Name: inducing dendritic growth in cultured sympathetic neurons
Uploaded: 2012-03-21T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons at JoVE.com

وأيد هذا العمل من خلال تمويل من المعاهد الوطنية للصحة (منح R21 NS45037 وES014901 R01).

1. إعداد متوسط ​​الثقافة (C2 متوسطة) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> يضاف ما يلي، وفقا للترتيب في القائمة، ل، القابل للتصرف العقيمة 500 مل دورق مخروطي: <table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> كمية </td><td> عنصر </td><td> نهائي تركيز</strong...

<ol>
	<li>Purpura, D. P., Quarton, Q. C., Melnechuk, T., Schmitt, F. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The Neurosciences: A Study Program. , 372-393 (1967).</li><li>Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+and+structural+changes+in+mammalian+sympathetic+neurons+following+interruption+of+their+axons.">Functional and structural changes in mammalian sympathetic neurons following interruption of their axons.</a> J. Physiol. 252, 429-463 (1975).</li><li>Purves, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> A Trophic Theory of Neural Connections. , (1988).</li><li>Miller, J. P., Jacobs, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+neuronal+structure+and+function.">Relationships between neuronal structure and function.</a> J. Exp. Biol. 112, 129-145 (1984).</li><li>Schuman, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synapse+specificity+and+long-term+information+storage.">Synapse specificity and long-term information storage.</a> Neuron. 18, 339-342 (1997).</li><li>Sejnowski, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+year+of+the+dendrite.">The year of the dendrite.</a> Science. 275, 178-179 (1997).</li><li>Berger-Sweeney, J., Hohmann, C. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+consequences+of+abnormal+cortical+development:+insights+into+developmental+disabilities.">Behavioral consequences of abnormal cortical development: insights into developmental disabilities.</a> Behav. Brain Res. 86, 121-142 (1997).</li><li>Connors, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+mechanisms+in+neurodevelopmental+disorders.">Fetal mechanisms in neurodevelopmental disorders.</a> Pediatric Neurology. 38, 163-176 (2008).</li><li>Pardo, C. A., Eberhart, C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+neurobiology+of+autism.">The neurobiology of autism.</a> Brain Pathology (Zurich, Switzerland). 17, 434-447 (2007).</li><li>Zoghbi, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Postnatal+neurodevelopmental+disorders:+meeting+at+the+synapse.">Postnatal neurodevelopmental disorders: meeting at the synapse.</a> Science. 302, 826-830 (2003).</li><li>de Ruiter, J. P., Uylings, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+dendritic+analysis+of+fascia+dentata+granule+cells+in+human+aging+and+senile+dementia.">Morphometric and dendritic analysis of fascia dentata granule cells in human aging and senile dementia.</a> Brain Res. 402, 217-229 (1987).</li><li>Flood, D. G., Coleman, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hippocampal+plasticity+in+normal+aging+and+decreased+plasticity+in+Alzheimer's+disease.">Hippocampal plasticity in normal aging and decreased plasticity in Alzheimer's disease.</a> Prog. Brain Res. 83, 435-443 (1990).</li><li>Jagadha, V., Becker, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+pathology:+an+overview+of+Golgi+studies+in+man.">Dendritic pathology: an overview of Golgi studies in man.</a> Can. J. Neurol. Sci. 16, 41-50 (1989).</li><li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.+I.+Conditions+under+which+neurons+form+axons+but+not+dendrites.">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture. I. Conditions under which neurons form axons but not dendrites.</a> Dev. Biol. 128, 324-336 (1988).</li><li>Tropea, M., Johnson, M. I., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glial+cells+promote+dendritic+development+in+rat+sympathetic+neurons+in+vitro.">Glial cells promote dendritic development in rat sympathetic neurons in vitro.</a> Glia. 1, 380-392 (1988).</li><li>Lein, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+extracellular+matrix+and+osteogenic+protein-1+on+the+morphological+differentiation+of+rat+sympathetic+neurons.">The effects of extracellular matrix and osteogenic protein-1 on the morphological differentiation of rat sympathetic neurons.</a> Int. J. Dev. Neurosci. 14, 203-215 (1996).</li><li>Lein, P., Johnson, M., Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+induces+dendritic+growth+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 induces dendritic growth in rat sympathetic neurons.</a> Neuron. 15, 597-605 (1995).</li><li>Lein, P. J., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laminin+and+a+basement+membrane+extract+have+different+effects+on+axonal+and+dendritic+outgrowth+from+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+vitro.">Laminin and a basement membrane extract have different effects on axonal and dendritic outgrowth from embryonic rat sympathetic neurons in vitro.</a> 136, 330-345 (1989).</li><li>Higgins, D., Lein, P. J., Osterhout, D. J., Johnson, M. I., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing Nerve Cells. , 177-295 (1991).</li><li>Beck, H. N., Drahushuk, K., Jacoby, D. B., Higgins, D., Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+morphogenetic+protein-5+(BMP-5)+promotes+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons.">Bone morphogenetic protein-5 (BMP-5) promotes dendritic growth in cultured sympathetic neurons.</a> BMC Neurosci. 2, 12-12 (2001).</li><li>Guo, X., Rueger, D., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osteogenic+protein-1+and+related+bone+morphogenetic+proteins+regulate+dendritic+growth+and+the+expression+of+microtubule-associated+protein-2+in+rat+sympathetic+neurons.">Osteogenic protein-1 and related bone morphogenetic proteins regulate dendritic growth and the expression of microtubule-associated protein-2 in rat sympathetic neurons.</a> Neurosci. Lett. 245, 131-134 (1998).</li><li>Lein, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glia+induce+dendritic+growth+in+cultured+sympathetic+neurons+by+modulating+the+balance+between+bone+morphogenetic+proteins+(BMPs)+and+BMP+antagonists.">Glia induce dendritic growth in cultured sympathetic neurons by modulating the balance between bone morphogenetic proteins (BMPs) and BMP antagonists.</a> J. Neurosci. 22, 10377-10387 (2002).</li><li>Higgins, D., Lein, P., Osterhout, D., Johnson, M. I., Banker, G., Goslin, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Culturing Nerve Cells. , 177-205 (1991).</li><li>Bruckenstein, D. A., Higgins, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+differentiation+of+embryonic+rat+sympathetic+neurons+in+tissue+culture.+II.+Serum+promotes+dendritic+growth.">Morphological differentiation of embryonic rat sympathetic neurons in tissue culture. II. Serum promotes dendritic growth.</a> Dev. Biol. 128, 337-348 (1988).</li></ol>

من مزايا هذا النموذج ما يلي: (أ) وتتألف من ثقافات السكان متجانسة من الخلايا العصبية متعاطف خالية من أنواع الخلايا الأخرى 17،23، (ب) متطلبات عامل نمو الخلايا العصبية هي متعاطفة راسخة، والذي يسمح باستخدام تعريف المتوسطة، ومجموعة متنوعة من وسائل الاعلام تعريف، وركا?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> زجاج coverslips </td><td> Bellco </td><td> 1943-10012 </td><td> 12 ساترة جولة مم # 1 السماكة، والزجاج الألمانية </td></tr><tr><td> عازمة طرف pipets </td><td> Bellco </td><td> 1273-50003 </td><td></td></tr><tr><td> بولي-D-يسين </td><td> سيغما </td><td> P0899-100MG </td><td> الأسهم حل 1 ملغ / مل </td></tr><tr><td> الماء المقطر </td><td> Gibco </td><td> 15230 </td><td></td></tr><tr><td> غرامة لا ملقط دومون. 4 و 5 </td><td> أدوات العلوم الدقيقة (FST) </td><td> 11252-30 11241-30 </td><td></td></tr><tr><td> 20-قياس الإبر </td><td> بيكتون ديكنسون </td><td> 305176 </td><td></td></tr><tr><td> ليبوفيتز لL-15 متوسطة </td><td> إينفيتروجن </tد&gt; <td> 11415 </td><td></td></tr><tr><td> كولاجيناز </td><td> ورثينجتون </td><td> 4176 </td><td> 1 ملغ / مل </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> روش </td><td> 04942078001 </td><td> 5 ملغ / مل </td></tr><tr><td> هانك في محلول ملحي متوازن (عن ولاية كاليفورنيا، ملغ) </td><td> إينفيتروجن </td><td> 14185-052 </td><td></td></tr><tr><td> DMEM انخفاض الجلوكوز </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11885 </td><td></td></tr><tr><td> L-الجلوتامين </td><td> إينفيتروجن </td><td> 25030 </td><td> 20 ملي مول </td></tr><tr><td> الانسولين / ترانسفيرين / السيلينيوم </td><td> إينفيتروجن </td><td> 51500-056 </td><td> 100X </td></tr><tr><td> الحمضية الدهنية الحرة BSA </td><td> Calbiochem </td><td> 126609 </td><td></td></tr><tr><td> NGF </td><td> المنتجات الاحيائية هارلان </td><td> 5017 </td><td></td></tr><tr><td> لحم الخنزير المتوسطة F-12 المغذيات (F-12) </td><td> إينفيتروجن </td><td> 11765 </td><tد&gt; </td></tr><tr><td> السيتوزين الأرابينوزيد </td><td> سيغما </td><td> C1768 </td><td></td></tr><tr><td> Matrigel </td><td> العلوم البيولوجية دينار بحريني </td><td> 356234 </td><td> تجنب تكرار تجميد ذوبان دورات </td></tr><tr><td> BMP-7 </td><td> R &amp; D أنظمة Curis، المؤتمر الوطني العراقي. </td><td> 345-BP-07H BMP7 </td><td> أفضل الممارسات الإدارية 4 و 5 و 6 العمل على قدم المساواة، وكذلك BMP-7، وتكون في بعض الأحيان أسهل من الحصول على تجاريا </td></tr><tr><td> بارافورمالدهيد </td><td> سيغما </td><td> P6148 </td><td></td></tr><tr><td> تريتون X-100 </td><td> الصياد </td><td> BP151-500 </td><td></td></tr><tr><td> ماوس لمكافحة الفئران MAP2 الأضداد </td><td> ستيرنبرغ Monoclonals المؤتمر الوطني العراقي. </td><td> SMI52 </td><td> 1/5000 </td></tr><tr><td> اليكسا فلور 546 الماعز المضادة للماوس </td><td> إينفيتروجن </td><td> A11003 </td><td> 1/10000 </td></tr><tr><td> تزايد وسائل الاعلام </td><td> إطالة المسابر عدة Antifade الجزيئية </td> &lt;TD&gt; P7481 </td><td></td></tr></tbody></table> الجدول رقم 1. المواد

inducing dendritic growth in cultured sympathetic neurons

شكل شجرة شجيري يحدد مساهمة مجموع متشابك إحدى الخلايا العصبية يمكن أن تحصل 1-3، ويؤثر على أنواع وتوزيع هذه المدخلات و 4-6. وترتبط أنماط المتغيرة للنمو الشجيرية واللدونة وظيفة السلوك العصبي مع ضعف في نماذج تجريبية 7، ويعتقد أنها تساهم في الأعراض السريرية التي لوحظت في كل من اضطرابات النمو العصبي 8-10 وأمراض الاعصاب 11-13. هذه الملاحظات تؤكد أهمية الوظيفية للتنظيم على وجه التحديد مورفولوجيا شجيري، وتشير إلى أن تحديد الآليات التي تتحكم في نمو شجيري لن تقدم فقط فهم كيفية اتصال الخلايا العصبية وينظم خلال التطور الطبيعي، ولكن يمكن أيضا أن تقدم فكرة عن الاستراتيجيات العلاجية رواية عن الأمراض العصبية المختلفة. وسيتم دراسات الميكانيكية للنمو شجيري سهل إلى حد كبير من قبل س توفراتحاد كرة القدم النظام النموذجي الذي يسمح الخلايا العصبية تحول تجريبيا من الدولة التي لا تمتد إلى واحد في التشعبات التي وضع شجرة شجيري مماثلة لنظيراتها في الجسم الحي. الثقافات الأولية من الخلايا العصبية متعاطف فصلها عن العقد في عنق الرحم متفوقة (SCG) من القوارض فترة ما حول الولادة تقديم مثل هذا النموذج. عندما زرعها في وسط المحددة في حالة عدم وجود الخلايا الدبقية المصل والعقدية، الخلايا العصبية متعاطف توسيع نطاق عملية واحدة التي هي محور عصبي، وهذه حالة القطب الواحد يستمر لأسابيع أو أشهر في ثقافة 14،15. ومع ذلك، فإن إضافة أي التخلق عظم بروتين-7 (BMP-7) 16،17 أو Matrigel 18 إلى ثقافة المتوسط ​​يطلق هذه الخلايا العصبية لتوسيع عمليات متعددة تلبي المورفولوجي، ومعايير الكيمياء الحيوية والوظيفية للالتشعبات. الخلايا العصبية متعاطف فصلها عن SCG من القوارض فترة ما حول الولادة، وتنمو في ظل ظروف محددة ويبلغ عدد سكانها متجانسة من الخلايا العصبية 19التي تستجيب بشكل موحد على النشاط التغصنات المعززة للمن Matrigel، BMP-7 وغيرها من أفضل الممارسات الإدارية decapentaplegic (النيابة العامة) و 60A تحت العوائل 17،18،20،21. الأهم من ذلك، Matrigel وBMP التي يسببها التغصنات تشكيل يحدث في حالة عدم وجود تغييرات في بقاء الخلية أو نمو محواري 17،18. هنا، نحن تصف كيفية إعداد الثقافات فصلها من الخلايا العصبية متعاطف المستمدة من SCG من الفئران قبل الولادة، بحيث تستجيب لنشاط التغصنات المعززة للانتقائية من Matrigel أو أفضل الممارسات الإدارية.

Watch this Scientific Journal Video about Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons at JoVE.com

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

وصفنا على بروتوكول لاستخدام البروتين مخلق العظام-7 (BMP-7) أو Matrigel للحث على انتقائية نمو الخلايا العصبية الجذعية في متعاطف الابتدائية فصلها عن العقد في عنق الرحم متفوقة (SCG) من الفئران قبل الولادة.

حفز النمو في الخلايا العصبية شجيري متعاطف مثقف

The shape of the dendritic arbor determines the total synaptic input a neuron can receive 1-3, and influences the types and distribution of these inputs ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Fluorescence Recovery After Photobleaching (FRAP) of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

Fluorescence Recovery After Photobleaching FRAP of Fluorescence Tagged Proteins in Dendritic Spines of Cultured Hippocampal Neurons

مضان الانتعاش بعد Photobleaching (FRAP) من البروتينات المرتبطة دلاليا الإسفار في العمود الفقري شجيري الخلايا العصبية الحصين مثقف

FRAP has been used to quantify the mobility of GFP-tagged proteins. Using a strong excitation laser, the fluorescence of a GFP-tagged protein is bleached ...

Analysis of Dendritic Spine Morphology in Cultured CNS Neurons

تحليل الصرف العمود الفقري شجيري الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي لؤلؤ

Dendritic spines are the sites of the majority of excitatory connections within the brain, and form the post-synaptic 
compartment of synapses. These ...

Quantitative Analysis of Synaptic Vesicle Pool Replenishment in Cultured Cerebellar Granule Neurons using FM Dyes

تحليل كمي متشابك الحويصلة التجديد حمام سباحة في الخلايا العصبية مثقف الحبيبية للدماغ باستخدام الأصباغ FM

After neurotransmitter release in central nerve terminals, SVs are rapidly retrieved by endocytosis.  Retrieved SVs are then refilled with ...

Genetic Study of Axon Regeneration with Cultured Adult Dorsal Root Ganglion Neurons

دراسة وراثية من التجديد أكسون مع الكبار الظهرية مثقف الخلايا العصبية العقدة الجذر

It is well known that mature neurons in the central nervous system (CNS) cannot regenerate their axons after injuries due to diminished intrinsic ability ...

Voltage-sensitive Dye Recording from Axons, Dendrites and Dendritic Spines of Individual Neurons in Brain Slices

الجهد حساسة من تسجيل صبغ محاور عصبية، التشعبات والعمود الفقري شجيري الخلايا العصبية الفردية في شرائح الدماغ

Understanding the biophysical properties and functional organization of single neurons and how they process information is fundamental for understanding ...

Imaging pHluorin-tagged Receptor Insertion to the Plasma Membrane in Primary Cultured Mouse Neurons

التصوير pHluorin الموسومة الإدراج مستقبلات غشاء البلازما إلى الخلايا العصبية في الابتدائية الماوس مثقف

A better understanding of the mechanisms governing receptor trafficking between the plasma membrane (PM) and intracellular compartments requires an ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

سريع الصغرى، الرحلان الشاردي من الغلوتامات وGABA: أداة مفيدة لبحث تكامل متشابك

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

التصوير شجيري العمود الفقري من الفئران الابتدائية الحصين الخلايا العصبية باستخدام منظم الإضاءة المجهر

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

Quantification of Endosome and Lysosome Motilities in Cultured Neurons Using Fluorescent Probes

كمي من إندوسوم و ليسوسوم التحركات في الخلايا العصبية المستزرعة باستخدام تحقيقات الفلورسنت

In the brain, membrane trafficking systems play important roles in regulating neuronal functions, such as neuronal morphology, synaptic plasticity, ...

Measuring Synaptic Vesicle Endocytosis in Cultured Hippocampal Neurons

قياس الالتقام حويصلة متشابك في الخلايا العصبية هيبوكامبال مثقف

During endocytosis, fused synaptic vesicles are retrieved at nerve terminals, allowing for vesicle recycling and thus the maintenance of synaptic ...