Name: tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones
Uploaded: 2012-01-26T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones at JoVE.com

אנו מודים לד&quot;ר יורי מ Usachev על עזרתו סטנדרטיזציה הראשונית של מיקרוסקופיה confocal / הדמיה של עכבר plantar immunostaining ביופסיה; וד&quot;ר דונה ל המונד לעזרה המשיך אותה ביקורת בונה בעבודה זו. עבודה זו מומנה על ידי תרומות של NINDS / NIH (NS069898), ואת פיתוח רעיון הענקת פרס מהמחלקה תוכנית הביטחון מחקרים סרטן הערמונית (DoD-PCRP-101096) כדי DPM

1. בעלי חיים זלוף הנהלים כל חיה שבוצעה במחקר זה מאושרים על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת השתמש מאוניברסיטת איווה, ו-NIH ההנחיות לשימוש בבעלי חיים במחקר. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ביום שלפני זלוף, להכין 1 ל?...

<ol>
	<li>Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixative+Composition+Alters+Distributions+of+Immunoreactivity+for+Glutaminase+and+Two+Markers+of+Nociceptive+Neurons,+Nav+1.8+and+TRPV1,+in+the+Rat+Dorsal+Root+Ganglion.">Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion.</a> Journal of Histochemistry &#38; Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).</li><li>Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes, J. R., Novaes, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+different+decalcifying+agents+on+EGF+and+EGFR+immunostaining.">Influence of different decalcifying agents on EGF and EGFR immunostaining.</a> Acta Histochemica. 113, 484-488 (2011).</li><li>Watson, R. E., Wiegand, S. J., Clough, R. W., Hoffman, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+cryoprotectant+to+maintain+long-term+peptide+immunoreactivity+and+tissue+morphology.">Use of cryoprotectant to maintain long-term peptide immunoreactivity and tissue morphology.</a> Peptides. 7, 155-159 (1986).</li><li>Yen, L. D., Bennett, G. J., Ribeiro-da-Silva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+sprouting+and+changes+in+nociceptive+sensory+innervation+in+the+glabrous+skin+of+the+rat+hind+paw+following+partial+peripheral+nerve+injury.">Sympathetic sprouting and changes in nociceptive sensory innervation in the glabrous skin of the rat hind paw following partial peripheral nerve injury.</a> The Journal of Comparative Neurology. 495, 679-690 (2006).</li><li>Boyette-Davis, J., Xin, W., Zhang, H., Dougherty, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraepidermal+nerve+fiber+loss+corresponds+to+the+development+of+Taxol-induced+hyperalgesia+and+can+be+prevented+by+treatment+with+minocycline.">Intraepidermal nerve fiber loss corresponds to the development of Taxol-induced hyperalgesia and can be prevented by treatment with minocycline.</a> Pain. 152, 308-313 (2011).</li><li>Bloom, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+Cancer-Induced+Bone+Remodeling,+Skeletal+Pain,+and+Sprouting+of+Sensory+Nerve+Fibers.">Breast Cancer-Induced Bone Remodeling, Skeletal Pain, and Sprouting of Sensory Nerve Fibers.</a> The Journal of Pain. 12, 698-711 (2011).</li><li>Constantin, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+Tumor+Necrosis+Factor+&#945;+(TNF&#945;)+Requires+TNF+Receptor+Type+2+to+Generate+Heat+Hyperalgesia+in+a+Mouse+Cancer+Model.">Endogenous Tumor Necrosis Factor &#945; (TNF&#945;) Requires TNF Receptor Type 2 to Generate Heat Hyperalgesia in a Mouse Cancer Model.</a> J. Neurosci. 28, 5072-5081 (2008).</li><li>Jankowski, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+Cutaneous+Nociceptors+after+Nerve+Transection+and+Regeneration:+Possible+Role+of+Target-Derived+Neurotrophic+Factor+Signaling.">Sensitization of Cutaneous Nociceptors after Nerve Transection and Regeneration: Possible Role of Target-Derived Neurotrophic Factor Signaling.</a> The Journal of Neuroscience. 29, 1636-1647 (2009).</li><li>Jimenez-Andrade, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+Sprouting+of+Adult+Nociceptors+in+Chronic+Prostate+Cancer-Induced+Bone+Pain.">Pathological Sprouting of Adult Nociceptors in Chronic Prostate Cancer-Induced Bone Pain.</a> J. Neurosci. 30, 14649-14656 (2010).</li><li>Persson, A. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium-calcium+exchanger+and+multiple+sodium+channel+isoforms+in+intra-epidermal+nerve+terminals.">Sodium-calcium exchanger and multiple sodium channel isoforms in intra-epidermal nerve terminals.</a> Molecular Pain. 6, 84-84 (2010).</li><li>Ohshima, M., Miyake, M., Takeda, M., Kamijima, M., Sakamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcal+Enterotoxin+B+Causes+Proliferation+of+Sensory+C-Fibers+and+Subsequent+Enhancement+of+Neurogenic+Inflammation+in+Rat+Skin.">Staphylococcal Enterotoxin B Causes Proliferation of Sensory C-Fibers and Subsequent Enhancement of Neurogenic Inflammation in Rat Skin.</a> Journal of Infectious Diseases. 203, 862-869 (2011).</li><li>Johnson, M. S., Ryals, J. M., Wright, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+loss+of+peptidergic+intraepidermal+nerve+fibers+in+an+STZ-induced+mouse+model+of+insensate+diabetic+neuropathy.">Early loss of peptidergic intraepidermal nerve fibers in an STZ-induced mouse model of insensate diabetic neuropathy.</a> Pain. 140, 35-47 (2008).</li></ol>

כאן יש לנו את השיטות מפורט להכנת העור העכבר רקמת העצם חלקים עבור immunostaining וזיהוי של סיבי עצב היקפי חושית. הסעיפים המופק plantar ביופסיות אגרוף להכיל העור glabrous ושעיר, כלומר פרוטוקול ניתן להשתמש על כל סוג העור. טכניקות אלה יכולים גם להיות מועסק להכתים סוגי תאים אחרים ברקמות...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> חומר שם </td><td> סוג </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגי </td><td> הערה </td></tr><tr><td> האריס 3mm Micro-Punch </td><td> חומר </td><td> טד פלה </td><td> 15094 </td><td></td></tr><tr><td> זלוף משאבה </td><td> חומר </td><td> VWR הבינלאומי </td><td> 23609-170 </td><td></td></tr><tr><td> Paraformaldehyde </td><td> מגיב </td><td> פישר סיינטיפיק </td><td> T353 </td><td></td></tr><tr><td> Picric חומצה </td><td> מגיב </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 239801 </td><td></td></tr><tr><td> אוקטובר מתחם והטבעה </td><td> מגיב </td><td> רקמות-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cyto-Freeze קריוגני תרסיס ספריי </td><td>חומר </td><td> בקרת החברה </td><td> 3118 </td><td></td></tr><tr><td> עיזים סרום </td><td> מגיב </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> G9023 </td><td></td></tr><tr><td> דגירה מגש מכסה עבור Immunostaining (גדול) </td><td> חומר </td><td> RPI קורפ </td><td> 248,270 (מגש) 248270-A (מכסה) </td><td></td></tr><tr><td> ImmEdge עט מחסום הידרופובי </td><td> חומר </td><td> וקטור מעבדות </td><td> H-4000 </td><td></td></tr><tr><td> מברשות שיער של קאמל (# 1 עובי) </td><td> חומר </td><td> טד פלה </td><td> 11859 </td><td></td></tr><tr><td> Pro-Long זהב הרכבה בינונית </td><td> מגיב </td><td> Invitrogen </td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones

איתור ועיבוד ראשוני של חומר כימי, פיזי גירויים חושיים תרמי ההיקפיים על ידי סיבי עצב תחושתי היא המפתח תפיסה חושית בבעלי חיים ובבני אדם. אלה סיבי העצבים התחושתיים ההיקפיים להביע שפע של קולטנים ערוץ חלבונים יון אשר לזהות ליזום גירויים חושיים ספציפיים. שיטות זמינים כדי לאפיין את התכונות החשמליות של סיבי עצב היקפי חושי innervating את העור, אשר יכול גם להיות מנוצל כדי לזהות את הביטוי הפונקציונלי של חלבונים ספציפיים ערוץ יון בסיבים אלה. עם זאת, שיטות אלקטרו דומים אינם זמינים (והם גם קשה לפתח) לצורך זיהוי של הביטוי הפונקציונלי של קולטנים וחלבונים ערוץ יון בשנת היקפי סיבי עצב תחושתי innervating אברי בטן אחרים, כולל הרקמות המאתגרים ביותר, כגון עצם. יתר על כן, שיטות אלקטרו כזה לא יכול להיות מנוצל על מנת לקבוע את הביטוי של החלבון לא להתרגשים של הפריפריה סיבי עצב תחושתי. לכן, immunostaining של דגימות רקמה היקפי / הקרביים עבור חמישיות העצבים התחושתיים מספק את הדרך הטובה ביותר ניתן לקבוע את הביטוי של חלבונים ספציפיים של עניין אלה סיבי העצב. עד כה, רוב המחקרים ביטוי החלבון עצב סנסורי להיות מנוצל immunostaining ההליכים בגרעיני חושי, שבו מידע מוגבל הביטוי של חלבונים מסוימים בגוף התא של סוגים מסוימים או תת נוירונים חושיים. כאן אנו מדווחים שיטות מפורט / פרוטוקולים להכנת דגימות רקמה היקפי / הקרביים עבור immunostaining של סיבי עצב היקפי חושית. אנחנו במיוחד שיטות פרט להכנת העור או ביופסיה plantar אגרוף העצם (עצם הירך) סעיפים מעכברים עבור immunostaining של סיבי עצב היקפי חושית. שיטות אלה לא רק מפתח להגדרה האיכותי של ביטוי החלבון עצב סנסורי הפריפריה, אלא גם לספק שיטה assay כמותיקביעת שינויים בביטוי רמות החלבון או תת סוגים מסוימים של סיבים חושית, כמו גם לקביעת שינויים מורפולוגיים ו / או אנטומי במספר וצפיפות הסיבים החושית במהלך מצבים פתולוגיים שונים. יתר על כן, שיטות אלה אינם מוגבלים רק כתמים של סיבי עצב תחושתי, אבל יכול לשמש גם עבור צביעת כל סוגי סיבי עצב בעור, עצמות ורקמות הקרביים אחרים.

Watch this Scientific Journal Video about Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones at JoVE.com

Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

זיהוי Immunocytochemical של הפריפריה תת סיב עצב תחושתי (גילוי של ביטוי החלבון בו) הם המפתח להבנת המנגנונים המולקולריים שבבסיס תחושה היקפית. כאן אנו מתארים שיטות להכנת דגימות רקמה היקפי / הקרביים, כגון עצמות עור הגפיים, immunostaining מסוים של סיבי עצב היקפי חושית.

רקמות הכנה Immunostaining של סיבי עצב תחושתי עכבר Innervating עצמות סקין לימב

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

הכנת רקמות מוח עכבר מיקרוסקופית Immunoelectron

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

Imaging Pheromone Sensing in a Mouse Vomeronasal Acute Tissue Slice Preparation

הדמיה פרומון חישה ב תכשיר Vomeronasal עכבר רקמות חריפה Slice

Peter Karlson and Martin L&uuml;scher used the term pheromone for the first time in 19591 to describe chemicals used for intra-species communication. ...

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

איתור סלקטיבי של סיבי עצב שמיעה בVestibulocochlear העוברי העופות

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

An Isolated Semi-intact Preparation of the Mouse Vestibular Sensory Epithelium for Electrophysiology and High-resolution Two-photon Microscopy

הכנה חצי שלמות מבודדת של האפיתל החושית שיווי משקל העכבר למיקרוסקופיה שני הפוטונים אלקטרופיזיולוגיה והרזולוציה גבוהה

Understanding vestibular hair cells function  under normal conditions, or how trauma, disease, and aging disrupt this  function is a vital step in the ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

בVivo שני פוטונים מיקרוסקופית של קצות עצבים בודדים בעור

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology

הר הדמיה שטוחה של עור העכבר ויישומו לניתוח של שיער זקיק דפוסים וחושי אקסון מורפולוגיה

Skin is a highly heterogeneous tissue. Intra-dermal structures include hair follicles, arrector pili muscles, epidermal specializations (such as Merkel ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

הדמיה הר-כל תחזיות החושיות אקסון העובר העכבר

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers

הדמיה תלת-ממדית וניתוח של המיטוכונדריה בתוך סיבי עצב Intraepidermal אנושי

The goal of this protocol is to study mitochondria within intraepidermal nerve fibers. Therefore, 3D imaging and analysis techniques were developed to ...

A Method to Target and Isolate Airway-innervating Sensory Neurons in Mice

שיטה לכוון ולבודד Airway-innervating עצב סנסורי של עכברים

Somatosensory nerves transduce thermal, mechanical, chemical, and noxious stimuli caused by both endogenous and environmental agents. The cell bodies of ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

הכנה פיזיולוגית של תאי שיער מן Sacculus של הבוקסר האמריקאי (<em&gt; רנא catesbeiana</em&gt;)

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...