Name: tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones
Uploaded: 2012-01-26T12:00:00
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彼女の継続的なヘルプと、この作業で建設的な批判のために博士とドナL.ハモンド、我々は、マウス足底パンチ生検の免疫染色の共焦点顕微鏡/イメージングの初期の標準化で彼の助けのための博士ユーリーM. Usachevに感謝。この作品は、NINDS / NIH（NS069898）からの補助金、およびDPMへの防衛前立腺がんの研究プログラムの国防総省（DoD - PCRP - 101096）からのアイデアの開発グラント賞によって資金を供給された

1。動物の灌流本研究で実行されるすべての動物の手順は、アイオワ大学の動物実験使用委員会によって承認、および研究における動物の使用のためにNIHのガイドラインに従ってくださいされています。 <ol><li>灌流の前日に、4℃で1リン酸緩衝液のL（蒸留H 2 O、pH7.4の0.2 M PB）、および店舗を準備これは、血流やポスト固定のプロセスに使用されます。 </li><li> 30?...

<ol>
	<li>Hoffman, E. M., Schechter, R., Miller, K. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixative+Composition+Alters+Distributions+of+Immunoreactivity+for+Glutaminase+and+Two+Markers+of+Nociceptive+Neurons,+Nav+1.8+and+TRPV1,+in+the+Rat+Dorsal+Root+Ganglion.">Fixative Composition Alters Distributions of Immunoreactivity for Glutaminase and Two Markers of Nociceptive Neurons, Nav 1.8 and TRPV1, in the Rat Dorsal Root Ganglion.</a> Journal of Histochemistry &#38; Cytochemistry. 58, 329-344 (2010).</li><li>Neves, J. D. S., Omar, N. F., Narvaes, E. A. O., Gomes, J. R., Novaes, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+different+decalcifying+agents+on+EGF+and+EGFR+immunostaining.">Influence of different decalcifying agents on EGF and EGFR immunostaining.</a> Acta Histochemica. 113, 484-488 (2011).</li><li>Watson, R. E., Wiegand, S. J., Clough, R. W., Hoffman, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+cryoprotectant+to+maintain+long-term+peptide+immunoreactivity+and+tissue+morphology.">Use of cryoprotectant to maintain long-term peptide immunoreactivity and tissue morphology.</a> Peptides. 7, 155-159 (1986).</li><li>Yen, L. D., Bennett, G. J., Ribeiro-da-Silva, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sympathetic+sprouting+and+changes+in+nociceptive+sensory+innervation+in+the+glabrous+skin+of+the+rat+hind+paw+following+partial+peripheral+nerve+injury.">Sympathetic sprouting and changes in nociceptive sensory innervation in the glabrous skin of the rat hind paw following partial peripheral nerve injury.</a> The Journal of Comparative Neurology. 495, 679-690 (2006).</li><li>Boyette-Davis, J., Xin, W., Zhang, H., Dougherty, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intraepidermal+nerve+fiber+loss+corresponds+to+the+development+of+Taxol-induced+hyperalgesia+and+can+be+prevented+by+treatment+with+minocycline.">Intraepidermal nerve fiber loss corresponds to the development of Taxol-induced hyperalgesia and can be prevented by treatment with minocycline.</a> Pain. 152, 308-313 (2011).</li><li>Bloom, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Breast+Cancer-Induced+Bone+Remodeling,+Skeletal+Pain,+and+Sprouting+of+Sensory+Nerve+Fibers.">Breast Cancer-Induced Bone Remodeling, Skeletal Pain, and Sprouting of Sensory Nerve Fibers.</a> The Journal of Pain. 12, 698-711 (2011).</li><li>Constantin, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenous+Tumor+Necrosis+Factor+&#945;+(TNF&#945;)+Requires+TNF+Receptor+Type+2+to+Generate+Heat+Hyperalgesia+in+a+Mouse+Cancer+Model.">Endogenous Tumor Necrosis Factor &#945; (TNF&#945;) Requires TNF Receptor Type 2 to Generate Heat Hyperalgesia in a Mouse Cancer Model.</a> J. Neurosci. 28, 5072-5081 (2008).</li><li>Jankowski, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensitization+of+Cutaneous+Nociceptors+after+Nerve+Transection+and+Regeneration:+Possible+Role+of+Target-Derived+Neurotrophic+Factor+Signaling.">Sensitization of Cutaneous Nociceptors after Nerve Transection and Regeneration: Possible Role of Target-Derived Neurotrophic Factor Signaling.</a> The Journal of Neuroscience. 29, 1636-1647 (2009).</li><li>Jimenez-Andrade, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathological+Sprouting+of+Adult+Nociceptors+in+Chronic+Prostate+Cancer-Induced+Bone+Pain.">Pathological Sprouting of Adult Nociceptors in Chronic Prostate Cancer-Induced Bone Pain.</a> J. Neurosci. 30, 14649-14656 (2010).</li><li>Persson, A. -. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sodium-calcium+exchanger+and+multiple+sodium+channel+isoforms+in+intra-epidermal+nerve+terminals.">Sodium-calcium exchanger and multiple sodium channel isoforms in intra-epidermal nerve terminals.</a> Molecular Pain. 6, 84-84 (2010).</li><li>Ohshima, M., Miyake, M., Takeda, M., Kamijima, M., Sakamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Staphylococcal+Enterotoxin+B+Causes+Proliferation+of+Sensory+C-Fibers+and+Subsequent+Enhancement+of+Neurogenic+Inflammation+in+Rat+Skin.">Staphylococcal Enterotoxin B Causes Proliferation of Sensory C-Fibers and Subsequent Enhancement of Neurogenic Inflammation in Rat Skin.</a> Journal of Infectious Diseases. 203, 862-869 (2011).</li><li>Johnson, M. S., Ryals, J. M., Wright, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+loss+of+peptidergic+intraepidermal+nerve+fibers+in+an+STZ-induced+mouse+model+of+insensate+diabetic+neuropathy.">Early loss of peptidergic intraepidermal nerve fibers in an STZ-induced mouse model of insensate diabetic neuropathy.</a> Pain. 140, 35-47 (2008).</li></ol>

ここでは、末梢感覚神経線維の免疫染色と検出のためのマウスの皮膚と骨の組織切片の調製のための方法を紹介しています。足底パンチ生検から生成セクションは、両方の無毛と有毛皮膚を含む、これはプロトコルがどんな肌タイプに使用できることを意味します。これらの技術はまた、これらの組織内の他の細胞型（例えば、白血球、血管内皮、特に平滑筋）を染色するために用いること?...

<table border="1"><tbody><tr><td> 材料名 </td><td> タイプ </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 3ミリメートルハリスマイクロパンチ</td><td>材</td><td>テッドペラ</td><td> 15094 </td><td></td></tr><tr><td>注入ポンプ</td><td>材</td><td> VWRインターナショナル</td><td> 23609-170 </td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド</td><td>試薬</td><td>フィッシャーサイエンティフィック</td><td> T353 </td><td></td></tr><tr><td>ピクリン酸</td><td>試薬</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> 239801 </td><td></td></tr><tr><td> OCTの埋め込み化合物</td><td>試薬</td><td>組織- Tek社</td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> CYTO凍結低温エアゾールスプレー</td><td>材</td><td>制御カンパニー</td><td> 3118 </td><td></td></tr><tr><td>ヤギ血清</td><td>試薬</td><td>シグマアルドリッチ</td><td> G9023 </td><td></td></tr><tr><td>免疫染色のためのインキュベーショントレイと蓋（大） </td><td>材</td><td> RPI社</td><td> 248270（トレイ） 248270 -（蓋） </td><td></td></tr><tr><td> ImmEdge疎水性障壁のペン</td><td>材</td><td>ベクターラボラトリーズ</td><td> H - 4000 </td><td></td></tr><tr><td>ラクダの毛のブラシ（＃1厚さ） </td><td>材</td><td>テッドペラ</td><td> 11859 </td><td></td></tr><tr><td>メディアをマウントするプロロングゴールド</td><td>試薬</td><td>インビトロジェン</td><td> P36930 </td><td></td></tr></tbody></table>

tissue preparation and immunostaining of mouse sensory nerve fibers innervating skin and limb bones

末梢感覚神経線維によって検出し、物理的、化学的および熱的感覚刺激の主な処理は、動物とヒトの知覚に重要です。これらの末梢感覚神経線維は、特定の感覚刺激を検出し、開始する受容体やイオンチャネルタンパク質の茄多を表現する。方法はまた、これらの繊維の特定のイオンチャネルタンパク質の機能発現を同定するために利用することができる、皮膚を支配する末梢感覚神経線維の電気的特性を、特徴付けるために使用可能です。しかしながら、類似の電気生理学的手法は、骨などの最も挑戦的な組織を含む他の内臓器官を、支配する末梢感覚神経線維の受容体とイオンチャネルタンパク質の機能発現の検出のために（そしてまた、開発するのが難しい）は使用できません。さらに、そのような電気生理学的手法は、非興奮性タンパク質の発現を決定するために利用することはできない末梢感覚神経線維内のS。したがって、感覚神経のfivers用周辺/内臓の組織サンプルの免疫染色では、これらの神経線維に関心のある特定のタンパク質の発現を決定する最良の方法を提供します。これまでのところ、感覚ニューロンにおける蛋白質発現の研究​​のほとんどは、情報が特定のタイプまたは感覚ニューロンのサブセットの細胞体における特定のタンパク質の発現に限定されている知覚神経節、の手順を免疫染色に利用している。ここでは、末梢感覚神経線維の免疫染色のための周辺機器/内臓の組織サンプルの調製のための詳細な方法/プロトコルを報告する。我々は末梢感覚神経線維の免疫染色のためのマウスからの皮膚や足底のパンチ生検と骨（大腿骨）のセクションの準備のための具体的詳細の方法。これらのメソッドは、唯一の末梢感覚神経細胞におけるタンパク質発現の定性測定に重要なものではありませんが、またのための定量的なアッセイ方法を提供する感覚線維の特定のタイプまたはサブセットのタンパク質発現レベルの変化を決定するだけでなく、様々な病態時の感覚線維の数と密度の形態学的および/または解剖学的変化を決定するための。さらに、これらのメソッドは、感覚神経線維の染色に限定されないが、皮膚、骨や他の内臓組織における神経線維のいずれかのタイプの染色にも使用できます。

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Tissue Preparation and Immunostaining of Mouse Sensory Nerve Fibers Innervating Skin and Limb Bones

末梢感覚神経線維のサブタイプの免疫細胞化学的同定（とそこにタンパク質発現の検出）が末梢感覚の分子メカニズムの理解の鍵となります。ここでは、末梢感覚神経線維の特異的免疫染色のための皮膚や四肢骨などの周辺/内臓の組織サンプル、、の調製のための方法を説明します。

スキンと四肢骨の神経支配マウス感覚神経線維の組織の調製と免疫染色

Detection and primary processing of physical, chemical and thermal sensory stimuli by peripheral sensory nerve fibers is key to sensory perception in ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Preparation of Mouse Brain Tissue for Immunoelectron Microscopy

免疫電子顕微鏡のためのマウスの脳組織の準備

Transmission electron microscopy (TEM) is extremely useful for visualizing microglial, oligodendrocytic, astrocytic, and neuronal subcellular compartments ...

神経科学

Imaging Pheromone Sensing in a Mouse Vomeronasal Acute Tissue Slice Preparation

マウス鋤鼻急性組織スライス標本のイメージングフェロモンセンシング

Peter Karlson and Martin L&uuml;scher used the term pheromone for the first time in 19591 to describe chemicals used for intra-species communication. ...

Selective Tracing of Auditory Fibers in the Avian Embryonic Vestibulocochlear Nerve

鳥類胚性内耳神経における聴覚繊維の選択的なトレース

The embryonic chick is a widely used model for the study of peripheral and central ganglion cell projections. In the auditory system, selective labeling ...

An Isolated Semi-intact Preparation of the Mouse Vestibular Sensory Epithelium for Electrophysiology and High-resolution Two-photon Microscopy

電気生理学および高分解能二光子顕微鏡用マウス前庭感覚上皮の切り抜き半無傷準備

Understanding vestibular hair cells function  under normal conditions, or how trauma, disease, and aging disrupt this  function is a vital step in the ...

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

In Vivo Two-Photon Microscopy of Single Nerve Endings in Skin

皮膚における単一神経終末のin vivo二光子顕微鏡で

Nerve endings in skin are involved in physiological processes such as sensing1 as well as in pathological processes such as neuropathic pain2. Their ...

Flat Mount Imaging of Mouse Skin and Its Application to the Analysis of Hair Follicle Patterning and Sensory Axon Morphology

マウス皮膚や毛包パターニングおよび感覚軸索形態の解析への応用のフラットマウントイメージング

Skin is a highly heterogeneous tissue. Intra-dermal structures include hair follicles, arrector pili muscles, epidermal specializations (such as Merkel ...

Whole-mount Imaging of Mouse Embryo Sensory Axon Projections

マウスの胚感覚軸索投影のホールマウントイメージング

The visualization of full-length neuronal projections in embryos is essential to gain an understanding of how mammalian neuronal networks develop. Here we ...

Three-dimensional Imaging and Analysis of Mitochondria within Human Intraepidermal Nerve Fibers

三次元画像と人間の表皮内神経線維内のミトコンドリアの解析

The goal of this protocol is to study mitochondria within intraepidermal nerve fibers. Therefore, 3D imaging and analysis techniques were developed to ...

A Method to Target and Isolate Airway-innervating Sensory Neurons in Mice

方法は、標的とマウスにおけるアイソ気道-神経支配感覚ニューロンへ

Somatosensory nerves transduce thermal, mechanical, chemical, and noxious stimuli caused by both endogenous and environmental agents. The cell bodies of ...

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog (Rana catesbeiana)

Physiological Preparation of Hair Cells from the Sacculus of the American Bullfrog Rana catesbeiana

ウシガエルの球形嚢（からの有毛細胞の生理的な準備<em&gt;ウシガエル</em&gt;）

The study of hearing and balance rests upon insights drawn from biophysical studies of model systems. One such model, the sacculus of the American ...