Name: following cell-fate in e. coli after infection by phage lambda
Uploaded: 2011-10-14T13:00:00
Duration: 6 min 10 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda at JoVE.com

We zijn dankbaar voor Michael Feiss en Jean Sippy voor de begeleiding op de faag creatie en zuivering. Wij danken Michael Elowitz voor het verstrekken van de cel herkenning software, Schnitzcell. Werk in de Golding lab wordt ondersteund door subsidies van de National Institutes of Health (R01GM082837), de National Science Foundation (082.265, PFC: Centrum voor de fysica van levende cellen), de Welch Foundation (Grant Q-1759) en Human Frontier Science Programma (RGY 70/2008).

<ol>
	<li>Oppenheim, A. B., Kobiler, O., Stavans, J., Court, D. L., Adhya, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Switches+in+bacteriophage+lambda+development.">Switches in bacteriophage lambda development.</a> Annu. Rev. Genet. 39, 409-429 (2005).</li><li>Ptashne, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A genetic switch : phage lambda revisited. , (2004).</li><li>Hendrix, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Lambda II. , (1983).</li><li>Hershey, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Bacteriophage lambda. , (1971).</li><li>Zeng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Decision+making+at+a+subcellular+level+determines+the+outcome+of+bacteriophage+infection.">Decision making at a subcellular level determines the outcome of bacteriophage infection.</a> Cell. 141, 682-691 (2010).</li><li>Edgar, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacteriophage+infection+is+targeted+to+cellular+poles.">Bacteriophage infection is targeted to cellular poles.</a> Mol. Microbiol. , (2008).</li><li>Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Current protocols in molecular biology. , (1994).</li><li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular cloning : a laboratory manual. , (2001).</li><li>Fasman, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Practical handbook of biochemistry and molecular biology. , (1989).</li><li>Kaiser, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+internal+structure+of+bacteriophage+lambda.">On the internal structure of bacteriophage lambda.</a> J. Gen. Physiol. 49, 171-178 (1966).</li><li>Kobiler, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+kinetic+analysis+of+the+bacteriophage+lambda+genetic+network.">Quantitative kinetic analysis of the bacteriophage lambda genetic network.</a> Proc Natl Acad Sci. 102, 4470-4475 (2005).</li><li>Shaner, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+monomeric+red,+orange+and+yellow+fluorescent+proteins+derived+from+Discosoma+sp.+red+fluorescent+protein.">Improved monomeric red, orange and yellow fluorescent proteins derived from Discosoma sp. red fluorescent protein.</a> Nat. Biotechnol. 22, 1567-1572 (2004).</li><li>Zeng, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Personal communication with M. Feiss. , .</li><li>Schwartz, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adsorption+of+coliphage+lambda+to+its+host:+effect+of+variations+in+the+surface+density+of+receptor+and+in+phage-receptor+affinity.">The adsorption of coliphage lambda to its host: effect of variations in the surface density of receptor and in phage-receptor affinity.</a> J. Mol. Biol. 103, 521-536 (1976).</li></ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

Bacteriestammen, plasmiden en faag: Strain LE392 is supF. Werd gekozen om de SAM7 mutatie onderdrukken in het faag genoom (zie tabel 1 voor details). Aldus zullen geïnduceerde lysogenen uiteindelijk lyseren en laat faagdeeltjes, evenals geïnfecteerde cellen die gekozen lytische route. Lysogene cellen worden gekweekt bij 30 ° C door de aanwezigheid van het temperatuurgevoelige cI 857 allel in het faaggenoom. Na hitte-geïnduceerde worden GPD-EYFP en wildtype GPD co-expressie uit het genoom van λ LZ1 en het plasmide pPlate * D respectievelijk. Daardoor het capside van het nieuwe faag λ LZ2 bevat een mengsel van GPD-EYFP en gpd eiwitten. Dit mozaïek faag is structureel stabiel en voldoende fluorescerende om detectie van individuele fagen 5 mogelijk te maken. pP RE - mCherry is een reporter plasmide gebruikt om de keuze van de lysogene pathwa detectereny. De promotor P RE wordt geactiveerd door CII tijdens de oprichting van lysogeny 1,11. pP RE - mCherry 5 werd afgeleid van PE-GFP 11 door het vervangen van GFP met mCherry 12. Voor meer details zie onze eerdere werk 5. Groei Conditie Parameters: Tijdens lysogeen inductie (afdeling 1), milde schudden bij 180 rpm geeft een goed virus opbrengst 13. Gebruik van glucose in het groeimedium worden vermeden glucosemetabolisme genereerd zure metabolieten en volwassen lambda deeltjes niet stabiel bij zure pH 13. De toevoeging van MgSO4 is gericht op het stabiliseren van de faag capside 3. Voor fagen die wild type Ci (in plaats van cI 857), kan het lysogeen worden geïnduceerd met behulp van de DNA-beschadigende middel mitomycine C 3. In stap 1,3, de incubatie bij 37 ° C normaliter niet langer dan 90 minuten. Het is USEF<html> ul de celdichtheid controleren door OD600 elke 30 min. Voor een goede lysaat OD 600 daalt tot ongeveer 0,2 of minder, en de resterende OD 600 is een gevolg van celresten. Incuberen te lang kan leiden tot een lagere opbrengst faag aangezien de nieuwe faag kan beginnen hun DNA te injecteren in celresten. Als u een zichtbare faag band (minimaal 1 x 10 11 faagdeeltjes) te verkrijgen in de stappen 2,11 en 2,13, groeien ten minste 500 ml cultuur in stap 1.2. De toevoeging van 0,2% maltose in het groeimedium in stappen 5.1 en 5.2 is gericht op het induceren van expressie van LamB, de receptor voor faag lambda adsorptie 3,14. De 1000-voudige verdunning in plaats van 100-voudig in stap 5.2 is gericht op het verminderen van de mCherry achtergrondniveau van de reporter plasmide pP RE - mCherry. In stap 5.5 voor faag DNA injectie triggering, 35 ° C wordt gekozen om inductie van de temperatuurgevoelige cl857 allel voorkomen. Phage Zuivering: jove_content &quot;&gt; De faag zuiveringsstappen (Stappen 2.1 tot 2.11) kan worden vervangen door andere zuivering protocollen 5, maar de uiteindelijke ultracentrifugatie door CsCl gradiënt evenwicht (stappen 2.12 en 2.13) onvermijdelijk. Swinging bucket rotors nodig in stappen 2.10 en 2.12 tot zorgen voor scherpe zichtbaar faag bands. Het verkrijgen van een zuivere faag voorraad kan gemakkelijk tot een week duren, dus het is noodzakelijk om de faag titer controleren langs de manier om ervoor te zorgen dat er niets mis gaat tijdens de tussenliggende stappen. Faag Handling: Tijdens alle zuivering procedures van afdeling 2, is het essentieel om te behandelen faag voorzichtig lysaat om te voorkomen dat afschuiven faag staarten uit faag hoofden. Tijdens cel infectie deel 5 (bijvoorbeeld stappen 5.5 tot 5.7), is ook cruciaal voor het scheren van faagdeeltjes van de geïnfecteerde cel te voorkomen. Merk op dat als de faag wordt geschoren van de geïnfecteerde cel na injecteren zijn DNA, is het resultaat een &quot;donker&quot; infectie, dat wil zeggen de inFection uitkomst zal worden waargenomen in experiment, maar het infecterende fagen niet. Om dergelijke problemen te minimaliseren, gebruiken we een breed pipetpunt wanneer het hanteren fagen of de faag / cel mengsel. DAPI Testen: Kleuren van de faag voorraad met DAPI (hoofdstuk 4) is een snelle en efficiënte methode om de zuiverheid van de faag voorraad te controleren. Het kan ook worden gebruikt voor het testen van mogelijke afbraak bestaande faagvoorraad tijd. Voor een zuivere beelden moet de co-lokalisatie van YFP en DAPI signalen onder de fluorescentiemicroscoop dicht bij 100%. We merken op dat kenmerkend minder dan 1% van de YFP spots niet DAPI (capsiden die zonder het virale genoom), wat aangeeft dat deze deeltjes niet succesvol verpakken van het virale DNA of al hun DNA geïnjecteerd elders bevatten. Minder dan 1% van de DAPI spots bevatten YFP (uit niet-fluorescerende fagen). Indien dit niet het geval is, stappen 2,12 tot 2,14 moeten worden herhaald in oestellen opnieuw zuiveren. Met betrekking tot imaging parameters, de microscoop setup in Stap 4.3 is niet zo belangrijk als in deel 5 omdat geen langdurige live-cell imaging is hier vereist. Maar door dezelfde microscopie instellingen als in punt 5 is handig als men het ijken van de fluorescentie-intensiteit van een faagdeeltje. Als de PBS-agarose plaat is niet erg schoon of teveel DAPI kleurstof wordt gebruikt, kunnen sommige overeenkomen met DAPI spots faag DNA zijn omringd door een &quot;halo&quot;. Indien te weinig DAPI kleurstof wordt gebruikt, kan het signaal van het kanaal DAPI zeer zwak. Microscoopsysteem: Voor de beeldvorming in hoofdstuk 6, gebruiken we een commercieel omgekeerde epifluorescentiemicroscoop (Eclipse TE2000-E, Nikon) met een 100x objectief (Plan Fluo, numerieke apertuur 1.40, olie-immersie) en standaard filtersets (Nikon). De fluorescentie lichtbron is een Booglamp met controle van de lichtintensiteit. De volgende functies zijn computer gestuurde: x, y en z position, helderveld en fluorescentie luiken, en fluorescentie filter keuze. Een auto-focus functie is vereist. Anders kan de focus gemakkelijk weg te drijven tijdens de time-lapse filmpje (normaal 4 uur lang). De mogelijkheid om meerdere (x, y) posities te verwerven op elk tijdstip is nuttig omdat het laat toe om meerdere infecties gebeurtenissen in parallel. We meestal verwerven 8 stadium posities in elke film, na maximaal 100 infectie gebeurtenissen. De camera die we gebruiken is een gekoelde 512x512 CCD met 16x16 micrometer pixel camera met een dynamisch bereik van 16 bits (Cascade512, Photometrics). Verwerving uitgevoerd met Metamorph software (Molecular Devices). De microscoop moet worden geplaatst in een temperatuur-geregelde kamer, als alternatief, de microscooptafel worden omringd door een temperatuur-geregelde kamer. Image Acquisition: Voor live-cell imaging, is het essentieel om te voorkomen dat onnodige blootstelling van het monster, wat kan leiden tot het bleken en phototoxicity. Daarom is het best eerst karakteriseren systeem een ​​optimale belichting waardoor voor fluorescentiedetectie zonder dat leidt tot overmatige bleken of remmen van celgroei vinden. Om een ​​goede fluorescentie beeld te verkrijgen, spelen met de spannende lichtintensiteit, belichtingstijd en de camera te krijgen. In stappen 6.2-6.3, wordt de 10 min rasterinterval gekozen met het oog op het minimaliseren van blootstelling aan licht. In elk frame wordt slechts een in-focus beeld nodig fasecontrast (voor celherkenning) en fluorescent kanalen (voor de bepaling lot van de cel). In het eerste tijdstip, echter, multiple z-positie beelden via de YFP kanaal nodig om alle infecteren fagen op het celoppervlak te vangen. De YFP belichtingstijd in het eerste frame kan ook hoger moeten zijn dan die wordt gebruikt voor de time-lapse filmpje in de latere termijnen. Beeldanalyse: Heel voorzichtig tellen faagdeeltjes in het celoppervlak in stap 7.1. Alshierboven is opgemerkt, nemen we een reeks van z-stacks door middel van YFP kanaal in stap 6.2. Dit kan echter nog steeds laat sommige tl-faagdeeltjes out-of-focus, die het tellen uitdagingen. De cel lengte in de eerste tijd wordt gemeten met behulp van de Metamorph software. De cel lengte kan ook worden gemeten door ImageJ of andere software. Bovendien kan een geautomatiseerd huis gebouwd Matlab-programma zeer nuttig zijn bij het verkrijgen van informatie, zoals fluorescentie verandering in de tijd langs cellijnen.

<table border="1"><tbody><tr><td> Naam van het reagens </td><td> Vennootschap </td><td> Catalogusnummer </td></tr><tr><td> Chloroform </td><td> Fisher Scientific </td><td> C298-500 </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> Fisher Scientific </td><td> S271-3 </td></tr><tr><td> DNase I </td><td> Sigma </td><td> D4527-10KU </td></tr><tr><td> RNase </td><td> Sigma </td><td> R4642-10MG </td></tr><tr><td> PEG8000 </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP233-1 </td></tr><tr><td> SM buffer </td><td> Teknova </td><td> S0249 </td></tr><tr><td> NZYM </td><td> Teknova </td><td> N2062 </td></tr><tr><td> CsCl </td><td> Sigma </td><td> C3011-250G </td></tr><tr><td> Injectiespuit </td><td> Becton Dickinson </td><td> 309585 </td></tr><tr><td> Naald </td><td> Becton Dickinson </td><td> 305176 </td></tr><tr><td> Dialyse cassette </td><td> Thermo Scientific </td><td> 66333 </td></tr><tr><td> Microscoopglaasje </td><td> Corning </td><td> 2947-75x50 </td></tr><tr><td> Agarose </td><td> Fisher Scientific </td><td> BP160-100 </td></tr><tr><td> SW40Ti ultra-heldere buis </td><td> Beckman Coulter </td><td> 344060 </td></tr><tr><td> SW60Ti ultra-heldere buis </td><td> Beckman Coulter </td><td> 344062 </td></tr><tr><td> SW40Ti rotor </td><td> Beckman Coulter </td><td> 331302 </td></tr><tr><td> SW60Ti rotor </td><td> Beckman Coulter </td><td> 335649 </td></tr><tr><td> Refractometer </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13 tot 947 </td></tr><tr><td> Epifluorescentiemicroscoop </td><td> Nikon </td><td> Eclipse TE2000-E </td></tr></tbody></table> Tabel 2. Reagentia en apparatuur.

following cell-fate in e. coli after infection by phage lambda

Het systeem omvat bacteriofaag (faag) en lambda de bacterie E. coli heeft lang gediend als een paradigma voor cel-lot bepaling 1,2. Na de gelijktijdige infectie van de cel door een aantal fagen, wordt een van de twee routes gekozen: lytische (virulente) of lysogene (latente) 3,4. We hebben onlangs een methode ontwikkeld fluorescerend labelen individuele fagen en konden na de infectie besluit real-time bestuderen onder de microscoop op de individuele fagen en cellen 5. We beschrijven hier de volledige procedure voor de infectie experimenten beschreven in ons eerder werk 5. Dit omvat het creëren van fluorescerende fagen, infectie van de cellen onder de microscoop imaging en gegevensanalyse. De fluorescerende faag is een &quot;hybride&quot; co-expressie wild-type en YFP-fusie versies van het capside-eiwit GPD. Een ruwe faag lysaat wordt eerst verkregen door het induceren van een lysogeen van de GPD-EYFP (Enhongebalanceerd Geel Fluorescent Protein) faag, drager zijn van een plasmide dat wild type GPD. Een aantal zuiveringsstappen worden vervolgens uitgevoerd, gevolgd door DAPI-etikettering en beeldvorming onder de microscoop. Dit wordt gedaan om de uniformiteit, DNA verpakking efficiëntie fluorescentiesignaal en structurele stabiliteit van de faagvoorraad verifiëren. De initiële adsorptie van fagen aan bacteriën wordt uitgevoerd op ijs, gevolgd door een korte incubatie bij 35 ° C van virale DNA injectie 6 activeren. De faag / bacteriën mengsel wordt vervolgens verplaatst naar het oppervlak van een dunne nutriënt agar plaat, bedekt met een dekglaasje en afgebeeld onder een epifluorescentiemicroscoop. De post-infectie wordt gevolgd gedurende 4 uur, 10 minuten interval. Meerdere podium posities worden bijgehouden, zodat ~ 100 cellen infecties kunnen worden opgespoord in een enkel experiment. Op elke positie en tijdstip, worden beelden die in de fase-contrast en rood en groen fluorescerend kanalen. De fase-contrast beeld wordt later gebruikt voor geautomatiseerde cell erkenning terwijl de fluorescerende kanalen worden gebruikt om de infectie resultaat karakteriseren: productie van nieuwe fluorescerende fagen (groen) gevolgd door cellysis of expressie van lysogeny factoren (red), gevolgd door weer de celgroei en celdeling. De verworven time-lapse filmpjes worden verwerkt met behulp van een combinatie van handmatige en geautomatiseerde methoden. Data-analyse resulteert in de identificatie van infectie parameters voor elke infectie gebeurtenis (bijvoorbeeld aantal en posities van fagen infecteren) als resultaat infectie (lysis / lysogeny). Aanvullende parameters kunnen worden geëxtraheerd indien gewenst.

Watch this Scientific Journal Video about Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda at JoVE.com

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Dit artikel beschrijft de procedure voor het bereiden van een fluorescentie-gemerkte versie van bacteriofaag lambda, infectie van<em&gt; E. coli</em&gt; Bacteriën na de infectie resultaat onder de microscoop, en analyse van infectie resulteert.

Na Cell-lot in<em&gt; E. coli</em&gt; Na Infectie door Phage Lambda

The system comprising bacteriophage (phage) lambda and the bacterium E. coli has long served as a paradigm for cell-fate determination1,2. Following the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Following Cell-fate in E. coli After Infection by Phage Lambda

Monitoring Immune Cells Trafficking Fluorescent Prion Rods Hours after Intraperitoneal Infection

Monitoring immuuncellen Trafficking TL-Prion Rods uur na intraperitoneale infectie

Presence of an abnormal form a host-encoded prion protein (PrPC) that is protease resistant, pathologic and infectious characterizes prion diseases such ...

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Total Protein Extraction and 2-D Gel Electrophoresis Methods for Burkholderia Species

Totaal Eiwitextractie en 2-D gelelektroforese Werkwijzen voor<em&gt; Burkholderia</em&gt; Soorten

The investigation of  the intracellular protein levels of bacterial species is of importance to  understanding the pathogenic mechanisms of diseases ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

Schaalbare High Throughput Selectie Van faagweergegeven Synthetische Antibody Bibliotheken

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model of Neuropathogenic Escherichia coli Infection in the Neonatal Rat

Non-Invasive Model van Neuropathogenic<em&gt; Escherichia coli</em&gt; Infectie in de Neonatale Rat

Investigation of the interactions between animal host and bacterial pathogen is only meaningful if the infection model employed replicates the principal ...

Phage Phenomics: Physiological Approaches to Characterize Novel Viral Proteins

Faag phenomics: Fysiologische Approaches te karakteriseren Novel virale eiwitten

Current investigations into phage-host interactions are dependent on extrapolating knowledge from (meta)genomes. Interestingly, 60 - 95% of all phage ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Kwantificering van cytosolische vs. vacuole<em&gt; Salmonella</em&gt; In het Primair macrofagen door Differential Permeabilisatie

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Transformation of Probiotic Yeast and Their Recovery from Gastrointestinal Immune Tissues Following Oral Gavage in Mice

Transformatie van probiotische gist en hun herstel van gastro-intestinale Immune Tissues Na orale sondevoeding in Muizen

Development of recombinant oral therapy would allow for more direct targeting of the mucosal immune system and improve the ability to combat ...

Foodborne Pathogen Screening Using Magneto-fluorescent Nanosensor: Rapid Detection of E. Coli O157:H7

Foodborne Pathogen Screening Using Magneto-fluorescent Nanosensor: Rapid Detection of E. Coli O157:H7

Foodborne Pathogen Screening met behulp van Magneto-belichting fluorescerende Nanosensor: Snelle detectie van E. Coli O157:H7

Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 has been linked to both waterborne and foodborne illnesses, and remains a threat despite the food- and ...

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detection of Enterohemorrhagic Escherichia Coli Colonization in Murine Host by Non-invasive In Vivo Bioluminescence System

Detectie van de Enterohemorrhagic Escherichia Coli kolonisatie in lymfkliertest Host door niet-invasieve In Vivo bioluminescentie systeem

Enterohemorrhagic E. coli (EHEC) O157:H7, which is a foodborne pathogen that causesdiarrhea, hemorrhagic colitis (HS), and hemolytic uremic syndrome ...

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Creation of a Dense Transposon Insertion Library Using Bacterial Conjugation in Enterobacterial Strains Such As Escherichia Coli or Shigella flexneri

Oprichting van een dichte Transposon invoeging bibliotheek met behulp van bacteriële Woordherkomst en-opbouw in de Enterobacterial stammen zoals Escherichia Coli of Shigella flexneri

Transposon mutagenesis is a method that allows gene disruption via the random genomic insertion of a piece of DNA called a transposon. The protocol below ...