Name: tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones
Uploaded: 2012-01-26T12:00:00
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Nous remercions le Dr M. Yuriy Usachev pour son aide dans la normalisation initiale de la microscopie confocale / imagerie de la souris immunomarquage plantaires biopsie, et le Dr Donna L. Hammond pour son aide continue et la critique constructive à ce travail. Ce travail a été financé par des subventions du NINDS / NIH (NS069898), et une attribution de subvention Idée de développement du ministère de la Défense de la prostate Cancer Research Programme (DoD-PCRP-101096) pour DPM

1. Perfusion des animaux Toutes les procédures réalisées sur l&#39;animal dans cette étude sont approuvées par le soin des animaux et du Comité institutionnel Utilisation de l&#39;Université de l&#39;Iowa, et suivre les directives du NIH pour l&#39;utilisation d&#39;animaux dans la recherche. <ol><li> Le jour avant la perfusion, préparer 1 L de tampon phosphate (0,2 M PB en double H 2 O distillée, pH 7,4), et conserver à 4 ° C. Il sera utilisé pour les processus de p...

<ol>
	<li>Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixative+Composition+Alters+Distributions+of+Immunoreactivity+for+Glutaminase+and+Two+Markers+of+Nociceptive+Neurons,+Nav+1.8+and+TRPV1,+in+the+Rat+Dorsal+Root+Ganglion.">Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion.</a> Journal of Histochemistry &#38; Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).</li><li>Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes, J. R., Novaes, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+different+decalcifying+agents+on+EGF+and+EGFR+immunostaining.">Influence of different decalcifying agents on EGF and EGFR immunostaining.</a> Acta Histochemica. 113, 484-488 (2011).</li><li>Watson, R. E., Wiegand, S. J., Clough, R. W., Hoffman, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+cryoprotectant+to+maintain+long-term+peptide+immunoreactivity+and+tissue+morphology.">Use of cryoprotectant to maintain long-term peptide immunoreactivity and tissue morphology.</a> Peptides. 7, 155-159 (1986).</li><li>Yen, L. D., Bennett, G. J., Ribeiro-da-Silva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+sprouting+and+changes+in+nociceptive+sensory+innervation+in+the+glabrous+skin+of+the+rat+hind+paw+following+partial+peripheral+nerve+injury.">Sympathetic sprouting and changes in nociceptive sensory innervation in the glabrous skin of the rat hind paw following partial peripheral nerve injury.</a> The Journal of Comparative Neurology. 495, 679-690 (2006).</li><li>Boyette-Davis, J., Xin, W., Zhang, H., Dougherty, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraepidermal+nerve+fiber+loss+corresponds+to+the+development+of+Taxol-induced+hyperalgesia+and+can+be+prevented+by+treatment+with+minocycline.">Intraepidermal nerve fiber loss corresponds to the development of Taxol-induced hyperalgesia and can be prevented by treatment with minocycline.</a> Pain. 152, 308-313 (2011).</li><li>Bloom, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+Cancer-Induced+Bone+Remodeling,+Skeletal+Pain,+and+Sprouting+of+Sensory+Nerve+Fibers.">Breast Cancer-Induced Bone Remodeling, Skeletal Pain, and Sprouting of Sensory Nerve Fibers.</a> The Journal of Pain. 12, 698-711 (2011).</li><li>Constantin, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+Tumor+Necrosis+Factor+&#945;+(TNF&#945;)+Requires+TNF+Receptor+Type+2+to+Generate+Heat+Hyperalgesia+in+a+Mouse+Cancer+Model.">Endogenous Tumor Necrosis Factor &#945; (TNF&#945;) Requires TNF Receptor Type 2 to Generate Heat Hyperalgesia in a Mouse Cancer Model.</a> J. Neurosci. 28, 5072-5081 (2008).</li><li>Jankowski, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+Cutaneous+Nociceptors+after+Nerve+Transection+and+Regeneration:+Possible+Role+of+Target-Derived+Neurotrophic+Factor+Signaling.">Sensitization of Cutaneous Nociceptors after Nerve Transection and Regeneration: Possible Role of Target-Derived Neurotrophic Factor Signaling.</a> The Journal of Neuroscience. 29, 1636-1647 (2009).</li><li>Jimenez-Andrade, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+Sprouting+of+Adult+Nociceptors+in+Chronic+Prostate+Cancer-Induced+Bone+Pain.">Pathological Sprouting of Adult Nociceptors in Chronic Prostate Cancer-Induced Bone Pain.</a> J. Neurosci. 30, 14649-14656 (2010).</li><li>Persson, A. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium-calcium+exchanger+and+multiple+sodium+channel+isoforms+in+intra-epidermal+nerve+terminals.">Sodium-calcium exchanger and multiple sodium channel isoforms in intra-epidermal nerve terminals.</a> Molecular Pain. 6, 84-84 (2010).</li><li>Ohshima, M., Miyake, M., Takeda, M., Kamijima, M., Sakamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcal+Enterotoxin+B+Causes+Proliferation+of+Sensory+C-Fibers+and+Subsequent+Enhancement+of+Neurogenic+Inflammation+in+Rat+Skin.">Staphylococcal Enterotoxin B Causes Proliferation of Sensory C-Fibers and Subsequent Enhancement of Neurogenic Inflammation in Rat Skin.</a> Journal of Infectious Diseases. 203, 862-869 (2011).</li><li>Johnson, M. S., Ryals, J. M., Wright, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+loss+of+peptidergic+intraepidermal+nerve+fibers+in+an+STZ-induced+mouse+model+of+insensate+diabetic+neuropathy.">Early loss of peptidergic intraepidermal nerve fibers in an STZ-induced mouse model of insensate diabetic neuropathy.</a> Pain. 140, 35-47 (2008).</li></ol>

Ici, nous avons détaillé les méthodes de préparation de la peau des souris et des coupes de tissus osseux pour immunomarquage et la détection des périphériques fibres nerveuses sensitives. Les sections produite à partir de biopsies plantaires contiennent à la fois la peau glabre et poilue, ce qui signifie que le protocole peut être utilisé sur tout type de peau. Ces techniques peuvent également être employées pour colorer les autres types de cellules dans ces tissus (leucocytes, vasculaire endothélium, mu...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du produit </td><td> Tapez </td><td> Société </td><td> No de catalogue </td><td> Commentaire </td></tr><tr><td> 3mm Harris Micro-Punch </td><td> Matériel </td><td> Ted Pella </td><td> 15094 </td><td></td></tr><tr><td> Pompe à perfusion </td><td> Matériel </td><td> VWR International </td><td> 23609-170 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldéhyde </td><td> Réactif </td><td> Fisher Scientific </td><td> T353 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;acide picrique </td><td> Réactif </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 239801 </td><td></td></tr><tr><td> Composé Embedding octobre </td><td> Réactif </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cyto-Freeze aérosol cryogénique </td><td>Matériel </td><td> Société de contrôle </td><td> 3118 </td><td></td></tr><tr><td> Sérum de chèvre </td><td> Réactif </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9023 </td><td></td></tr><tr><td> Bac Incubation et couvercle pour Immunocoloration (Large) </td><td> Matériel </td><td> RPI Corp </td><td> 248270 (bac) 248 270-A (couvercle) </td><td></td></tr><tr><td> Stylo ImmEdge barrière hydrophobe </td><td> Matériel </td><td> Vector Laboratories </td><td> H-4000 </td><td></td></tr><tr><td> Brosses à cheveux de Camel (# 1 épaisseur) </td><td> Matériel </td><td> Ted Pella </td><td> 11859 </td><td></td></tr><tr><td> Pro-Long Or Milieu de montage </td><td> Réactif </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones

Détection et traitement primaire des propriétés physiques, chimiques et thermiques par des stimuli sensoriels périphériques fibres nerveuses sensorielles est la clé de la perception sensorielle chez les animaux et les humains. Ces fibres nerveuses sensitives périphériques expriment une multitude de récepteurs et de protéines des canaux ioniques qui détectent et initier des stimuli sensoriels spécifiques. Les méthodes sont disponibles pour caractériser les propriétés électriques des fibres nerveuses sensorielles périphériques innervant la peau, qui peut également être utilisé pour identifier l&#39;expression fonctionnelle des protéines des canaux ioniques spécifiques dans ces fibres. Toutefois, les méthodes électrophysiologiques similaires ne sont pas disponibles (et sont également difficiles à développer) pour la détection de l&#39;expression fonctionnelle des récepteurs et des protéines des canaux ioniques dans les fibres nerveuses sensorielles périphériques innervant les autres viscères, y compris les tissus les plus difficiles tels que les os. Par ailleurs, ces méthodes électrophysiologiques ne peut pas être utilisé pour déterminer l&#39;expression de la protéine non excitabless dans les zones périphériques des fibres nerveuses sensitives. Par conséquent, immunomarquage d&#39;échantillons de tissus périphériques / viscérale pour fivers nerveuses sensorielles fournit la meilleure façon possible afin de déterminer l&#39;expression de protéines spécifiques de l&#39;intérêt pour ces fibres nerveuses. Jusqu&#39;ici, la plupart des études d&#39;expression de protéines dans les neurones sensoriels ont utilisé immunomarquage procédures dans les ganglions sensitifs, où l&#39;information est limitée à l&#39;expression de protéines spécifiques dans le corps cellulaire de certains types ou sous-ensembles de neurones sensoriels. Nous rapportons ici les méthodes détaillées / protocoles pour la préparation d&#39;échantillons de tissus périphériques / viscérale pour l&#39;immunocoloration des périphériques fibres nerveuses sensitives. Nous détail les méthodes spécifiquement pour la préparation de la peau ou plantaire biopsie et d&#39;os (fémur) les articles de la souris pour l&#39;immunocoloration des périphériques fibres nerveuses sensitives. Ces méthodes ne sont pas seulement essentiels pour la détermination qualitative de l&#39;expression des protéines dans les neurones sensoriels périphériques, mais aussi fournir une méthode de dosage quantitatif pourdéterminer les changements dans les niveaux d&#39;expression de protéines dans des types spécifiques ou des sous-ensembles de fibres sensorielles, ainsi que pour déterminer les modifications morphologiques et / ou anatomiques dans le nombre et la densité des fibres sensorielles au cours de divers états pathologiques. De plus, ces méthodes ne sont pas confinés à la coloration des fibres nerveuses sensorielles que, mais peut aussi être utilisé pour la coloration des types de fibres nerveuses dans la peau, les os et autres tissus viscéraux.

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Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

L&#39;identification immunocytochimique de sensitive périphérique sous-types de fibres nerveuses (et de détection de l&#39;expression des protéines qui y sont) sont essentiels à la compréhension des mécanismes moléculaires sous-jacents sensations périphériques. Nous décrivons ici les méthodes de préparation d&#39;échantillons de tissus périphériques / viscérale, tels que les os de la peau et des membres, par immunomarquage spécifique des fibres nerveuses périphériques sensorielles.

Préparation des tissus et des fibres Immunocoloration souris nerveuses sensitives innervant la peau et les os du membre

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

Préparation du tissu cérébral de souris pour microscopie électronique

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Recherche

Neurosciences

Imaging Pheromone Sensing in a Mouse Vomeronasal Acute Tissue Slice Preparation

Imagerie phéromones détection dans une souris Vomeronasal tissus Préparation Trancher aiguë

Peter Karlson and Martin L&uuml;scher used the term pheromone for the first time in 19591 to describe chemicals used for intra-species communication. ...

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

Sélective traçage des fibres auditives dans le nerf vestibulo-cochléaire aviaire embryonnaire

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

An Isolated Semi-intact Preparation of the Mouse Vestibular Sensory Epithelium for Electrophysiology and High-resolution Two-photon Microscopy

Une préparation semi-intact d&#39;isolement de la souris vestibulaire épithélium sensoriel pour électrophysiologie et haute résolution microscopie à deux photons

Understanding vestibular hair cells function  under normal conditions, or how trauma, disease, and aging disrupt this  function is a vital step in the ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

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In Vivo microscopie à deux photons de terminaisons nerveuses dans la peau simples

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology

Appartement Mont imagerie de la peau de souris et son application à l&#39;analyse des follicules pileux Modélisation et sensorielle Axon Morphologie

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Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

Whole-monter imagerie de l&#39;embryon de souris projections sensorielles Axon

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Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers

Imagerie en trois dimensions et l’analyse des mitochondries dans les fibres nerveuses humaines intra-épidermiques

The goal of this protocol is to study mitochondria within intraepidermal nerve fibers. Therefore, 3D imaging and analysis techniques were developed to ...

A Method to Target and Isolate Airway-innervating Sensory Neurons in Mice

Une méthode pour cibler et Isoler Airway-innervant neurones sensoriels chez la souris

Somatosensory nerves transduce thermal, mechanical, chemical, and noxious stimuli caused by both endogenous and environmental agents. The cell bodies of ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

Préparation physiologique des cellules ciliées de l&#39;sacculus du ouaouaron (<em&gt; Rana catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...