Name: rnai screening to identify postembryonic phenotypes in c. elegans
Uploaded: 2012-02-13T13:00:00
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저자 분사 마커에 대한 dbl-1 cDNA와 닥터 크리스토퍼 Rongo (Waksman 연구소, Rutgers 대학, 뉴저지)의 선물 박사 릭 Padgett (Waksman 연구소, Rutgers 대학, 뉴저지)에 감사드립니다. 닥터 바스 그랜트의 연구실에서 GFP-태그를 dbl-1 구조의 낮은 사본 번호 통합을위한 유전자 총기 포격을 수행. 르네 가르시아 연구실 texIs100의 창출 동안 기술 지원을 제공했습니다. 르네 가르시아, 로빈의 Lints 및 Hongmin 진 실험실 생산적인 조언을 제공했습니다. 이 작품은 분자 및 세포 의학 TAMHSC학과 시동 기금에 의해 자금 지원되었다. 화합물 범위와 회전 디스크 공촛점는 부서와 딘의 의학 사무소의 TAMHSC 대학에서 제공하는 자금으로 구입했습니다.

1. 상영 스트레인 공사 심사 변형의주의 디자인 화면의 성공에 중요하고 다른 곳에서 3 설명되었습니다. 일부 연구자의 경우 transgene에서 눈에 띄는 제품을 표현하는 변형을 사용하는 것은 실험을 위해 필요합니다. 통합 transgenes을 품고 많은 변종이 CGC 또는 개별 연구자로부터 구할 수 있습니다. 유전자 변형 변형율가 화면에 필요하지만, 사용할 수없는 경우, 그것은 충...

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여기서 제시 RNAi 심사 방법은 정상적인 (또는 형질) postembryonic 표현형에 필요한 유전자 제품의 민감하고 빠른 분석을 가능하게합니다. 표시 예제 fluorescently 태그가 단백질의 subcellular 지방화에 관련된 유전자에 대한 화면입니다. 그러나,이 프로토콜은 관심사의 다른 postembryonic phenotypes에 영향을 미치는 유전자를 식별하기 위해 수정할 수 있습니다. 이 방법은 RNAi 라이브러리?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약의 이름 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> NGM 한천 </td><td> 선충류 성장 매체 </td><td> IPM 과학, INC </td><td> NGM 한천 프로토콜 25 다음 준비할 수 </td></tr><tr><td> M9 중간 </td><td> 22mM KH 2 PO 4, 42mM 나 2 HPO 4, 86mM NaCl, 1 ㎜ MgSO 4 </td><td></td><td> 26 </td></tr><tr><td> 한천 - 한천 </td><td> EMD 화학 주식 회사 </td><td> 1.01614.1000 </td><td> NGM 플레이트 물에 2 %. 현미경 슬라이드 패드를위한 물 4 % (초기 및 이후 녹기 전자 레인지 압력솥). </td></tr><tr><td> Bacto 펩톤 </td><td> Becton 디킨슨 - Difco CP </td><td> 211,677 </td><td> 0.25 % </TD&gt; </tr><tr><td> IPTG </td><td> 연구 제품 국제 주식 회사 </td><td> I56000-5.0 </td><td> 1 ㎜ 최종 농도 </td></tr><tr><td> carbenicillin </td><td> 연구 제품 국제 주식 회사 </td><td> C46000-5.0 </td><td> 50 μg / ML 작업 희석 </td></tr><tr><td> LB 국물 레녹스 </td><td> Becton 디킨슨 - Difco CP </td><td> 240,230 </td><td> 20g / 리터 </td></tr><tr><td> 테트라 사이클린 </td><td> 시그마 </td><td> 268,054 </td><td> 12.5 μg / ML 작업 희석 </td></tr><tr><td> 나트륨 차아 염소 산염 </td><td> 모든 브랜드 </td><td> 5 % 가정용 표백제 </td><td> 신선한 표백제를 사용하십시오. </td></tr><tr><td> 수산화 나트륨 </td><td> 모든 브랜드 </td><td> CAS 1310-73-2 </td><td> 5 N 주식 </td></tr><tr><td> M9 배지 </td><td> Wormlab 제조법 도서 </td><td> <a href="http://130.15.90.245/wormlab_recipe_book.htm#Commonlab">http://1</a>30.15.90.245/wormlab_recipe_book.htm # Commonlab </td><td> 26 </td></tr><tr><td> levamisol </td><td> 시그마 </td><td> 31,742 </td><td> 100 μm의 - 1 MM 근무 희석 </td></tr><tr><td> 나트륨 azide </td><td> 피셔 과학 </td><td> S227 </td><td> M9 근무 희석 10 MM </td></tr><tr><td> 24 잘 플레이트 </td><td> Greiner 바이오 원 </td><td> 662,160 </td><td> VWR 분배기 </td></tr><tr><td> 현미경 슬라이드 </td><td> 모든 브랜드 </td><td> 75 X 25 X 1mm </td><td></td></tr><tr><td> 현미경 커버 전표 </td><td> 모든 브랜드 </td><td> 22 X 22mm No.1.5 </td><td> 현미경 제조 업체에서 권장하는 두께를 사​​용하십시오. </td></tr><tr><td> 복합 현미경 </td><td> 칼 자이스 혈구 주식 회사 </td><td> A1m </td><td> 실험의 요구에 맞게 목표 및 필터를 사용하십시오. </td></tr><tr><td> 미디어 펌프</td><td> Manostat Varistaltic 펌프 </td><td> 케이트 모델 # 72-620-000 </td><td> 관 그리고 기계에 맞는 설정을 사용 </td></tr></tbody></table>

rnai screening to identify postembryonic phenotypes in c. elegans

C. elegans는 많은 유전자와 유전자 경로 1의 발견과 기능적 특성에 대한 유용한 모델 시스템 것으로 입증되었습니다. 보다 정교한 도구와이 시스템의 연구를위한 자원이 더 미묘한 phenotypes이나 역할과 유전자의 지속적인 발견을 촉진하고 있습니다. 여기에서 우리는 C를 식별 맞게 일반화된 프로토콜을 제시 RNAi 2를 사용 흥미 postembryonic phenotypes와 elegans의 유전자. 이 절차는 쉽게 여부 해부 또는 복합 현미경의 빛 또는 형광 광학에 의해 검정 선택의 표현형으로 수정됩니다. 이 심사 프로토콜은 유기체의 물리적 자산 및 분자 도구 C.에 capitalizes elegans 연구 커뮤니티하였습니다. 예를 들어, 우리는 이것의 일반적인 로컬 라이제이션에 필요한 유전자를 식별하기 위해 RNAi 화면에 형광등 제품을 표현하는 통합 transgene의 사용을 보여줍니다늦은 무대 애벌레와 어른의 제품입니다. 첫째, 우리는 전체 길이 cDNA 삽입으로 상용 게놈 RNAi 라이브러리를 사용했습니다. 이 라이브러리는 후보 유전자 산물의 RNAi 감소하여 여러 후보자의 급속한 식별을 용이하게합니다. 둘째, 우리는 RNAi를 구분 배경에 관심이 우리의 fluorecently 태그가 단백질을 표현 통합 transgene을 올렸습니다. 셋째, RNAi에 부화 동물을 노출하여,이 화면은 특별히 관심 단백질을 규제에서 사후 배아 역할을 숨길 수있는 중요한 배아 역할을 유전자 제품의 식별을 허용합니다. 마지막으로,이 화면은 단세포 결의안에 대한 갖춘 복합 현미경을 사용합니다.

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RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

우리의 단백질 표현 및 현지화의 postembryonic 규제를 식별할 수 sensitized 방법을 설명<em&gt; C. elegans</em&gt; RNAi 기반 게놈 화면과 기능, fluorescently 태그가 단백질을 표현 통합 transgene을 사용합니다.

에 Postembryonic Phenotypes을 식별하기 위해 RNAi 심사 C. elegans</em

C. elegans has proven to be a valuable model system for the discovery and functional characterization of many genes and gene pathways1. More sophisticated ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNAi Screening to Identify Postembryonic Phenotypes in C. elegans

Generation of Stable Transgenic C. elegans Using Microinjection

Microinjection을 사용하여 안정적인 트렌스​​ 제닉 C. 엘레간스의 생성

Transgenic Caenorhabditis elegans can be readily created via microinjection of a DNA plasmid solution into the gonad 1.  The plasmid DNA rearranges to ...

연구

생물학

MISSION esiRNA for RNAi Screening in Mammalian Cells

포유 동물 세포에서 RNAi 심사를위한 선교 esiRNA

RNA interference (RNAi) is a basic cellular mechanism for the control of gene expression. RNAi is induced by short double-stranded RNAs also known as ...

Bacterial Delivery of RNAi Effectors: Transkingdom RNAi

RNAi Effectors의 세균성 배송 : Transkingdom RNAi

RNA interference (RNAi) represents a high effective mechanism for specific inhibition of mRNA expression. Besides its potential as a powerful laboratory ...

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

High-throughput Screening and Biosensing with Fluorescent C. elegans Strains

형광등과 높은 처리량 검사 및 Biosensing C. 엘레간스 레인스

High-throughput screening (HTS) is a powerful approach for identifying chemical modulators of biological processes.  However, many compounds identified in ...

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

Quantitative and Automated High-throughput Genome-wide RNAi Screens in C. elegans

의 정량 및 자동화된 고속 처리량 게놈 전체의 RNAi 화면 C. elegans</em

RNA interference is a powerful method to understand gene function, especially when conducted at a whole-genome scale and in a quantitative context. In C. ...

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

에서 Hypoxia의 효과를 연구하기 위해 정의된 기체 환경 만들기<em&gt; C. elegans</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans Chemotaxis Assay

C. elegans의 주 화성 분석

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Antibody Staining in C. Elegans Using &quot;Freeze-Cracking&quot;

Antibody Staining in C. Elegans Using "Freeze-Cracking"

항체 염색법에<em&gt; C. 엘레</em&gt; &quot;동결 크래킹 사용&quot;

To stain C.  elegans with antibodies, the relatively impermeable cuticle must be  bypassed by chemical or mechanical methods.  "Freeze-cracking" is one ...

Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

대규모 유전자 넉다운에<em&gt; C. 엘레</em&gt; 강력한 기능 상실 표현형을 생성하는 dsRNA를 먹이는 라이브러리 사용

RNA interference by feeding worms bacteria expressing dsRNAs has been a useful tool to assess gene function in C. elegans. While this strategy works well ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

허혈 / 재관류에 대한 산소 결핍 - 기아 모델<em&gt; C. 엘레</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...