Name: a functional motor unit in the culture dish: co-culture of spinal cord explants and muscle cells
Uploaded: 2012-04-12T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells at JoVE.com

ويدعم عملنا من قبل مؤسسة العلوم الوطنية السويسرية (SNF)، والمبادرة السويسرية في بيولوجيا الأنظمة (SystemsX.ch)، والضمور العضلي جمعية الولايات المتحدة الأمريكية (نجمة داود الحمراء)، والفرنسية جمعية مناهضة ليه الاعتلالات العضلية (فؤاد)، والميتوكوندريا المتحدة مرض مؤسسة (UMDF)، وغيبرت في الجبهة المتحدة الثورية مؤسسة برنامج الأمراض النادرة (GRF)، والجمعية السويسرية للأبحاث في أمراض العضلات (SSEM / FSRMM)، والسويسري ايف &quot;Jubiläumsstiftung FÜR Volksgesundheit اوند medizinische Forschung&quot; للأبحاث روش المؤسسة والجامعة من بازل.

1. إعداد الإنسان الأساسية العضلات خلية ثقافة <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء خلية عضلة الإنسان الثقافات وفقا لتقنية explantation إعادة explantation-4. أولا، عدم إزالة الأنسجة العضلية من الخزعات. ثم، تضمين 1 explants مم 3 في عضلة خثرة من البلازما، وا?...

<ol>
	<li>Delaporte, C., Dautreaux, B., Fardeau, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+myotube+differentiation+in+vitro+in+different+culture+conditions.">Human myotube differentiation in vitro in different culture conditions.</a> Biol. Cell. 57, 17-22 (1986).</li><li>Kobayashi, T., Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+muscle+cultured+in+monolayer+and+cocultured+with+fetal+rat+spinal+cord:+importance+of+dorsal+root+ganglia+for+achieving+successful+functional+innervation.">Human muscle cultured in monolayer and cocultured with fetal rat spinal cord: importance of dorsal root ganglia for achieving successful functional innervation.</a> J. Neurosci. 7, 3131-3141 (1987).</li><li>Braun, S., Croizat, B., Lagrange, M. C., Warter, J. M., Poindron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Constitutive+muscular+abnormalities+in+culture+in+spinal+muscular+atrophy.">Constitutive muscular abnormalities in culture in spinal muscular atrophy.</a> Lancet. 345, 694-695 (1995).</li><li>Askanas, V., Engel, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+program+for+investigating+adult+human+skeletal+muscle+grown+aneurally+in+tissue+culture.">A new program for investigating adult human skeletal muscle grown aneurally in tissue culture.</a> Neurology. 25, 58-67 (1975).</li><li>Guettier-Sigrist, S., Coupin, G., Warter, J. M., Poindron, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+types+required+to+efficiently+innervate+human+muscle+cells+in+vitro.">Cell types required to efficiently innervate human muscle cells in vitro.</a> Exp. Cell Res. 259, 204-212 (2000).</li><li>Lefebvre, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+characterization+of+a+spinal+muscular+atrophy-determining+gene.">Identification and characterization of a spinal muscular atrophy-determining gene.</a> Cell. 80, 155-165 (1995).</li><li>Schrank, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inactivation+of+the+survival+motor+neuron+gene,+a+candidate+gene+for+human+spinal+muscular+atrophy,+leads+to+massive+cell+death+in+early+mouse+embryos.">Inactivation of the survival motor neuron gene, a candidate gene for human spinal muscular atrophy, leads to massive cell death in early mouse embryos.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94, 9920-9925 (1997).</li><li>Hsieh-Li, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+for+spinal+muscular+atrophy.">A mouse model for spinal muscular atrophy.</a> Nat. Genet. 24, 66-70 (2000).</li><li>Monani, U. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+centromeric+survival+motor+neuron+gene+(SMN2)+rescues+embryonic+lethality+in+Smn(-/-)+mice+and+results+in+a+mouse+with+spinal+muscular+atrophy.">The human centromeric survival motor neuron gene (SMN2) rescues embryonic lethality in Smn(-/-) mice and results in a mouse with spinal muscular atrophy.</a> Hum. Mol. Genet. 9, 333-339 (2000).</li><li>Sleigh, J. N., Gillingwater, T. H., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+contribution+of+mouse+models+to+understanding+the+pathogenesis+of+spinal+muscular+atrophy.">The contribution of mouse models to understanding the pathogenesis of spinal muscular atrophy.</a> Dis. Model. Mech. 4, 457-467 (2011).</li><li>Durbeej, M., Campbell, K. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscular+dystrophies+involving+the+dystrophin-glycoprotein+complex:+an+overview+of+current+mouse+models.">Muscular dystrophies involving the dystrophin-glycoprotein complex: an overview of current mouse models.</a> 12, 349-361 (2002).</li><li>Schnabel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroscience:+Standard+model.">Neuroscience: Standard model.</a> Nature. 454, 682-685 (2008).</li><li>Benatar, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+treatment+trials+in+the+SOD1+mouse+and+in+human+ALS.">Lost in translation: treatment trials in the SOD1 mouse and in human ALS.</a> Neurobiol. Dis. 26, 1-13 (2007).</li><li>Dorchies, O. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normal+innervation+and+differentiation+of+X-linked+myotubular+myopathy+muscle+cells+in+a+nerve-muscle+coculture+system.">Normal innervation and differentiation of X-linked myotubular myopathy muscle cells in a nerve-muscle coculture system.</a> Neuromuscul. Disord. 11, 736-746 (2001).</li><li>McFerrin, J., Engel, W. K., Askanas, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+innervation+of+cultured+human+muscle+overexpressing+betaAPP+experimentally+and+genetically:+relevance+to+inclusion-body+myopathies.">Impaired innervation of cultured human muscle overexpressing betaAPP experimentally and genetically: relevance to inclusion-body myopathies.</a> Neuroreport. 9, 3201-3205 (1998).</li></ol>

وهناك أداة الفسيولوجية في المختبر لدراسة العضلات وظيفة الخلية في السياق الطبيعي والمرضي هو أعلى من الفائدة للmyologists، وذلك لأن مزارع الخلايا العضلية عادة لا تلخص أهمية خلايا متعددة واتصالات من نوع الخلية. إضافة تنقية الخلايا العصبية الحركية إلى خلايا العضلات لي...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco / إينفيتروجن </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> MEM </td><td> Gibco / إينفيتروجن </td><td> 31095 </td></tr><tr><td> متوسط ​​199 </td><td> Gibco / إينفيتروجن </td><td> 31153 </td></tr><tr><td> الأبقار مصل الجنين </td><td> استنساخ الأجنة Perbio </td><td> SH30066.03 </td></tr><tr><td> أنسولين </td><td> سيغما </td><td> I9278 </td></tr><tr><td> الإنسان EGF </td><td> سيغما </td><td> E9644 </td></tr><tr><td> الإنسان جمعية جيل المستقبل </td><td> SIGMA </td><td> F0291 </td></tr><tr><td> البنسلين / الستربتومايسين حل </td><td> Gibco </td><td> 15140 </td></tr></tbody></table>

a functional motor unit in the culture dish: co-culture of spinal cord explants and muscle cells

خلايا عضلة الابتدائي تربيتها في aneurally أحادي الطبقة عقد نادرا لأن عفويا، في ظل عدم وجود عنصر العصب، ويقتصر تمايز الخلايا وتنشيط الخلايا العصبية الحركية مفقود 1. هذه القيود تعوق الدراسة في المختبر من العديد من الأمراض العصبية والعضلية في خلايا العضلات مثقف. الأهم من ذلك، يمكن التغلب على المعوقات التجريبية من monolayered، مثقف خلايا العضلات بواسطة الغدد العرقية وظيفية من myofibers مع explants الحبل الشوكي في الثقافات المشتركة. هنا، نعرض مختلف الخطوات اللازمة لتحقيق فعال وتعصيب السليم للخلايا عضلة الأولية، مما أدى إلى إكمال التفاضل والألياف الانكماش وفقا للطريقة التي وضعتها Askanas 2. للقيام بذلك، وخلايا العضلات شارك في تربيتها مع explants الحبل الشوكي لأجنة الفئران في ED 13.5، مع العقد الجذرية الظهرية لا تزال تعلق لشرائح الحبل الشوكي. بعد بضعة أيام، في عضلة فايbers بدء العقد وتصبح في نهاية المطاف عبر مخططة من خلال تعصيب بواسطة neurites الوظيفية تتوقع من explants النخاع الشوكي الذي يربط إلى خلايا العضلات. يمكن الحفاظ على هذا الهيكل لعدة شهور، وذلك ببساطة عن طريق التبادل المنتظم للثقافة المتوسط. تطبيقات هذا أداة لا تقدر بثمن هي عديدة، كما أنه يمثل نموذج وظيفي لتحاليل متعددة التخصصات للتنمية البشرية وتعصيب العضلات. في الواقع، مجموعة كاملة من جديد تركيب الموصل العصبي العضلي يحدث في طبق والثقافة، والسماح لقياس سهولة العديد من المعلمات في كل خطوة، في سياق الأساسية والفسيولوجية. ويمكن لمجرد ذكر بعض الأمثلة، الجينومية و / أو دراسات البروتين أن يؤديها بشكل مباشر على الثقافات المشتركة. وعلاوة على ذلك، يمكن أن الآثار قبل وبعد متشابك، على وجه التحديد وبشكل منفصل المقررة في الوصل العصبي العضلي، لأن كلا من مكونات تأتي من مختلف الأنواع،الفئران والبشر على التوالي،. ويمكن أيضا أن العصب العضلات المشاركة في ثقافة يتعين القيام بها مع الخلايا العضلية البشرية المعزولة من المرضى الذين يعانون من الأمراض العصبية والعضلية في العضلات أو 3، وبالتالي يمكن أن تستخدم كأداة لفحص المخدرات مرشح. أخيرا، ليس هناك حاجة إلى معدات خاصة ولكن منتظمة مرفق BSL2 لإعادة إنتاج وحدة محرك وظيفي في صحن الثقافة. هذا الأسلوب هو وبالتالي قيمة لعضلة على حد سواء، فضلا عن الأوساط البحثية العصبي العضلي للدراسات الفسيولوجية والميكانيكية وظيفة الاعصاب، في سياق طبيعي والمرض.

Watch this Scientific Journal Video about A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells at JoVE.com

A Functional Motor Unit in the Culture Dish: Co-culture of Spinal Cord Explants and Muscle Cells

خلايا العضلات مثقف هي نموذج غير كافية لتلخيص العضلات معصب<em&gt; في الجسم الحي</em&gt;. يمكن استنساخها وحدة محرك وظيفي<em&gt; في المختبر</em&gt; من جانب تعصيب من متباينة الإنسان الخلايا العضلية الأولية باستخدام الفئران explants الجنين الحبل الشوكي. توضح هذه المقالة كيفية إنشاء شارك في ثقافات explants النخاع الشوكي وخلايا العضلات.

وحدة للسيارات وظيفية في صحن الثقافة: شارك في ثقافة Explants النخاع الشوكي وخلايا العضلات

Human primary muscle cells cultured  aneurally in monolayer rarely contract spontaneously because, in the absence of  a nerve component, cell ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Dissection and Culture of Commissural Neurons from Embryonic Spinal Cord

تشريح والثقافة من الخلايا العصبية من النخاع الشوكي صواري الجنينية

Commissural neurons have been widely used to investigate the mechanisms underlying axon guidance during embryonic spinal cord development. The cell bodies ...

Dissection and Culture of Chick Statoacoustic Ganglion and Spinal Cord Explants in Collagen Gels for Neurite Outgrowth Assays

تشريح العقدة والثقافة والفرخ Statoacoustic Explants النخاع الشوكي في الهلام الكولاجين لفحوصات ثمرة Neurite

The sensory organs of the chicken inner ear are innervated by the peripheral processes of statoacoustic ganglion (SAG) neurons. Sensory organ innervation ...

Chicken Embryo Spinal Cord Slice Culture Protocol

الدجاج الأجنة شريحة الحبل الشوكي الثقافة البروتوكول

Slice cultures can facilitate the manipulation of  embryo development both pharmacologically and through gene manipulations. In  this reduced system, ...

Analysis of Developing Tooth Germ Innervation Using Microfluidic Co-culture Devices

تحليل وضع الأسنان جرثومة تعصيب استخدام أجهزة ميكروفلويديك المشارك الثقافة

Innervation plays a key role in the development, homeostasis and regeneration of organs and tissues. However, the mechanisms underlying these phenomena ...

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

Zebrafish In Situ Spinal Cord Preparation for Electrophysiological Recordings from Spinal Sensory and Motor Neurons

الزرد<em&gt; في الموقع</em&gt; الحبل الشوكي التحضير للتسجيلات الكهربية من العمود الفقري الحسية والحركية العصبية

Zebrafish, first introduced as a developmental model, have gained popularity in many other fields. The ease of rearing large numbers of rapidly developing ...

Spinal Cord Neurons Isolation and Culture from Neonatal Mice

الحبل الشوكي العصبونات العزلة والثقافة من الفئران حديثي الولادة

We present a protocol for the isolation and culture of spinal cord neurons. The neurons are obtained from neonatal C57BL/6 mice and are isolated on ...

Laminectomy and Spinal Cord Window Implantation in the Mouse

استئصال الصفيحة الفقرية وغرس نافذه الحبل الشوكي في الماوس

This protocol describes a method for spinal cord laminectomy and glass window implantation for in vivo imaging of the mouse spinal cord. An integrated ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

تحديد علامات سطح الخلية من الجذعية العصبية الأولية والخلايا السلف عن طريق وضع العلامات الأيضية من Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...

Direct Injection of a Lentiviral Vector Highlights Multiple Motor Pathways in the Rat Spinal Cord

الحقن المباشر لناقل لينتيفيرال يسلط الضوء على عدة مسارات الحركية في الحبل الشوكي الفئران

Introducing proteins of interest into cells in the nervous system is challenging due to innate biological barriers that limit access to most molecules. ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

تحويل الخلايا الجذعية مستحث البشرية المستحثة (iPSCs) في العمود الفقري الوظيفي الشوكي والجمجمة الحركية باستخدام متجات البكالوريا

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...