Name: organotypic slice cultures of embryonic ventral midbrain: a system to study dopaminergic neuronal development in vitro
Uploaded: 2012-01-31T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro at JoVE.com

Martine Emond ve Isabel Brachmann Organotipik dilim kültür sistemi ve Wolfgang Hübner ve yazının eleştirel okuma Liviu Gabriel Bodea kurulmasında yardım ettikleri için teşekkür ediyorum. Biz Frank Costantini Shh CreER fareler için R26 muhabiri fareler ve Cliff Tabin için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışmada, Kuzey Ren-Vestfalya (Programm zur Förderung der Rückkehr des wissenschaftlichen Spitzennachwuchses aus dem Ausland) Bilim ve Araştırma Bakanlığı Araştırma Ödülü tarafından finanse edildi.

Bu protokol parçaları Daza ve ark değiştirilmiş, 7, 2007. 1. Hazırlıklar <ol><li> Bir gün önceden hazırlanmış olabilir <ol><li> : 1X Krebs tampon hazırlayın (1.5 L) 126 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 1.2 mM NaH 2 PO 4: H 2 O, 1.2 mM MgCl 2, 2.5 mM CaCl 2, 11 mM glikoz, 25 mM NaHCO 3, pH 7.4 &#39;e ayarlayın. Sterilize Filtresi (0.22 mikron gözenek boyutu) ve 4 mağaza ° C </li><l...

<ol>
	<li>Noctor, S. C., Martinez-Cerdeno, V., Ivic, L., Kriegstein, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+neurons+arise+in+symmetric+and+asymmetric+division+zones+and+migrate+through+specific+phases.">Cortical neurons arise in symmetric and asymmetric division zones and migrate through specific phases.</a> Nat. Neurosci. 7 (2), 136-136 (2004).</li><li>Martini, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biased+selection+of+leading+process+branches+mediates+chemotaxis+during+tangential+neuronal+migration.">Biased selection of leading process branches mediates chemotaxis during tangential neuronal migration.</a> Development. 136 (1), 41-41 (2009).</li><li>Marin, O., Valiente, M., Ge, X., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guiding+neuronal+cell+migrations.">Guiding neuronal cell migrations.</a> Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2 (2), a001834-a001834 (2010).</li><li>Ayala, R., Shu, T., Tsai, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trekking+across+the+brain:+the+journey+of+neuronal+migration.">Trekking across the brain: the journey of neuronal migration.</a> Cell. 128 (1), 29-29 (2007).</li><li>Smidt, M. P., Burbach, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+to+make+a+mesodiencephalic+dopaminergic+neuron.">How to make a mesodiencephalic dopaminergic neuron.</a> Nat. Rev. Neurosci. 8 (1), 21-21 (2007).</li><li>Legue, E., Joyner, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+fate+mapping+using+site-specific+recombinases.">Genetic fate mapping using site-specific recombinases.</a> Methods. Enzymol. 477, 153-153 (2010).</li><li>Daza, R. A., Englund, C., Hevner, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organotypic+slice+culture+of+embryonic+brain+tissue.">Organotypic slice culture of embryonic brain tissue.</a> CSH Protoc. , (2007).</li><li>Harfe, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+an+expansion-based+temporal+Shh+gradient+in+specifying+vertebrate+digit+identities.">Evidence for an expansion-based temporal Shh gradient in specifying vertebrate digit identities.</a> Cell. 118 (4), 517-517 (2004).</li><li>Srinivas, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cre+reporter+strains+produced+by+targeted+insertion+of+EYFP+and+ECFP+into+the+ROSA26+locus.">Cre reporter strains produced by targeted insertion of EYFP and ECFP into the ROSA26 locus.</a> BMC Dev. Biol. 1, 4-4 (2001).</li><li>Joksimovic, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatiotemporally+separable+Shh+domains+in+the+midbrain+define+distinct+dopaminergic+progenitor+pools.">Spatiotemporally separable Shh domains in the midbrain define distinct dopaminergic progenitor pools.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 106 (45), 19185-19185 (2009).</li><li>Blaess, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temporal-spatial+changes+in+Sonic+Hedgehog+expression+and+signaling+reveal+different+potentials+of+ventral+mesencephalic+progenitors+to+populate+distinct+ventral+midbrain+nuclei.">Temporal-spatial changes in Sonic Hedgehog expression and signaling reveal different potentials of ventral mesencephalic progenitors to populate distinct ventral midbrain nuclei.</a> Neural. Dev. 6 (1), 29-29 (2011).</li><li>Hippenmeyer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+developmental+switch+in+the+response+of+DRG+neurons+to+ETS+transcription+factor+signaling.">A developmental switch in the response of DRG neurons to ETS transcription factor signaling.</a> PLoS Biol. 3 (5), e159-e159 (2005).</li></ol>

Burada sunulan Organotipik dilim kültür yöntemi embriyonik ventral orta beyindeki dopaminerjik nöronlar ve onların göç ve projeksiyon yolları geliştirmek in vitro analizi kısa vadeli bir sistem sağlar. Biz ventral orta beyin dopaminerjik nöronların normal gelişimini sağlar dilimler elde etmek için özenle dikkat edilmelidir protokol kritik adımlar bir dizi olduğu bulundu. En kritik adım diseksiyonu embriyonik beyin, hızlı ve hassas olmak zorundadır. Yetişkin beyin dilimleri nesil aksine, ...

Özel reaktifler ve ekipman Tablo <table border="1"><tr><th> Reaktifi Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> DMEM </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D6429 </td><td></td></tr><tr><td> Glikoz 30% </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G7528-250 </td><td></td></tr><tr><td> At Serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 26050-088 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM (4,5 g / L GLC, L-Gln, Na Pyr, NaHCO3) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> D6429-500 </td><td></td></tr><tr><td> 100x Penisilin / Streptomisin </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P4333-20 </td><td></td></tr><tr><td> L-askorbik asit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A4403 </td><td> -20 ° C&#39;de 200mm stok ve depo hazırlamak </td></tr><tr><td> Ultrapure LMP agaroz </td><td> Invitrogen </td><td> 15517-022 </td><td></td></tr><tr><td> Millicel ekler </td><td> Millipore </td><td> PICMORG50 </td><td></td></tr><tr><td> düşük μ-çanak 35 mm, </td><td> Ibidi </td><td> 80136 </td><td></td></tr><tr><td> Vibratome </td><td> Microm </td><td> HM 650V </td><td></td></tr><tr><td> Jilet </td><td> Plano GmbH </td><td> 121-6 </td><td></td></tr><tr><td> Histoacryl tutkal </td><td> BRAU9381104 </td><td> Braun Aesculap </td><td></td></tr><tr><td> Delikli Kaşık Dia çapı 15 mm </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 10370 -18 </td><td></td></tr><tr><td> Forseps 5 Dumoxel </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> 11252 - 30 </td><td></td></tr></table> Immunostainings için kullanılan Antikorlar: <table border="1"><tr><td&gt; antikor Adı </td><td> Şirket </td><td > Katalog numarası </td><td> Yorumlar (isteğe bağlı) </td></tr><tr><td> Tavşan anti-tirozin hidroksilaz </td><td> Millipore </td><td> AB152 </td><td> Seyreltme 1:500 </td></tr><tr><td> Fare anti-tirozin hidroksilaz </td><td> Millipore </td><td> MAB318 </td><td> Seyreltme 1:500 </td></tr><tr><td> Fare, anti-BrdU </td><td> BD Pharmingen </td><td> 555627 </td><td> Seyreltme 1:200 </td></tr><tr><td> Tavşan anti-cleaved kaspaz 3 </td><td> Hücre Sinyal Teknolojisi </td><td> 9661 </td><td> Seyreltme 1:200 </td></tr><tr><td> Eşek anti-tavşan IgG-Alexa 488 </td><td> Invitrogen </td><td> A21206 </td><td> Seyreltme 1:500 </td></tr><tr><td> Eşek anti-fare IgG-Cy3 </td><td> Jackson ImmunoResearch </td><td> 715-165-150 </td><td> Seyreltme 1:200 </td></tr></table>

organotypic slice cultures of embryonic ventral midbrain: a system to study dopaminergic neuronal development in vitro

Fare, moleküler ve genetik veri bolluğu nedeniyle memeli beyin gelişimini incelemek için mükemmel bir model organizmadır. Ancak, fare embriyo ulaşılmaz ve opak gelişmekte olan fare beyin kolay manipülasyon ve in vivo görüntüleme için uygun değildir. Bu nedenle embriyonik beyinleri Organotipik kesit kültürleri, in vitro fare beyin gelişimini incelemek için yaygın kullanılır. Ex-vivo gen ekspresyonu manipülasyon ya da transgenik farelerin değişikliğine izin verir, böylece nöronal veya glial hücrelerin alt popülasyonlar floresan proteinleri ile etiketlenmiş. Etiketli hücrelerinin davranış time-lapse görüntüleme kullanarak görülebilir. Time-lapse görüntüleme geç embriyonik aşamalarında 1-2 serebral korteks gelişiminin altında yatan hücre davranışları çalışmak için özellikle çok başarılı olmuştur. Embriyonik Organotipik dilim kültür sistemleri önbeyin dışında beyin bölgelerinde daha az iyi established. Bu nedenle, nöronal hücre göçü anlatan time-lapse görüntüleme verileri zenginlik önbeyin 3,4 ile sınırlı. Hala dorsal beyin keşfedilen ilkeler ventral beyin alanları için geçerli olup olmadığı bilinmemektedir. Nöronlar ventral beyin nöron kümeleri yerine katmanlar halinde organize edilen ve genellikle karmaşık göçmen yörüngeleri son konuma geçmesi gerekiyor. Ventral orta beynin ventral beyin gelişimi için sadece iyi bir model sistem değildir, aynı zamanda bu tür hastalık süreçlerinde ilgili dopaminerjik nöronlar gibi nöron popülasyonları içerir. Dopaminerjik nöronların fonksiyonu ve dejenerasyon, yetişkin ve yaşlanmanın beyin çok detaylı olarak incelenmiştir olsa da, kendi farklılaşmasını ve göç faz 5 sırasında bu nöronların davranışları hakkında çok az bilinmektedir. Biz burada embriyonik gün (E) 12.5 fare ventral orta beyin dilim kültürlerin üretimi açıklar. Bu dilim kültures potansiyel olarak, in vitro olarak birkaç gün içinde dopaminerjik nöron gelişimini izlemek için uygun . Biz bu embriyonik gelişimin erken safhalarında, beyin dilimleri üreten kritik adımları vurgulamak ve in vitro dopaminerjik nöronların normal gelişimi sağlamak için gerekli koşulları tartışmak . Ayrıca, mevcut sonuçları zaman atlamalı görüntüleme deneyleri. Bu deneylerde, ventral orta beyin öncüleri (dopaminerjik öncüleri de dahil olmak üzere) ve onların soyundan Cre / loxP tabanlı indüklenebilir kaderi haritalama sistemi 6 kullanarak bir mozaik şekilde etiketlenir.

Watch this Scientific Journal Video about Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro at JoVE.com

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

E12.5 fare embriyonik Ortabeyin Organotipik dilimler oluşturmak için bir yöntem açıklanmıştır. Organotipik dilim kültürleri dopaminerjik nöronlar veya diğer ventral orta beyin nöronları davranışını gözlemlemek için kullanılabilir.

Embriyonik ventral orta beyin Organotipik Dilim Kültürler: dopaminerjik Nöronal Gelişim Eğitim Bir Sistem In vitro</em

The  mouse is an excellent model organism to study mammalian brain development due  to the abundance of molecular and genetic data. However, the ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Organotypic Slice Cultures of Embryonic Ventral Midbrain: A System to Study Dopaminergic Neuronal Development in vitro

The Organotypic Hippocampal Slice Culture Model for Examining Neuronal Injury

Nöronal Sakatlık incelenmesi için Organotipik Hipokampal Dilim Kültür Modeli

Organotypic hippocampal slice culture is an in vitro method to examine mechanisms of neuronal injury in which the basic architecture and composition of ...

Nörobilim

Organotypic Hippocampal Slice Cultures

Organotipik Hipokampal Dilim Kültürler

The hippocampus, a component of the limbic system, plays important roles in long-term memory and spatial navigation 1. Hippocampal neurons can modify the ...

Multi-electrode Array Recordings of Neuronal Avalanches in Organotypic Cultures

Organotipik Kültürleri nöronal Çığ Çok elektrot Dizi Kayıtlar

The cortex is spontaneously active, even in the absence of any particular input or motor output.  During development, this activity is important for the ...

The Analysis of Purkinje Cell Dendritic Morphology in Organotypic Slice Cultures

Organotipik Dilim Kültürleri Purkinje Hücre Dendritik Morfoloji Analizi

Purkinje cells are an attractive model system for studying dendritic development, because they have an impressive dendritic tree which is strictly ...

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

In ovo Electroporation in Chick Midbrain for Studying Gene Function in Dopaminergic Neuron Development

Dopaminerjik Nöron Geliştirme Gen Fonksiyonunun Çalışılması için Chick orta beyin içinde ovo Elektroporasyon yılında

Dopaminergic neurons located in the ventral midbrain control movement, emotional behavior, and reward mechanisms1-3. The dysfunction of ventral midbrain ...

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

In ovo Expression of MicroRNA in Ventral Chick Midbrain

Ventral Chick orta beyin içinde MikroRNA ovo İfade

Non-coding RNAs are additional players in regulating gene expression. Targeted in ovo electroporation of specific areas provides a unique tool for spatial ...

Organotypic Slice Cultures to Study Oligodendrocyte Dynamics and Myelination

Organotipik Dilim Kültürler Oligodendrosit Dinamikler ve miyelinasyonun incelemek için

NG2 expressing cells (polydendrocytes, oligodendrocyte precursor cells) are the fourth major glial cell population in the central nervous system. During ...

The Analysis of Neurovascular Remodeling in Entorhino-hippocampal Organotypic Slice Cultures

Içinde Neurovascular Yaptırma Analizi Entorhino-hipokampal Organotipik Dilim Kültürler

Ischemic brain injury is among the most common and devastating conditions compromising proper brain function and often leads to persisting functional ...

Interfacing 3D Engineered Neuronal Cultures to Micro-Electrode Arrays: An Innovative In Vitro Experimental Model

Interfacing 3D Engineered Neuronal Cultures to Micro-Electrode Arrays: An Innovative In Vitro Experimental Model

Mikro Elektrot Diziler 3D Engineered Nöronal Kültürler Arayüz: Yenilikçi<em&gt; İn Vitro</em&gt; Deneysel Model

Currently, large-scale networks derived from dissociated neurons growing and developing in vitro on extracellular micro-transducer devices are the ...

Reliable Identification of Living Dopaminergic Neurons in Midbrain Cultures Using RNA Sequencing and TH-promoter-driven eGFP Expression

RNA sıralaması ve TH-organizatörü odaklı eGFP İfade Kullanımı orta beyin Kültürlerde Yaşayan dopaminerjik nöronlar güvenilir Kimlik

In Parkinson&#39;s Disease (PD) there is widespread neuronal loss throughout the brain with pronounced degeneration of dopaminergic neurons in the SNc, ...