Name: isolation of mouse lung dendritic cells
Uploaded: 2011-11-22T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

लेखकों LSU फ्लो Cytometry कोर सुविधा microphotographs के साथ उनकी सहायता के लिए सेल छँटाई और पीटर Mottram के साथ उसकी मदद के लिए मर्लिन Dietrich के लिए धन्यवाद करना चाहते हैं. यह काम उड़ान परिचर चिकित्सा अनुसंधान संस्थान, LSU अनुसंधान प्रतियोगी कार्यक्रम पुरस्कार, और NIH / NIAID RR020159 P20 और R03AI081171 अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था.

1. फेफड़ों के छिड़काव और एकल कक्ष निलंबन <ol><li> और्विक शिरा के माध्यम से / ketamine xylazine संवेदनाहारी मिश्रण की एक intraperitoneal इंजेक्शन (मिलीग्राम / माउस ketamine 1.8, 0.19 xylazine में) और exsanguination के साथ माउस euthanize </li><li> काटने और धीरे से उसकी पी?...

<ol>
	<li>Pulendran, B., Palucka, K., Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensing+pathogens+and+tuning+immune+responses.">Sensing pathogens and tuning immune responses.</a> Science. 293, 253-256 (2001).</li><li>Banchereau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunobiology+of+dendritic+cells.">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annual Review of Immunology. 18, 767-811 (2000).</li><li>Manicassamy, S., Pulendran, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell+control+of+tolerogenic+responses.">Dendritic cell control of tolerogenic responses.</a> Immunol. Rev. 241, 206-227 (2011).</li><li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology,+quantitation,+tissue+distribution.">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J. Exp. Med. 137, 1142-1162 (1973).</li><li>Asselin-Paturel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+type+I+IFN-producing+cells+are+immature+APCs+with+plasmacytoid+morphology.">Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology.</a> Nat. Immunol. 2, 1144-1150 (2001).</li><li>Chan, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interferon-producing+killer+dendritic+cells+provide+a+link+between+innate+and+adaptive+immunity.">Interferon-producing killer dendritic cells provide a link between innate and adaptive immunity.</a> Nat. Med. 12, 207-213 (2006).</li><li>Taieb, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+dendritic+cell+subset+involved+in+tumor+immunosurveillance.">A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance.</a> Nat. Med. 12, 214-219 (2006).</li><li>Guerrero-Plata, A., Kolli, D., Hong, C., Casola, A., Garofalo, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subversion+of+pulmonary+dendritic+cell+function+by+paramyxovirus+infections.">Subversion of pulmonary dendritic cell function by paramyxovirus infections.</a> Journal of Immunology. 182, 3072-3083 (2009).</li><li>Larson, R. S., Springer, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+leukocyte+integrins.">Structure and function of leukocyte integrins.</a> Immunol. Rev. 114, 181-217 (1990).</li><li>Sung, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+major+lung+CD103+(alphaE)-beta7+integrin-positive+epithelial+dendritic+cell+population+expressing+Langerin+and+tight+junction+proteins.">A major lung CD103 (alphaE)-beta7 integrin-positive epithelial dendritic cell population expressing Langerin and tight junction proteins.</a> J. Immunol. 176, 2161-2172 (2006).</li><li>Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+CD11c++MHC+class+II-+precursors+generate+lung+dendritic+cells+during+respiratory+viral+infection,+but+are+depleted+in+the+process.">Local CD11c+ MHC class II- precursors generate lung dendritic cells during respiratory viral infection, but are depleted in the process.</a> J. Immunol. 177, 2536-2542 (2006).</li><li>Bhatia, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+host+defense+against+Aspergillus+fumigatus+involves+alveolar+macrophages+with+a+predominance+of+alternatively+activated+phenotype.">Rapid host defense against Aspergillus fumigatus involves alveolar macrophages with a predominance of alternatively activated phenotype.</a> PLoS One. 6, e15943-e15943 (2011).</li><li>Shao, Z., Makinde, T. O., McGee, H. S., Wang, X., Agrawal, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fms-like+tyrosine+kinase+3+ligand+regulates+migratory+pattern+and+antigen+uptake+of+lung+dendritic+cell+subsets+in+a+murine+model+of+allergic+airway+inflammation.">Fms-like tyrosine kinase 3 ligand regulates migratory pattern and antigen uptake of lung dendritic cell subsets in a murine model of allergic airway inflammation.</a> J. Immunol. 183, 7531-75381 (2009).</li><li>Hao, X., Kim, T. S., Braciale, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+response+of+respiratory+dendritic+cell+subsets+to+influenza+virus+infection.">Differential response of respiratory dendritic cell subsets to influenza virus infection.</a> J. Virol. 82, 4908-4919 (2008).</li></ol>

फेफड़े माउस डीसी के अलगाव सांस उत्तेजनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के अध्ययन के लिए एक महत्वपूर्ण तकनीक है. इन कोशिकाओं को प्राप्त करने की प्रक्रिया में महत्वपूर्ण कदम है कि कोशिकाओं के नुकसान के रूप म?...

<table width="200" border="1"><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </td></tr><tr><td> ACK lysing बफर </td><td> Invitrogen </td><td> D6-0005DG </td><td></td></tr><tr><td> विरोधी माउस CD11c (HL3) </td><td> बी.डी. Pharmingen </td><td> 5580979 </td><td> पीई Cy7 संयुग्मित </td></tr><tr><td> विरोधी माउस आइए / आईई (269) </td><td> BD-Pharmingen </td><td> 553623 </td><td> संयुग्मित FITC </td></tr><tr><td> Collangenase प्रकार 1A </td><td> सिग्मा </td><td> 9891-500mg </td><td></td></tr><tr><td> सेल strainers </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 352360 352340, </td><td></td></tr><tr><td> CD11c microbeads (N418) </td><td> Miltenyi </td><td> 130-052-001 </td><td></td></tr><tr><td> DNase मैं </td><td> सिग्मा </td><td> D5025 - 150KU </td><td></td></tr><tr><td> हांक बैलेंस्ड नमक समाधान </td><td> Invitrogen </td><td> 14170 </td><td></td></tr><tr><td> Hepes बफर समाधान </td><td> Invitrogen </td><td> 15630 </td><td></td></tr><tr><td> पेट्री 60 मिमी व्यंजन </td><td> बी.डी. फाल्कन </td><td> 351016 </td><td></td></tr><tr><td> GentleMACS ™ सी ट्यूबों </td><td> Miltenyi </td><td> 130-093-237 </td><td></td></tr><tr><td> कोमल एमएसीएस dissociator </td><td> Miltentyi </td><td> 130-093-235 </td><td></td></tr><tr><td> AutoMACS - प्रो ™ </td><td> Miltenyi </td><td> 130-092-545 </td><td></td></tr><tr><td> FASCS Aria </td><td> BD </td><td></td><td></td></tr></table>

isolation of mouse lung dendritic cells

फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं (डीसी) हमलावर रोगज़नक़ों 1,2 tolerogenic प्रतिक्रियाओं के नियंत्रण में के रूप में के रूप में अच्छी तरह से श्वसन तंत्र में 3 संवेदन में एक मौलिक भूमिका निभाते हैं . फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं के तीन मुख्य सबसेट कम से कम चूहों में वर्णित किया गया है: पारंपरिक डीसी (सीडीसी) 4, plasmacytoid डीसी (PDC) 5 और IFN उत्पादन हत्यारा (IKDC) डीसी 6,7 . सीडीसी सबसेट 8 फेफड़ों में सबसे प्रमुख डीसी सबसेट है. डीसी सबसेट की पहचान के लिए जाना जाता है आम मार्कर CD11c, एक प्रकार मैं transmembrane (β2) integrin कि monocytes, मैक्रोफेज, neutrophils और कुछ बी कोशिकाओं 9 पर भी व्यक्त किया है. कुछ ऊतकों में, माउस डीसी की पहचान के लिए एक मार्कर के रूप में CD11c उपयोग के लिए मान्य के रूप में तिल्ली, जहां सबसे CD11c + कोशिकाओं सीडीसी सबसेट का प्रतिनिधित्व करते हैं जो प्रमुख उतक अनुरूपता जटिल वर्ग द्वितीय (MHC- II) के उच्च स्तर व्यक्त है. हालांकि, फेफड़ों एक अधिक विषम ऊतक कहाँ हो रहा हैपक्ष डीसी सबसेट, वहाँ एक अलग सेल की आबादी का एक उच्च प्रतिशत है कि MHC-II के निम्न स्तर डटकर CD11c के उच्च स्तर व्यक्त है. CD11c हाय MHC-II लो फेफड़ों के सेल की आबादी इसके लक्षण वर्णन पर और ज्यादातर F4/80, प्लीहा बृहतभक्षककोशिका मार्कर के अपनी अभिव्यक्ति पर आधारित है, फेफड़े के 10 और अधिक हाल ही में मैक्रोफेज के रूप में पहचान की गई है एक संभावित डीसी 11 अग्रदूत के रूप में. माउस PDC करने के लिए इसके विपरीत में, फेफड़े के प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में सीडीसी की विशिष्ट भूमिका के अध्ययन के एक विशिष्ट मार्कर है कि इन कोशिकाओं के अलगाव में मदद कर सकता है की कमी के कारण सीमित किया गया है. इसलिए, इस काम में, हम करने के लिए एक उच्च शुद्ध माउस फेफड़ों सीडीसी अलग प्रक्रिया का वर्णन. फेफड़े डीसी सबसेट के अलगाव को सांस के रूप में के रूप में अच्छी तरह से रोगज़नक़ों पर्यावरणीय कारकों है कि फेफड़ों में मेजबान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को गति प्रदान कर सकते हैं के जवाब में इन कोशिकाओं के समारोह में अंतर्दृष्टि लाभ के लिए एक बहुत ही उपयोगी उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है.

Watch this Scientific Journal Video about Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells at JoVE.com

Isolation of Mouse Lung Dendritic Cells

माउस फेफड़ों के वृक्ष के समान कोशिकाओं का एक उच्च शुद्ध तैयारी में वर्णित है. विशिष्ट पारंपरिक वृक्ष के समान सेल सबसेट के अलगाव के लिए जोर दिया जाता है.

माउस फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं का अलगाव

Lung dendritic cells (DC) play a fundamental role in sensing invading pathogens 1,2 as well as in the control of tolerogenic responses 3 in the ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Isolation of Mouse Peritoneal Cavity Cells

माउस peritoneal गुहा कक्ष के अलगाव

The peritoneal cavity is a membrane-bound and fluid-filled abdominal cavity of mammals, which contains the liver, spleen, most of the gastro-intestinal ...

Isolation and Characterization of Dendritic Cells and Macrophages from the Mouse Intestine

अलगाव और और माउस आंत से वृक्ष के समान कोशिकाओं मैक्रोफेज की विशेषता

Within the intestine reside unique populations of innate and adaptive immune cells that are involved in promoting tolerance towards commensal flora and ...

Isolation of Myeloid Dendritic Cells and Epithelial Cells from Human Thymus

मानव थाइमस से माइलॉयड वृक्ष के समान कोशिकाओं और उपकला कोशिकाओं का अलगाव

In this protocol we provide a method to isolate dendritic cells (DC) and epithelial cells (TEC) from the human thymus. DC and TEC are the major antigen ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

टी कोशिकाओं वृक्ष के समान कोशिकाओं से Transinfection द्वारा बैक्टीरिया पर कब्जा

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

माउस वृक्ष के समान सेल सबसेट के अलगाव के लिए एक कुशल और उच्च उपज विधि

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

Fluorescence-activated Cell Sorting for Purification of Plasmacytoid Dendritic Cells from the Mouse Bone Marrow

माउस अस्थि मज्जा से Plasmacytoid वृक्ष के समान कोशिकाओं की शुद्धि के लिए प्रतिदीप्ति सक्रिय सेल छंटनी

Fluorescence-activated cell sorting (FACS) is a technique to purify specific cell populations based on phenotypes detected by flow cytometry. This method ...

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

Legionella pneumophila Outer Membrane Vesicles: Isolation and Analysis of Their Pro-inflammatory Potential on Macrophages

लीजोनेला pneumophila बाहरी झिल्ली Vesicles: अलगाव और मैक्रोफेज पर उनके समर्थक भड़काऊ संभावित का विश्लेषण

Bacteria are able to secrete a variety of molecules via various secretory systems. Besides the secretion of molecules into the extracellular space or ...

Human Lung Dendritic Cells: Spatial Distribution and Phenotypic Identification in Endobronchial Biopsies Using Immunohistochemistry and Flow Cytometry

मानव फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं: स्थानिक वितरण और प्ररूपी पहचान Endobronchial बायोप्सी में immunohistochemistry और से फ्लो का प्रयोग

The lungs are constantly exposed to the external environment, which in addition to harmless particles, also contains pathogens, allergens, and toxins. In ...

Precision-cut Mouse Lung Slices to Visualize Live Pulmonary Dendritic Cells

प्रेसिजन कटौती माउस फेफड़े स्लाइस लाइव फेफड़े वृक्ष के समान कोशिकाओं कल्पना करने के लिए

Inhalation of allergens and pathogens elicits multiple changes in a variety of immune cell types in the lung. Flow cytometry is a powerful technique for ...

Isolation of Dendritic Cells from the Human Female Reproductive Tract for Phenotypical and Functional Studies

Phenotypical और कार्यात्मक अध्ययन के लिए मानव महिला प्रजनन पथ से वृक्ष कोशिकाओं का अलगाव

The characterization of the human dendritic cells (DCs) resident in mucosal tissues is challenging due to the difficulty in obtaining samples, and the low ...