Name: rnai screening to identify postembryonic phenotypes in c. elegans
Uploaded: 2012-02-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans at JoVE.com

लेखकों DBL 1 सीडीएनए और एक इंजेक्शन मार्कर के लिए डॉ. क्रिस्टोफर Rongo (Waksman संस्थान, Rutgers विश्वविद्यालय, न्यू जर्सी) के उपहार के लिए डा. रिक Padgett (Waksman संस्थान, Rutgers विश्वविद्यालय, न्यू जर्सी) को धन्यवाद देना चाहूंगा. डा. बार्थ अनुदान प्रयोगशाला GFP टैग DBL-1 का निर्माण कम प्रतिलिपि संख्या एकीकरण के लिए जीन बंदूक बमबारी प्रदर्शन किया. रेने गार्सिया प्रयोगशाला texIs100 के निर्माण के दौरान तकनीकी सहायता प्रदान की है. रेने गार्सिया, Robyn Lints के के, Hongmin और किन प्रयोगशालाओं उत्पादक सलाह प्रदान की है. यह काम शुरू हुआ धन द्वारा TAMHSC सेलुलर और आण्विक चिकित्सा विभाग से वित्त पोषित किया गया था. परिसर गुंजाइश और कताई डिस्क confocal विभाग और चिकित्सा डीन के कार्यालय की TAMHSC कॉलेज द्वारा प्रदान की गई धनराशि के साथ खरीदे थे.

1. स्क्रीनिंग तनाव निर्माण स्क्रीनिंग तनाव के सावधान डिजाइन स्क्रीन की सफलता के लिए महत्वपूर्ण है और कहीं और 3 में वर्णित किया गया है. कुछ शोधकर्ताओं के लिए एक तनाव है कि एक transgene से एक दिखाई ?...

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	<li>Giacomotto, J., Segalat, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+screening+and+small+animal+models,+where+are+we.">High-throughput screening and small animal models, where are we.</a> Br. J. Pharmacol. 160, 204-216 (2010).</li><li>Lamitina, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+genomic+approaches+in+C.+elegans.">Functional genomic approaches in C. elegans.</a> Methods in Molecular Biology. 351, 127-138 (2006).</li><li>Boutros, M., Ahringer, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+art+and+design+of+genetic+screens:+RNA+interference.">The art and design of genetic screens: RNA interference.</a> Nat. Rev. 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आरएनएआई स्क्रीनिंग विधि यहाँ प्रस्तुत जीन एक सामान्य (या ट्रांसजेनिक) के postembryonic phenotype के लिए आवश्यक उत्पादों की एक संवेदनशील और तेजी से विश्लेषण के लिए सक्षम बनाता है. उदाहरण दिखाया एक प्रोटीन fluorescently टैग क?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक का नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियाँ </td></tr><tr><td> एन जी एम अग्रवाल </td><td> निमेटोड विकास माध्यम </td><td> आईपीएम वैज्ञानिक, इंक </td><td> एन जी एम अगर प्रोटोकॉल 25 के बाद तैयार किया जा सकता है </td></tr><tr><td> M9 के मध्यम </td><td> 22mm के.एच. 2 4 पीओ, 42mm ना 2 HPO 4, 86mM NaCl, 1 मिमी 4 MgSO </td><td></td><td> 26 </td></tr><tr><td> ऐगार </td><td> ईएमडी रसायन इंक </td><td> 1.01614.1000 </td><td> एन जी एम प्लेटों के लिए पानी में 2%. खुर्दबीन स्लाइड पैड के लिए पानी में 4% (शुरू में और उसके बाद पिघल माइक्रोवेव आटोक्लेव). </td></tr><tr><td> Bacto peptone </td><td> Becton डिकिंसन Difco सी.पी. है </td><td> 211,677 </td><td> 0.25% </p&gt; </tr><tr><td> IPTG </td><td> रिसर्च उत्पाद इंटरनेशनल कार्पोरेशन </td><td> I56000-5.0 </td><td> 1 मिमी अंतिम एकाग्रता </td></tr><tr><td> कार्बेनिसिलिन </td><td> रिसर्च उत्पाद इंटरनेशनल कार्पोरेशन </td><td> C46000 - 5.0 </td><td> 50 μg / मिलीलीटर काम कर मन्दन </td></tr><tr><td> पौंड रसा लेनोक्स </td><td> Becton डिकिंसन Difco सी.पी. है </td><td> 240,230 </td><td> 20 ग्राम / लीटर </td></tr><tr><td> टेट्रासाइक्लिन </td><td> सिग्मा </td><td> 268,054 </td><td> 12.5 μg / मिलीलीटर काम कर मन्दन </td></tr><tr><td> सोडियम hypochlorite </td><td> किसी भी ब्रांड </td><td> 5% घरेलू ब्लीच </td><td> ताजा ब्लीच का उपयोग करें. </td></tr><tr><td> सोडियम हीड्राकसीड </td><td> किसी भी ब्रांड </td><td> 1310-73-2 कैस </td><td> 5 एन स्टॉक </td></tr><tr><td> M9 के मध्यम </td><td> Wormlab पकाने की विधि बुक </td><td> <a href="http://130.15.90.245/wormlab_recipe_book.htm#Commonlab">http://1</a>30.15.90.245/wormlab_recipe_book.htm Commonlab # </td><td> 26 </td></tr><tr><td> levamisol </td><td> सिग्मा </td><td> 31,742 </td><td> 100 माइक्रोन 1 मिमी काम कर मन्दन </td></tr><tr><td> सोडियम azide </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> S227 </td><td> M9 के काम कमजोर पड़ने में 10 मिमी </td></tr><tr><td> 24 अच्छी तरह से थाली </td><td> जैव एक Greiner </td><td> +६६२१६० </td><td> VWR वितरक </td></tr><tr><td> खुर्दबीन स्लाइड </td><td> किसी भी ब्रांड </td><td> X 75 x 1 मिमी 25 </td><td></td></tr><tr><td> माइक्रोस्कोप कवर फिसल जाता है </td><td> किसी भी ब्रांड </td><td> 22 x 22 No.1.5 मिमी </td><td> खुर्दबीन निर्माता से सिफारिश की मोटाई का प्रयोग करें. </td></tr><tr><td> ऐसा सूक्ष्मदर्शक यंत्र जिसमें दो या दो से अधिक लैंस होते है </td><td> कार्ल Zeiss, Inc </td><td> A1m </td><td> उद्देश्यों और फिल्टर का उपयोग करने के लिए प्रयोग की जरूरतों से मेल. </td></tr><tr><td> मीडिया पंप</td><td> Manostat Varistaltic पंप </td><td> केट 72-620-000 # मॉडल </td><td> टयूबिंग और मशीन के लिए उपयुक्त सेटिंग्स का उपयोग करें </td></tr></tbody></table>

rnai screening to identify postembryonic phenotypes in c. elegans

सी एलिगेंस और कई जीनों और जीन एक रास्ते की खोज और कार्यात्मक लक्षण वर्णन के लिए एक मूल्यवान मॉडल प्रणाली साबित हो गया है. अधिक परिष्कृत उपकरण और इस प्रणाली में अध्ययन के लिए संसाधनों का अधिक सूक्ष्म phenotypes या भूमिकाओं के साथ जीन की निरंतर खोज की सुविधा कर रहे हैं. यहाँ हम हम सी. पहचान के लिए अनुकूलित एक सामान्यीकृत प्रोटोकॉल के वर्तमान 2 आरएनएआई का उपयोग ब्याज की postembryonic phenotypes साथ एलिगेंस जीन. इस प्रक्रिया को आसानी से पसंद की परख फेनोटाइप विदारक या यौगिक सूक्ष्मदर्शी पर प्रकाश या प्रतिदीप्ति प्रकाशिकी द्वारा, चाहे संशोधित किया गया है. इस स्क्रीनिंग प्रोटोकॉल के जीव के भौतिक संपत्ति और आणविक सी. उपकरण पर capitalizes एलिगेंस अनुसंधान समुदाय का उत्पादन किया गया है. एक उदाहरण के रूप में, हम एक एकीकृत transgene है कि एक आरएनएआई स्क्रीन में एक फ्लोरोसेंट उत्पाद व्यक्त के उपयोग के प्रदर्शन के लिए इस के सामान्य स्थानीयकरण के लिए आवश्यक जीन की पहचानदेर चरण लार्वा और वयस्कों में उत्पाद. सबसे पहले, हम पूरी लंबाई सीडीएनए आवेषण के साथ एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जीनोमिक आरएनएआई पुस्तकालय का इस्तेमाल किया. इस पुस्तकालय उम्मीदवार जीन उत्पाद की आरएनएआई कमी से कई उम्मीदवारों की तेजी से पहचान की सुविधा है. दूसरा, हम एक एकीकृत transgene है कि एक आरएनएआई संवेदनशील पृष्ठभूमि में हमारे हित के fluorecently टैग प्रोटीन व्यक्त उत्पन्न. तीसरा, आरएनएआई रची जानवरों को उजागर करने के द्वारा, इस स्क्रीन उत्पादों है कि एक महत्वपूर्ण भ्रूण भूमिका है कि अन्यथा ब्याज की प्रोटीन को विनियमित करने में एक भूमिका के बाद भ्रूण मुखौटा होता है जीन की पहचान करने की अनुमति देता है. अन्त में, इस स्क्रीन एक यौगिक एकल कक्ष संकल्प के लिए सुसज्जित खुर्दबीन का उपयोग करता है.

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RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

हम अवगत में प्रोटीन अभिव्यक्ति और स्थानीयकरण के postembryonic नियामकों की पहचान विधि का वर्णन<em&gt; सी. एलिगेंस</em&gt; एक जीनोमिक आरएनएआई आधारित स्क्रीन और एक एकीकृत transgene कि एक कार्यात्मक, प्रोटीन fluorescently टैग व्यक्त का उपयोग.

आरएनएआई स्क्रीनिंग में Postembryonic phenotypes पहचानें सी. एलिगेंस</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

स्थिर ट्रांसजेनिक सी. Microinjection का उपयोग एलिगेंस पीढ़ी

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

आरएनएआई स्क्रीनिंग के लिए स्तनधारी कोशिकाओं में मिशन esiRNA

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

आरएनएआई effectors के बैक्टीरियल डिलिवरी: Transkingdom आरएनएआई

RNA interference (RNAi) represents a high effective mechanism for specific inhibition of mRNA expression. Besides its potential as a powerful laboratory ...

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

उच्च throughput और प्रतिदीप्त के साथ स्क्रीनिंग biosensing सी. एलिगेंस खींच

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

मात्रात्मक और स्वचालित उच्च throughput जीनोम चौड़ा में आरएनएआई स्क्रीन के सी. एलिगेंस</em

RNA interference is a powerful method to understand gene function, especially when conducted at a whole-genome scale and in a quantitative context. In C. ...

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

निर्धारित गैसीय वातावरण बनाना पर Hypoxia के प्रभाव का अध्ययन<em&gt; सी. एलिगेंस</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

एलिगेंस Chemotaxis परख

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

Antibody Staining in C. Elegans Using "Freeze-Cracking"

एंटीबॉडी धुंधला में<em&gt; सी. एलिगेंस</em&gt; &quot;रुक क्रैकिंग&quot; का प्रयोग

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

बड़े पैमाने पर जीन पछाड़ना में<em&gt; सी. एलिगेंस</em&gt; मजबूत घाटे का समारोह phenotypes उत्पन्न करने के लिए dsRNA दूध पिलाने पुस्तकालयों का उपयोग

RNA interference by feeding worms bacteria expressing dsRNAs has been a useful tool to assess gene function in C. elegans. While this strategy works well ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Ischemia / reperfusion में के लिए एक अनॉक्सिता भुखमरी मॉडल<em&gt; सी. एलिगेंस</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...