Name: organotypic slice cultures of embryonic ventral midbrain: a system to study dopaminergic neuronal development in vitro
Uploaded: 2012-01-31T12:00:00
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我々は器官のスライス培養系とヴォルフガングヒューと原稿の重要な読書のためのLiviuガブリエルBodeaを確立する彼らの助けのためにマルティーヌEmondとイザベルBrachmannに感謝。我々は、ShhのCreERマウスのためのR26レポーターマウスとクリフTabin用フランクコンスタンティーニに感謝します。本研究では、ノルトラインヴェストファーレン州（PROGRAMMツアFörderungルワールRückkehrデwissenschaftlichen Spitzennachwuchses AUS DEM Ausland）の科学研究省から研究賞によって資金を供給された。

このプロトコルの部分はダサらから変更されています。、2007 7。 1。準備<ol><li>前日調製することができる<ol><li> ：1Xクレブスバッファー（1.5 L）を準備 126 mMのNaCl、2.5mMのKClを、1.2 mMのはのNaH 2 PO 4：H 2 O、1.2 mMのMgCl 2、2.5mMのCaCl 2を 、11 mMグルコース、25mMのNaHCO 3水溶液は 、7.4にpHを調整する。?...

<ol>
	<li>Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+neurons+arise+in+symmetric+and+asymmetric+division+zones+and+migrate+through+specific+phases.">Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases.</a> Nat. Neurosci. 7 (2), 136-136 (2004).</li><li>Martini, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+selection+of+leading+process+branches+mediates+chemotaxis+during+tangential+neuronal+migration.">Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration.</a> Development. 136 (1), 41-41 (2009).</li><li>Marin, O., Valiente, M., Ge, X., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guiding+neuronal+cell+migrations.">Guiding neuronal cell migrations.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2 (2), a001834-a001834 (2010).</li><li>Ayala, R., Shu, T., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trekking+across+the+brain:+the+journey+of+neuronal+migration.">Trekking across the brain: the journey of neuronal migration.</a> Cell. 128 (1), 29-29 (2007).</li><li>Smidt, M. P., Burbach, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+a+mesodiencephalic+dopaminergic+neuron.">How to make a mesodiencephalic dopaminergic neuron.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8 (1), 21-21 (2007).</li><li>Legue, E., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+fate+mapping+using+site-specific+recombinases.">Genetic fate mapping using site-specific recombinases.</a> Methods. Enzymol. 477, 153-153 (2010).</li><li>Daza, R. A., Englund, C., Hevner, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+slice+culture+of+embryonic+brain+tissue.">Organotypic slice culture of embryonic brain tissue.</a> CSH Protoc. , (2007).</li><li>Harfe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+expansion-based+temporal+Shh+gradient+in+specifying+vertebrate+digit+identities.">Evidence for an expansion-based temporal Shh gradient in specifying vertebrate digit identities.</a> Cell. 118 (4), 517-517 (2004).</li><li>Srinivas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus.">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Dev. Biol. 1, 4-4 (2001).</li><li>Joksimovic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporally+separable+Shh+domains+in+the+midbrain+define+distinct+dopaminergic+progenitor+pools.">Spatiotemporally separable Shh domains in the midbrain define distinct dopaminergic progenitor pools.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (45), 19185-19185 (2009).</li><li>Blaess, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal-spatial+changes+in+Sonic+Hedgehog+expression+and+signaling+reveal+different+potentials+of+ventral+mesencephalic+progenitors+to+populate+distinct+ventral+midbrain+nuclei.">Temporal-spatial changes in Sonic Hedgehog expression and signaling reveal different potentials of ventral mesencephalic progenitors to populate distinct ventral midbrain nuclei.</a> Neural. Dev. 6 (1), 29-29 (2011).</li><li>Hippenmeyer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+developmental+switch+in+the+response+of+DRG+neurons+to+ETS+transcription+factor+signaling.">A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling.</a> PLoS Biol. 3 (5), e159-e159 (2005).</li></ol>

ここで紹介する器官のスライス培養法は、胚の腹側中脳のドーパミン作動性ニューロンとそれらの回遊と投影経路の開発の in vitro解析における短期的なシステムを提供する。我々は慎重に腹側中脳ドーパミン作動性ニューロンの正常な発展を可能にするスライスを得るためにに出席されるべきプロトコルの重要なステップの数があることがわかった。最も重要なステップは、高?...

特定の試薬と機器の表<table border="1"><tr><th>試薬の名前</th><th>会社</th><th>カタログ番号</th><th>コメント（省略可能） </th></tr><tr><td> DMEM </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D6429 </td><td></td></tr><tr><td>グルコース30パーセント</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> G7528 - 250 </td><td></td></tr><tr><td>ウマ血清</td><td>インビトロジェン</td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM（4,5 g / Lのグルコース、L - Glnを、ナトリウムフエンヒローラ、NaHCO 3で） </td><td>シグマアルドリッチ</td><td> D6429 - 500 </td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン100倍</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> P4333 - 20 </td><td></td></tr><tr><td> L -アスコルビン酸</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> A4403 </td><td> -20℃で200mmの株式や店舗を準備する</td></tr><tr><td>超高純度LMPアガロース</td><td>インビトロジェン</td><td> 15517-022 </td><td></td></tr><tr><td> Millicelインサート</td><td>ミリポア</td><td> PICMORG50 </td><td></td></tr><tr><td>低μ皿35ミリメートル、 </td><td> Ibidi </td><td> 80136 </td><td></td></tr><tr><td>ビブラトーム</td><td> Microm </td><td> HM 650V </td><td></td></tr><tr><td>かみそりの刃</td><td>プラノ社</td><td> 121〜6 </td><td></td></tr><tr><td> Histoacryl接着剤</td><td> BRAU9381104 </td><td>ブラウンAesculap </td><td></td></tr><tr><td>穴あきスプーン径 直径15ミリメートル</td><td>ファイン科学ツール</td><td> 10370 -18 </td><td></td></tr><tr><td>鉗子5 Dumoxel </td><td>ファイン科学ツール</td><td> 11252〜30 </td><td></td></tr></table> immunostainingsのために使用される抗体。 <table border="1"><tr><tD 抗体の &gt; 名前 </td><td> 会社 </td><td > カタログ番号 </td><td> コメント（省略可能） </td></tr><tr><td>ウサギ抗チロシンヒドロキシラーゼ</td><td>ミリポア</td><td> AB152 </td><td>希釈1:500 </td></tr><tr><td>マウス抗チロシンヒドロキシラーゼ</td><td>ミリポア</td><td> MAB318 </td><td>希釈1:500 </td></tr><tr><td>マウス抗BrdU </td><td> BD Pharmingen社</td><td> 555627 </td><td>希釈1:200 </td></tr><tr><td>ウサギ抗切断型カスパーゼ3 </td><td>セルシグナリングテクノロジー</td><td> 9661 </td><td>希釈1:200 </td></tr><tr><td>ロバ抗ウサギIgG -アレクサ488 </td><td>インビトロジェン</td><td> A21206 </td><td>希釈1:500 </td></tr><tr><td>ロバ抗マウスIgG - Cy3を</td><td>ジャクソンイムノ</td><td> 715-165-150 </td><td>希釈1:200 </td></tr></table>

organotypic slice cultures of embryonic ventral midbrain: a system to study dopaminergic neuronal development in vitro

マウスは、分子や遺伝子データの豊富さに起因する哺乳類の脳の発達を研究するための優れたモデル生物です。マウスの胚にアクセスできず、不透明であるしかし、発展途上のマウスの脳は、 生体内で容易な操作と画像処理には適していません。胎児の脳の器官切片培養したがって、広くin vitroでマウスの脳の発達を研究するために使用されています。 生体外の操作やトランスジェニックマウスの使用ニューロンやグリア細胞の亜集団は、蛍光タンパク質で標識することができるように遺伝子発現を変更できます。標識された細胞の挙動は、タイムラプスイメージングを用いて観察することができます。タイムラプスイメージングは、後期胚の段階1-2に大脳皮質の発達の基礎となる細胞の挙動を研究するために、特に成功している。前脳の外側の脳領域における胚器官スライス培養系ではあまりよくestablisですHED。したがって、神経細胞の遊走を記述するタイムラプスイメージングデータの富は前脳3,4に限定されています。それは、背側の脳のために発見された原則は、腹側脳の領域に対しても当てはまるかどうか、まだ知られていないです。腹側脳では、神経細胞は神経細胞のクラスターではなく、レイヤーで構成されており、彼らはしばしば、彼らの最終的な位置に到達するための複雑な渡り鳥軌道を受けなければならない。腹側中脳は腹側脳の発達のための唯一の良いモデル系ではなく、またそのような病気のプロセスに関連するドーパミン作動性ニューロンなどの神経集団が含まれています。ドーパミン作動性ニューロンの機能と変性が成人と高齢化、脳内の非常に詳細に研究されている一方で、少しはその分化と移行フェーズ5の間にこれらのニューロンの振る舞いについては知られている。ここでは、胎生（E）12.5マウス腹側中脳から切片培養の生成を説明します。これらのスライスカルトURESは、in vitroで数日間にわたってドーパミン作動性ニューロンの開発を監視するための潜在的に適しています。我々は、胚発生のこれらの初期の段階で脳のスライスを生成するための重要なステップを強調表示し、in vitroでドーパミン作動性ニューロンの正常な発展を維持するために必要な条件を議論する。タイムラプスイメージング実験から我々はまた、今回の結果。これらの実験では、腹側中脳前駆体（ドパミン前駆体を含む）およびその子孫は、Creを/つのloxPベースの誘導性の運命のマッピングシステム6を使用してモザイクのように標識した。

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Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

E12.5マウス胚中脳から器官型スライスを生成する方法が記載されている。器官切片培養は、ドーパミン作動性ニューロンや他の腹側中脳の神経細胞の挙動を観察するために使用することができます。

胚腹側中脳の器官型スライス培養：ドーパミン作動性ニューロンの発達を研究するための体制 in vitroで</em

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