Name: rnai-mediated gene knockdown and in vivo diuresis assay in adult female aedes aegypti mosquitoes
Uploaded: 2012-07-14T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes at JoVE.com

著者らは、このプロトコルの彼女の批判的なコメントのためにビクトリアカーペンターに感謝します。

パートI -大人のネッタイシマカ蚊のRNAiによる遺伝子ノックダウン。実験の概要については、 図1を参照してください。 1。 dsRNAの合成<ol><li>関心とコントロールdsRNAの遺伝子に対する特異的dsRNAを合成する。注：私達は3 &#39;特異的cDNA 2の端部と5に接続されたT7プライマー配列を持つ&#39;末端（5&#39;-TAA TAC GAC TCA CTA位置して300から500塩?...

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	<li>Drake, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Aquaporin+gene+family+of+the+yellow+fever+mosquito,+Aedes+aegypti.">The Aquaporin gene family of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti.</a> PloS one. 5, e15578 (2010).</li><li>Shepard, A. R., Jacobson, N., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+quantitative+PCR+primer+location+for+short+interfering+RNA+efficacy+determination.">Importance of quantitative PCR primer location for short interfering RNA efficacy determination.</a> Analytical biochemistry. 344, 287-288 (2005).</li><li>Altschul, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gapped+BLAST+and+PSI-BLAST:+a+new+generation+of+protein+database+search+programs.">Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs.</a> Nucleic acids research. 25, 3389-3402 (1997).</li><li>Garver, L., Dimopoulos, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+for+RNAi+Assays+in+Adult+Mosquitoes+(A.+gambiae).">Protocol for RNAi Assays in Adult Mosquitoes (A. gambiae).</a> J. Vis. Exp. (5), e230 (2007).</li><li>Clements, A. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Target+of+rapamycin-dependent+activation+of+S6+kinase+is+a+central+step+in+the+transduction+of+nutritional+signals+during+egg+development+in+a+mosquito.">Target of rapamycin-dependent activation of S6 kinase is a central step in the transduction of nutritional signals during egg development in a mosquito.</a> The Journal of biological chemistry. 280, 20565-20572 (2005).</li><li>Pannabecker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physiology+of+the+Malpighian+Tubule.">Physiology of the Malpighian Tubule.</a> Annual review of entomology. 40, 493-510 (1995).</li><li>Dow, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+insights+into+Malpighian+tubule+function+from+functional+genomics.">New insights into Malpighian tubule function from functional genomics.</a> Comp Biochem Phys A. 150, S135 (2008).</li><li>Dow, J. A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insights+into+the+Malpighian+tubule+from+functional+genomics.">Insights into the Malpighian tubule from functional genomics.</a> Journal of Experimental Biology. 212, 435-445 (2009).</li><li>Lawson, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VectorBase:+a+data+resource+for+invertebrate+vector+genomics.">VectorBase: a data resource for invertebrate vector genomics.</a> Nucleic acids research. 37, 583-587 (2009).</li><li>Beyenbach, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transport+mechanisms+of+diuresis+in+Malpighian+tubules+of+insects.">Transport mechanisms of diuresis in Malpighian tubules of insects.</a> J. Exp. 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S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+protein+produced+by+the+vitellogenic+fat+body+and+accumulated+in+mosquito+oocytes.">A novel protein produced by the vitellogenic fat body and accumulated in mosquito oocytes.</a> Development Genes and Evolution. 199, 114-121 (1990).</li></ol>

使用されるRNAiのプロトコルは、カリフォルニア州リバーサイド6,7の大学でアレキサンダーRaikhelの研究室で開発され、GarverとDimopoulos 4で公開プロトコルに似ていました。このビデオプロトコルに示すように、実験的なアプローチは、 生体内の設定での昆虫利尿に関与する遺伝子を研究するために使用することができます。昆虫の排泄器官、マルピーギ細管では、...

<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬や機器の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> MEGAscript T7ハイ·イールド·キット</td><td> Ambion社、（株） </td><td> AM1334 </td><td></td></tr><tr><td> PBS緩衝液</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> P4417 </td><td></td></tr><tr><td>プラスチックチューブ</td><td>ローカルベンダー</td><td></td><td> PVC </td></tr><tr><td> 1ミリリットルのプラスチックピペットチップ</td><td> VWR </td><td> 83007-376 </td><td>ブルーチップ</td></tr><tr><td> 1mlの注射器</td><td>ベクトン·ディッキンソンアンドカンパニー</td><td> 309602 </td><td></td></tr><tr><td>はさみ</td><td>ローカルベンダー</td><td></td><td></td></tr><tr><td>金属針</td><td>ノースカロライナ州バイオ</td><td> 654307 </TD&gt; <td>サイズ5 </td></tr><tr><td>パッドを飛ぶ</td><td>ジェネシー科学</td><td> 789060 </td><td></td></tr><tr><td>バッテリ駆動アスピレーターW /コレクションバイアル</td><td> UPMAラボ</td><td> IPMM 2000 </td><td></td></tr><tr><td>ファインチップ鉗子</td><td>世界の精密機器</td><td> 14095 </td><td></td></tr><tr><td>ガラスキャピラリー針</td><td>世界の精密機器</td><td> 1B200-6 </td><td></td></tr><tr><td>ステレオ解剖顕微鏡</td><td>ライカマイクロシステムズ</td><td> S6D </td><td></td></tr><tr><td>分析精度のバランス</td><td>メトラー·トレド</td><td> AB54S </td><td></td></tr><tr><td>スクロース</td><td> Sigma-Aldrich社</td><td> 84097 </td><td></td></tr><tr><td> 1パイントは並んで段ボールカップをワックス</td><td>ローカルベンダー</td><td></td><td>製造スープカップ</td></tr><tr><td>メッシュネット</td><td>ローカルベンダー</td><td></td><td>プラスチック製のフライガーゼ</td></tr></tbody></table>

rnai-mediated gene knockdown and in vivo diuresis assay in adult female aedes aegypti mosquitoes

このビデオプロトコルは、昆虫の特定の遺伝子をノックダウンし、排泄率を測定するための新規バイオアッセイを行うための効果的なテクニックを示しています。このメソッドは、昆虫の利尿のプロセスのより良い理解を得るために使用し、単一血粉内の液体を大量に取ることができます。吸血節足動物における利尿の研究に特に有用であることができます。 in vivoで利尿アッセイと組み合わせることは、このRNAiによる遺伝子ノックダウンは、 ネッタイシマカ蚊利尿1のアクアポリン遺伝子のRNAiによるノックダウンの効果を研究するためにハンセンラボによって開発されました。 プロトコルは、2つの部分のセットアップです。最初のデモでは、単純な蚊噴射装置を構築する方法とRNAiによる遺伝子ノックダウンのために蚊の胸部にdsRNAを準備して注入する方法を示しています。第二デモを決定する方法を示しています。in vivoでのバイオアッセイで使用して蚊の排泄率。

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RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

このプロトコルでは、とRNAiによる遺伝子サイレンシングを組み合わせる<emin vivoでの&gt;</em目的の遺伝子の効果のノックダウンを研究する&gt;利尿アッセイは蚊体液の排泄をしています。

RNAiによる遺伝子ノックダウンと<emインビボで&gt;</em大人の女性の&gt;利尿アッセイ<em&gt;ネッタイシマカ</em&gt;蚊

This video protocol demonstrates an effective technique to knockdown a particular gene in an insect and conduct a novel bioassay to measure excretion ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNAi-mediated Gene Knockdown and In Vivo Diuresis Assay in Adult Female Aedes aegypti Mosquitoes

Injection of dsRNA into Female A. aegypti Mosquitos

女性A.ネッタイシマカのモスキートへのdsRNAの注射

Reverse genetic approaches have proven extremely useful for determining  which genes underly resistance to vector pathogens in mosquitoes.  This video ...

Microinjection of A. aegypti Embryos to Obtain Transgenic Mosquitoes

トランスジェニック蚊を取得するA.ネッタイシマカの胚のマイクロインジェクション

In this video, Nijole Jasinskiene demonstrates the methodology employed to generate transgenic Aedes aegypti mosquitoes, which are vectors for dengue ...

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes (A. aegypti) and Infection Phenotype Determination

Protocol for Dengue Infections in Mosquitoes A. aegypti and Infection Phenotype Determination

デング熱蚊の感染症（A.ネッタイシマカ）と感染症の表現型決定のためのプロトコル

The purpose of this procedure is to infect the Aedes mosquito with dengue virus in a laboratory condition and examine the infection level and dynamic of ...

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AEから中腸と唾液腺の解剖。ネッタイシマカ蚊

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Although it is increasingly affordable for emerging model organisms to obtain completely sequenced genomes, further in-depth gene function and expression ...

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In Vivo SiRNA Transfection and Gene Knockdown in Spinal Cord via Rapid Noninvasive Lumbar Intrathecal Injections in Mice

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Fat Body Organ Culture System in Aedes Aegypti, a Vector of Zika Virus

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Improved Fecundity and Fertility Assay for Aedes aegypti using 24 Well Tissue Culture Plates (EAgaL Plates)

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24ウェル組織培養プレート(EAgaLプレート)を用いた Aedes aegypti のフェクアンディティと不妊治療アッセイの改善

Mosquitoes represent a significant public health problem as vectors of various pathogens. For those studies that require an assessment of mosquito fitness ...