитометра. </li><li> Отрегулируйте громкость с помощью полной RPMI в 25 см 2 колбы культуры ткани для получения концентрации клеток из 2 х 10 6 / мл. </li></ol> 3. Инфекция EBV <ol><li> Добавить FK506 (А. Г. Научно) для клеточной суспензии от 2,6 до конечной концентрации 20 нМ. Место колбу в CO 2 инкубаторе при температуре 37 ° С в течение одного часа. </li><li> Быстрое таяние аликвоту ВЭБ. Удалить колбу из инкубатора и добавить к EBV клеток в 1 / 10 разведения. Как правило, это разведение обеспечивает МВД 50-100. Swirl колбы перемешать и поместить его в вертикальном положении в CO 2 инкубаторе при температуре 37 ° C. </li></ol> Примечание йна шаге 4, выполнены, чтобы предсказать успех, это необязательный шаг. Если Шаг 4 должны быть выполнены, то вам нужно для инкубации дополнительные колбы ООН-инфицированных РВМС на 2 х 10 6 клеток / мл в качестве контроля. 4. Определение пролиферирующих популяцию клеток (Необязательный шаг) <ol><li> Подготовка FACS буфера: PBS + 5% FBS. Хранить при температуре 4 ° С. </li><li> Сделайте следующее антител смесей в объеме 50 мкл каждого для окрашивания клеток в шаге 4.6. Антитела разведения должны быть сделаны в FACS буфера, содержащего 1mg/ml мыши IgG (Sigma) для подавления неспецифическое связывание антителами. <ol class="lroman"><li> одной окрашивали PE сопряженных анти-CD23 антител (1 / 50 разбавления) </li><li> одной окрашивали FITC сопряженных анти-CD58 антител (1 / 50 разбавления) </li><li> одной окрашивали PE-Cy5 сопряженных анти-CD19 антител (1 / 50 разбавления) </li><li> тройной окрашивают в течение CD23, CD58, CD19 и (1 / 50 разбавления каждого) </li><li> одной окрашивали PE сопряженных контроль изотипаантител соответствуют CD23-PE (в той же концентрации, как анти-CD23 антитела) </li><li> одной окрашивали FITC конъюгированных антител контроль изотипа согласован с CD58-FITC (при той же концентрации, как анти-CD58 антитела) </li><li> одной окрашивали PE-Cy5 конъюгированных антител контроль изотипа согласован с CD19-PE-Cy5 (при той же концентрации, как анти-CD19 антитела) </li><li> тройной окрашивали все три антитела изотипа контроля. </li></ol> Временного хранения смесей при температуре 4 ° С в темноте. </li><li> В третий день после контакта с ВЭБ, мягко водоворот колбу для получения более равномерного клеточной суспензии. Удалить из колбы 2 мл в 2 мл пробирку Эппендорфа. Спиновые трубки в микроцентрифужных при 3000 оборотов в минуту при комнатной температуре в течение 3 минут. </li><li> Аспирируйте супернатант и ресуспендирования клеток в буфер FACS на 5 х 10 6 до 1 х 10 7 клеток / мл. </li><li> Удалить восемь 50 мкл аликвоты в отдельных трубок Эппендорф или 96-и V-нижней пластине. Спиновые трубы или пластины при 1500 х гв течение 3 минут. </li><li> Удалите супернатант и вихревые трубки / пластины. Ресуспендируют клеток в каждой пробирке / лунку в 50 мкл FACS буфера, содержащего соответствующие разведения антител подготовлен в 4.2. </li><li> Инкубируйте труб / пластин на льду в темноте в течение 30 минут. Центрифуга клеток при 3000 оборотов в минуту в течение 3 минут, удалить супернатант, и добавьте 200 мкл буфера FACS. Центрифуга клетки снова и удалите супернатант для завершения стирки. Повторить еще два стирок. </li><li> Ресуспендируют клеток в 200 мкл FACS буфера и получить данные с помощью проточного цитометра, приобретя 20 000 событий / трубы. </li><li> Анализ данных с помощью WinMDI (бесплатный для FACS анализ данных на ПК). Ворота на живые клетки с использованием форвардных и боковые профили разброс. Затем ворота живых клеток на экспрессию CD19 + (В-клеток маркера) после сравнения с клетками окрашивали антителами изотипа контроля соответствуют анти-CD19 антител. Участок CD19 +-клеток жить с интенсивность флуоресценции для CD23 на оси х и интенсивность флуоресценции для CD58 на оси Y.. Определите CD23 + CD58 + и клеток по сравнению с ВЭБ, подвергшихся воздействию клеток, окрашенных соответствие антитела изотипа контроля. Присутствие CD23 привет CD58 +-клеток в ВЭБ, подвергшихся воздействию культуры (рис. 2C) прогнозирует успешный результат ВЭБ-инфицированных роста трансформированных клеток. В противоположность этому, CD23 привет CD58 + клеток не возникают, когда клетки не подвергаются EBV (рис. 2A) или подвергаться без увековечивания штамм EBV (рис. 2В). CD23 + CD58 привет клетки были экспериментально продемонстрировано пройти распространение и впоследствии установить LCL (14). </li></ol> 5. Расширение и криоконсервации LCL <ol><li> Визуализация клеток с помощью световой микроскопии: По неделю после инфицирования EBV, кластеры клеток видны под световым микроскопом. На рисунке 3 показан пример ранних микроскопических кластеров (рис. 3В) в колбу. </li><li> С течением времени микроскопические кластеры становятся большими, что скопления виднымакроскопически в колбу. Рис 3C показывает большие скопления клеток в установленном LCL с помощью световой микроскопии. </li><li> Кормление клетки: Двойной объем культуральной среды в культуре колбу на 12 день. Впоследствии расширить культуру, увеличивая его объем в 2-3 раза использованием полной RPMI. </li><li> Периодичность кормления клетки должны быть определены на основе скорости роста клеток. При культуральной среде становится желтым, как правило, время, чтобы заменить средства массовой информации, что и выше. Как правило, это происходит один раз в неделю. Однако, некоторые клеточные линии, возможно, придется питаться более или менее часто. Развернуть культуры до 75-100 мл в течение ближайших нескольких недель. </li><li> Криоконсервация: При замораживании до клетки, клетки центрифуге при 600 х г в течение 10 минут при комнатной температуре. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок клеток в холодную среду замораживания содержащей 90% FBS и 10% диметилсульфоксида при 1 х 10 7 клеток / мл. Место трубки в жидком азоте. </li></ol> 6. Представитель результаты: Успешный результат предсказывается наличие CD23 + CD58 привет клеток. Примерно 2-3% живых клеток на 3-4 день после контакта с ВЭБ должны иметь эту анкету (рис. 2С). Другие субпопуляции CD23 +, CD23 -, CD58 + и CD58 - клеток наблюдается после контакта с ВЭБ показать минимальное распространение 14. Un-инфицированные клетки (рис. 2A) и клетки подвергаются EBV от HH514-16 клетки (рис. 2В), укрывательство, не увековечивать штамм EBV, не демонстрируют CD23 + CD58 привет клеток. Вы также можете визуализировать клетки с помощью световой микроскопии для контроля успеха: Как упоминалось ранее, в течение недели после инфицирования EBV, небольшие скопления клеток в колбе видны с помощью световой микроскопии (рис. 3В). Как прогрессирует время и клетки развиваются в LCL, микроскопические кластеры становятся крупнее (рис. 3C), что скопления видны макроскопически в колбу. Рисунок 1. Workflow для генерации и криоконсервации лимфобластоидных клеточных линий. Периферической крови центрифугируют через градиент Ficoll. РВМС присутствует в пальто Баффи установленного градиента подвергаются FK506 с последующим добавлением ВЭБ. EBV, подвергшихся воздействию клетки выращивают при температуре 37 ° С в присутствии 5% CO 2, установить и в дальнейшем расширять LCL для криоконсервации. <img alt="Рисунок 2" src="/files/ftp_upload/3321/3321fig2.jpg" /> Рисунок 2. Определение субпопуляции лимфоцитов ожидается пройти распространение после контакта с ВЭБ. Un-инфицированных РВМС () или РВМС подвергается EBV основе HH514-16 клеток (B) или В95-8 клеток (C) в присутствии FK506 было собрано на 3 день. Клетки окрашивали флуорохромом сопряженных антител, направленных против CD19, CD23, CD58 и. После стробирования на живой клеткес, не-инфицированных () и ВЭБ, подвергшихся воздействию (В и С) CD19 +-клетки были исследованы на экспрессию CD23 и CD58. Субпопуляции В-клеток CD58 выражения и высокий уровень CD23 (CD23 привет CD58 +), наблюдается только в клетках, подвергавшихся к трансформации компетентных EBV (производный от В95-8 ячеек), изображен. <img alt="Рисунок 3" src="/files/ftp_upload/3321/3321fig3.jpg" /> Рисунок 3. Визуализация клеточных кластеров в ВЭБ-инфицированных клеток. РВМС лечили FK506 и инфицированы EBV. Un-инфицированных (А) и ВЭБ, подвергшихся воздействию (В) клетки были рассмотрены одной недели после заражения фазовый контраст микроскопии (10х увеличение). Пять-недельных клеточной линии лимфобластоидных показано на C.

<ol>
	<li>Thorley-Lawson, D. A., Gross, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Persistence+of+the+Epstein-Barr+virus+and+the+origins+of+associated+lymphomas.">Persistence of the Epstein-Barr virus and the origins of associated lymphomas.</a> N. Engl. J. Med. 350, 1328-1337 (2004).</li><li>Kubuschok, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+spontaneous+Epstein-Barr+virus+lymphoblastoid+cell+lines+genetically+modified+to+express+tumor+antigen+as+cancer+vaccines:+mutated+p21+ras+oncogene+in+pancreatic+carcinoma+as+a+model.">Use of spontaneous Epstein-Barr virus lymphoblastoid cell lines genetically modified to express tumor antigen as cancer vaccines: mutated p21 ras oncogene in pancreatic carcinoma as a model.</a> Hum. Gene Ther. 13, 815-827 (2002).</li><li>Kuppers, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cells+under+influence:+transformation+of+B+cells+by+Epstein-Barr+virus.">B cells under influence: transformation of B cells by Epstein-Barr virus.</a> Nat. Rev. Immunol. 3, 801-812 (2003).</li><li>Traggiai, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+to+make+human+monoclonal+antibodies+from+memory+B+cells:+potent+neutralization+of+SARS+coronavirus.">An efficient method to make human monoclonal antibodies from memory B cells: potent neutralization of SARS coronavirus.</a> Nat. Med. 10, 871-875 (2004).</li><li>Bernasconi, N., Traggiai, E., Lanzavecchia, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+serological+memory+by+polyclonal+activation+of+human+memory+B+cells.">Maintenance of serological memory by polyclonal activation of human memory B cells.</a> Science. 298, 2199-2202 (2002).</li><li>Oh, H. -. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+efficient+method+for+the+rapid+establishment+of+Epstein-Barr+virus+immortalization+of+human+B+lymphocytes.">An efficient method for the rapid establishment of Epstein-Barr virus immortalization of human B lymphocytes.</a> Cell Prolif. 36, 191-197 (2003).</li><li>Ventura, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+a+simple+method+for+the+Epstein-Barr+virus+transformation+of+lymphocytes+from+members+of+large+families+of+Reunion+Island.">Use of a simple method for the Epstein-Barr virus transformation of lymphocytes from members of large families of Reunion Island.</a> Hum. Hered. 38, 36-43 (1988).</li><li>Henderson, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficiency+of+transformation+of+lymphocytes+by+Epstein-Barr+virus.">Efficiency of transformation of lymphocytes by Epstein-Barr virus.</a> Virology. 76, 152-163 (1977).</li><li>Bird, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+Epstein-Barr+virus+activation+of+human+B+lymphocytes.">Characteristics of Epstein-Barr virus activation of human B lymphocytes.</a> J. Exp. Med. 154, 832-839 (1981).</li><li>Neitzel, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+routine+method+for+the+establishment+of+permanent+growing+lymphoblastoid+cell+lines.">A routine method for the establishment of permanent growing lymphoblastoid cell lines.</a> Hum. Genet. 73, 320-326 (1986).</li><li>Pelloquin, F., Lamelin, J. P., Lenoir, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+B+lymphocytes+immortalization+by+Epstein-Barr+virus+in+the+presence+of+cyclosporin+A.">Human B lymphocytes immortalization by Epstein-Barr virus in the presence of cyclosporin A.</a> In Vitro Cell Dev. Biol. 22, 689-694 (1986).</li><li>Pressman, S., Rotter, J. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epstein-Barr+virus+transformation+of+cryopreserved+lymphocytes:+prolonged+experience+with+technique.">Epstein-Barr virus transformation of cryopreserved lymphocytes: prolonged experience with technique.</a> Am. J. Hum. Genet. 49, 467-467 (1991).</li><li>Miller, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epstein-Barr+virus:+Transformation,+cytopathic+changes,+and+viral+antigens+in+squirrel+monkey+and+marmoset+leukocytes.">Epstein-Barr virus: Transformation, cytopathic changes, and viral antigens in squirrel monkey and marmoset leukocytes.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. 69, 383-387 (1972).</li><li>Megyola, C., Ye, J., Bhaduri-McIntosh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+sub-population+of+B+cells+that+proliferates+after+infection+with+Epstein-Barr+virus.">Identification of a sub-population of B cells that proliferates after infection with Epstein-Barr virus.</a> Virol. J. 8, 84-84 (2011).</li><li>Tosato, G., Cohen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Epstein-Barr+virus+(EBV)-immortalized+B+cell+lines.">Generation of Epstein-Barr virus (EBV)-immortalized B cell lines.</a> Current Protocols of Immunology. Chapter 7, 22-22 (1991).</li></ol>

Нет конфликта интересов объявлены.

Метод, описанный в этой статье генерирует LCL-доноров периферической крови с быстрым увековечение и криоконсервации раз. Благодаря использованию FK 506, Т-клеток иммунодепрессанты, а также высокие титры инфекционного вируса, мы можем способствовать распространению ВЭБ-инфицированных В-клеток из периферической крови мононуклеаров. Эти меры делают описанный метод более эффективным, в результате быстрого роста клеток для последующих экспериментов. Традиционно, рост трансформация была контролируется визуализации скопления клеток с помощью световой микроскопии примерно через неделю после контакта с ВЭБ 6, 15. Тем не менее, кластеризация клеток не из конкретных показателей ВЭБ-опосредованного роста трансформации. Ранее мы уже продемонстрировали последовательную идентификацию пролиферирующих клеточных популяций с помощью проточной цитометрии 14, обеспечивая точный и конкретный метод для определения успешного результата уже в три дня на кормеэ воздействия В-клеток в ВЭБ.

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td></tr><tr><td> Амфотерицин </td><td> Фишер Bioreagents </td><td> BP 928-250 </td></tr><tr><td> Диметилсульфоксид </td><td> Сигма </td><td> D 2650 </td></tr><tr><td> Эмбриональной бычьей сыворотки, тепло-инактивированная </td><td> Сигма </td><td> F 4135 </td></tr><tr><td> Ficoll Hypaque СМИ лимфоцитов разделения </td><td> Mediatech </td><td> 25-072 </td></tr><tr><td> FK506 </td><td> А. Г. Научное </td><td> F 1030 </td></tr><tr><td> IgG в сыворотке мышей </td><td> Сигма </td><td> Я 8765 </td></tr><tr><td> Мышь анти-CD23 человека конъюгированных с PE </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555711 </td></tr><tr><td> Мышь изотипа IgG1 конъюгированных с PE </td><td> BD Pharmingen </td><td> 554680 </td></tr><tr><td> Мышь анти-CD58 человека конъюгированные с FITC </td><td> Пирс Thermo Scientific </td><td> MA1-82159 </td></tr><tr><td> Мышь изотипа IgG1 конъюгированные с FITC </td><td> BD Pharmingen </td><td> 550616 </td></tr><tr><td> Мышь анти-CD19 человека конъюгированных с PE-Cy5 </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555414 </td></tr><tr><td> Мышь изотипа IgG1 конъюгированных с PE-Cy5 </td><td> Dako </td><td> X 0955 </td></tr><tr><td> Пенициллина / стрептомицина </td><td> Гибко </td><td> 15140-122 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 средств массовой информации </td><td> Сигма </td><td> R 8758 </td></tr><tr><td> Tetradecanoyl форбол ацетат (ДТС) </td><td> Calbiochem </td><td> 407952 </td></tr><tr><td> FACS буфера (1х фосфатным буферным солевым раствором + 5% эмбриональной телячьей сыворотки) </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

establishment of epstein-barr virus growth-transformed lymphoblastoid cell lines

Заражение В-клеток с вирусом Эпштейна-Барр (ВЭБ) ведет к увековечению распространения и последующего, в результате создания лимфобластоидных клеточных линий (LCL) в пробирке. Поскольку LCL являются латентно инфицированных ВЭБ, они обеспечивают модели системы расследования EBV задержки и вирусов управляемой B пролиферации клеток и опухолей 1. LCL были использованы для представления антигенов в различных иммунологических анализах 2, 3. Кроме того, LCL может быть использован для создания человеческих моноклональных антител, 4, 5 и обеспечивают потенциально неограниченный источник, когда доступ к первичным материалам биологических ограничено 6, 7. Различные методы были описаны для создания LCL. Ранее методы включали использование митогены, таких как фитогемагглютинином, липополисахарид 8 и 9 pokeweed митоген увеличить эффективность EBV-опосредованной увековечение. Совсем недавно, другие использовали immunosupprизобразительных средств, таких как циклоспорин для подавления Т клеточного убийства зараженных клеток B 7, 10-12. Значительный период времени от инфекции EBV к созданию клеточных линий диски требование для более быстрого и более надежные методы ВЭБ-приводом B преобразования рост клеток. Используя сочетание высокого титра ВЭБ и иммуносупрессивных агентов, мы способны постоянно заражают, преобразования и создания LCL из В-клеток в периферической крови. Этот метод использует небольшое количество мононуклеарных клеток периферической крови, которые заражены в пробирке скопления клеток может быть доказана. Присутствие CD23 с ВЭБ в присутствии FK 506, Т-клеток иммунодепрессанты. Традиционно, следствием пролиферации клеток контролируется визуализации микроскопических кластеров клеток примерно через неделю после инфицирования ВЭБ. Сгустки LCL можно увидеть невооруженным глазом в течение нескольких недель. Мы описываем анализ, чтобы определить рано, если ВЭБ-опосредованной гrowth преобразование успешным еще до того, микроскопические скопления клеток может быть доказана. Присутствие CD23 привет CD58 + клеток наблюдалось уже через три дня после инфекции указывает на успешный результат.

Watch this Scientific Journal Video about Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines at JoVE.com

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

Мы описываем метод генерации преобразован В-клеток линий с использованием вируса Эпштейна-Барра. Мы также иллюстрировать роман анализа, которая позволяет обнаруживать В-клеток суждено трансформироваться еще в три дня после заражения.

Создание вирусом Эпштейна-Барра роста трансформированных лимфобластоидных клеточных линий

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Derivation of Thymic Lymphoma T-cell Lines from Atm-/- and p53-/- Mice

Вывод тимуса лимфомы Т-клеточных линий из Atm - / -</sup И Р53 - / -</sup Мыши

Established cell lines are a critical research tool that can reduce the use of laboratory animals in research. Certain strains of genetically modified ...

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

Расширение цитотоксических Т-лимфоцитов из пуповинной крови, что целевая цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр Вирус, и аденовирус

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Live Cell Imaging of Alphaherpes Virus Anterograde Transport and Spread

Живая изображений Сотовые Alphaherpes Вирус Антероградный транспорта и распространения

Advances in live cell fluorescence microscopy  techniques, as well as the construction of recombinant viral strains that  express fluorescent fusion ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

Нейтрофильная Выделение и анализ для определения их роли в клеточной лимфомы чувствительность к терапевтических агентов

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

Оценка эффективности и токсичности РНК Ориентация ВИЧ-1 Производство для использования в генной или терапии наркотиками

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

A Simple Red Blood Cell Lysis Method for the Establishment of B Lymphoblastoid Cell Lines

Простой эритроцит Лизис Метод создании B лимфобластоидная клеточных линий

A number of methods exist for the transformation of B lymphocytes by the Epstein Barr virus in vitro into immortalized cell lines. We have developed a new ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

Эффективной и простой метод для установления линии Т-клеток у больных с хроническим активный вирус Эпштейна - Барр инфекции и НК

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

Identification of Coding and Non-coding RNA Classes Expressed in Swine Whole Blood

Идентификация и кодирования кодирование классы РНК выражена в свином цельной крови

The advent of innovative and increasingly powerful next generation sequencing techniques has opened new avenues into the ability to examine the underlying ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Создание вирусной инфекции и анализа взаимодействия хост вирус в Drosophila Melanogaster

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

In Vitro ELISA Test to Evaluate Rabies Vaccine Potency

В Vitro ELISA тест для оценки бешенства вакцины потенции

The growing global concern for the animal welfare is encouraging manufacturers and the National Control Laboratories (OMCLs) to follow the 3Rs strategy ...