Name: chromosomics: detection of numerical and structural alterations in all 24 human chromosomes simultaneously using a novel octochrome fish assay
Uploaded: 2012-02-06T13:00:00
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Les auteurs tiennent à remercier le Dr Cliona M. McHale pour la lecture critique et la relecture du manuscrit. Ce travail a été financé par l&#39;Institut national de l&#39;environnement Sciences de la Santé, l&#39;Institut national de la Santé de subvention R01ES017452 à L Zhang.

1. Exemple de préparation des lames <ul><li> POISSON OctoChrome est conçu pour examiner les changements chromosomiques dans les étalements métaphasiques de cellules humaines, y compris mais non limité à des cultures de cellules du sang périphérique, cellules souches / progénitrices et des lignées cellulaires. Les échantillons doivent être préparés selon la procédure standard pour la récolte métaphases 3,11-13: en employant le traitement colcémide d&#39;arrêter les cellules en métaphase, ...

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	<li>Levsky, J. M., Singer, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+in+situ+hybridization:+past,+present+and+future.">Fluorescence in situ hybridization: past, present and future.</a> J. Cell. Sci. 116, 2833-2838 (2003).</li><li>Zhang, L., Eastmond, D. A., Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+nature+of+chromosomal+aberrations+detected+in+humans+exposed+to+benzene.">The nature of chromosomal aberrations detected in humans exposed to benzene.</a> Crit. Rev. Toxicol. 32, 1-42 (2002).</li><li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aberrations+in+chromosomes+associated+with+lymphoma+and+therapy-related+leukemia+in+benzene-exposed+workers.">Aberrations in chromosomes associated with lymphoma and therapy-related leukemia in benzene-exposed workers.</a> Environ. Mol. Mutagen. 48, 467-474 (2007).</li><li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Benzene+increases+aneuploidy+in+the+lymphocytes+of+exposed+workers:+a+comparison+of+data+obtained+by+fluorescence+in+situ+hybridization+in+interphase+and+metaphase.">Benzene increases aneuploidy in the lymphocytes of exposed workers: a comparison of data obtained by fluorescence in situ hybridization in interphase and metaphase.</a> Environ. Mol. Mutagen. 34, 260-268 (1999).</li><li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+aneusomy+and+long+arm+deletion+of+chromosomes+5+and+7+in+the+lymphocytes+of+Chinese+workers+exposed+to+benzene.">Increased aneusomy and long arm deletion of chromosomes 5 and 7 in the lymphocytes of Chinese workers exposed to benzene.</a> Carcinogenesis. 19, 1955-1961 (1998).</li><li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+translocations+and+aneusomy+in+chromosomes+8+and+21+among+workers+exposed+to+benzene.">Increased translocations and aneusomy in chromosomes 8 and 21 among workers exposed to benzene.</a> Cancer. Res. 58, 2176-2181 (1998).</li><li>Bayani, J., Squire, J. 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D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+chromosome+translocations+in+leukemogenesis.">The role of chromosome translocations in leukemogenesis.</a> Semin. Hematol. 36, 59-72 (1999).</li><li>Zhang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+OctoChrome+fluorescence+in+situ+hybridization+to+detect+specific+aneuploidy+among+all+24+chromosomes+in+benzene-exposed+workers.">Use of OctoChrome fluorescence in situ hybridization to detect specific aneuploidy among all 24 chromosomes in benzene-exposed workers.</a> Chem. Biol. Interact. , 153-154 (2005).</li><li>Barch, M. J., Lawce, H. J., Arsham, M. S., Barch, M. 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T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydroquinone,+a+benzene+metabolite,+increases+the+level+of+aneusomy+of+chromosomes+7+and+8+in+human+CD34-positive+blood+progenitor+cells.">Hydroquinone, a benzene metabolite, increases the level of aneusomy of chromosomes 7 and 8 in human CD34-positive blood progenitor cells.</a> Carcinogenesis. 21, 1485-1490 (2000).</li><li>Smith, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+understanding+benzene+health+effects+and+susceptibility.">Advances in understanding benzene health effects and susceptibility.</a> Annu. Rev. Public. Health. 31, 133-148 (2010).</li></ol>

Ce roman OctoChrome-FISH test permet d&#39;examiner simultanément toutes les 24 chromosomes de l&#39;homme dans une hybridation unique sur une seule lame. L&#39;agencement des combinaisons chromosomiques sur les 8 carrés a été conçu pour faciliter l&#39;identification des réarrangements chromosomiques non aléatoires dans les leucémies et les lymphomes les plus courantes. Ainsi, le dosage peut détecter numérique (aneuploïdie) ainsi que structurelles altérations chromosomiques (translocations) concurremment. <...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td><tr><tr><td> OctoChrome Kit </td><td> Cytocell Ltd, Cambridge, Royaume-Uni </td><td> PMP 803 </td><td></td></tr><tr><td> phytohémagglutinine (PHA) </td><td> Invitrogen Corporation </td><td> 10576-015 </td><td></td></tr><tr><td> Colcemid </td><td> Invitrogen Corporation </td><td> 15212-012 </td><td></td></tr><tr><td> Fixateur de Carnoy </td><td></td><td></td><td> Le méthanol: acide acétique glacial = 3: 1 </td></tr><tr><td> Fluorescence microscope </td><td></td><td></td><td> Equipé de filtres pour afficher DAPI, Texas Red, FITC, et les spectres coumarine individuellement, et une DAPI / FITC / Texas Red triple filtre pour afficher des couleurs différentes simultanément </td></tr><tr><td> Metafer logiciels </td><td> Métasystèmes, Altlußheim, Allemagne </td><td></td><td> Faciliter pour localiser toutes les métaphases et de ré-évaluer les anomalies </td></tr></tbody></table>

chromosomics: detection of numerical and structural alterations in all 24 human chromosomes simultaneously using a novel octochrome fish assay

L&#39;hybridation fluorescente in situ (FISH) est une technique qui permet des séquences d&#39;ADN spécifiques à détecter sur les chromosomes en métaphase ou en interphase en 1 noyaux des cellules. La technique utilise des sondes d&#39;ADN avec des séquences uniques qui s&#39;hybrident aux chromosomes entiers ou régions chromosomiques spécifiques, et sert de complément à la cytogénétique classique. Par exemple, de nombreuses études antérieures a signalé la détection fréquente des aberrations chromosomiques dans les patients atteints de leucémie a augmenté en rapport avec l&#39;exposition au benzène, le benzène-intoxication des patients, et les travailleurs en bonne santé exposés au benzène, à l&#39;aide d&#39;une analyse cytogénétique classique 2. Utiliser du poisson, la leucémie spécifiques des altérations chromosomiques ont été observées à être élevée chez les travailleurs apparemment en bonne santé exposés au benzène 3-6, indiquant les rôles critiques de changements cytogentic dans la leucémogenèse induite par le benzène. En règle générale, un test FISH unique examine seulement un ou quelques chromosomes entiersou des loci spécifiques par diapositive, etc hybridations multiples doivent être menées sur plusieurs diapositives pour couvrir l&#39;ensemble des chromosomes humains. Caryotype spectral (SKY) permet la visualisation de l&#39;ensemble du génome simultanément, mais l&#39;exigence d&#39;un logiciel spécial et les limites de son application matériel 7. Ici, nous décrivons un test FISH roman, OctoChrome-FISH, qui peut être appliqué pour Chromosomics, que nous définissons ici comme l&#39;analyse simultanée de tous les 24 chromosomes humains sur une lame dans les études de l&#39;homme, telles que l&#39;étude aneuploïdie chromosomique à l&#39;échelle (CWA) 8. La base de la méthode, commercialisé par Cytocell que le système Chromoprobe Multiprobe, est un dispositif OctoChrome qui est divisée en 8 carrés, dont chacun porte trois différentes sondes de peinture chromosomique entières (Figure 1). Chacun des trois sondes sont directement marquées avec un fluorophore de couleur différente, verte (FITC), rouge (Texas Red), et le bleu (coumarine). L&#39;agencement des combinaisons chromosomiques sur le OctoChromdispositif de e a été conçue pour faciliter l&#39;identification des altérations chromosomiques non aléatoires structurelles (translocations) trouvés dans les leucémies et les lymphomes les plus courantes, pour t par exemple (9, 22), t (15; 17), t (8; 21 ), t (14; 18) 9. En outre, les changements numériques (aneuploïdie) dans les chromosomes peuvent être détectés simultanément. La diapositive modèle correspondant est également divisée en 8 carrés sur lequel se propage en métaphase sont liés (figure 2), et est positionné sur le dispositif OctoChrome. Les sondes et l&#39;ADN cible sont dénaturés à haute température et hybridé dans une chambre humide, puis tous les 24 chromosomes de l&#39;homme peuvent être visualisées simultanément. POISSON OctoChrome est une technique prometteuse pour le diagnostic clinique de la leucémie et le lymphome et pour la détection d&#39;aneuploïdies dans tous les chromosomes. Nous avons appliqué cette nouvelle approche chromosomique dans une étude de la CWA travailleurs exposés au benzène chinois 8,10.

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Chromosomics: Detection of Numerical and Structural Alterations in All 24 Human Chromosomes Simultaneously Using a Novel OctoChrome FISH Assay

Un roman de fluorescence<em&gt; In situ</emHybridation&gt; (FISH) méthode qui examine simultanément à la fois des altérations chromosomiques numériques et structurelles, en particulier les translocations spécifiques chromosomiques associées à la leucémie et le lymphome, de tous les 24 chromosomes humains sur un seul appareil dans une hybridation, est décrite.

Chromosomics: détection d&#39;altérations numériques et structurelles dans les 24 chromosomes de l&#39;homme en utilisant simultanément un dosage FISH Novel OctoChrome

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a technique that allows specific DNA sequences to be detected on metaphase or interphase chromosomes in cell ...

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