Name: simple and robust in vivo and in vitro approach for studying virus assembly
Uploaded: 2012-03-01T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Simple and Robust in vivo and in vitro Approach for Studying Virus Assembly at JoVE.com

فإن الكتاب أود أن أشكر العديد من أعضاء مختبر لإبداء اقتراحاتهم القيمة في تطوير agroinfiltration والمقايسات في الجمعية المختبر. وقد تم تمويل هذا العمل عن طريق منحة من جامعة كاليفورنيا. وأيد هذه الدراسة في أجزاء من منحة مقدمة من المؤسسة الوطنية للعلوم (CBET-1144237).

1. المواد النباتية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وينبغي أن نيكوتيانا benthamiana النباتات لاستخدامها في فحص encapsidation تكون في مرحلة أوراق 4 (3-4 أسبوع تقريبا النباتات القديمة). </li></ol> 2. تسليم والتعبير عن وظيفية مكونات ا?...

<ol>
	<li>Annamalai, P., Rao, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-independent+expression+of+genome+components+and+capsid+protein+of+brome+mosaic+virus+in+planta:+a+functional+role+for+viral+replicase+in+RNA+packaging.">Replication-independent expression of genome components and capsid protein of brome mosaic virus in planta: a functional role for viral replicase in RNA packaging.</a> Virology. 338, 96-111 (2005).</li><li>Annamalai, P., Rofail, F., Demason, D. A., Rao, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication-coupled+packaging+mechanism+in+positive-strand+RNA+viruses:+synchronized+coexpression+of+functional+multigenome+RNA+components+of+an+animal+and+a+plant+virus+in+Nicotiana+benthamiana+cells+by+agroinfiltration.">Replication-coupled packaging mechanism in positive-strand RNA viruses: synchronized coexpression of functional multigenome RNA components of an animal and a plant virus in Nicotiana benthamiana cells by agroinfiltration.</a> J. Virol. 82, 1484-1495 (2008).</li><li>Annamalai, P., Rao, A. L., Foster, N., Johansen, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Plant Virology Protocols. 451, 251-264 (2008).</li><li>Lane, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bromoviruses.">The bromoviruses.</a> Adv. Virus Res. 19, 151-220 (1974).</li><li>Choi, Y. G., Rao, A. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+studies+on+bromovirus+capsid+protein.+VII.+Selective+packaging+on+BMV+RNA4+by+specific+N-terminal+arginine+residuals.">Molecular studies on bromovirus capsid protein. VII. Selective packaging on BMV RNA4 by specific N-terminal arginine residuals.</a> Virology. 275, 207-217 (2000).</li><li>Sambrrok, J., Russel, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular Cloning. A Laboratory Manual. , (2001).</li><li>Dreher, T. W., Rao, A. L., Hall, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replication+in+vivo+of+mutant+brome+mosaic+virus+RNAs+defective+in+aminoacylation.">Replication in vivo of mutant brome mosaic virus RNAs defective in aminoacylation.</a> J. Mol. Biol. 206, 425-438 (1989).</li><li>Jung, B., Rao, A. L., Anvari, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+nano-constructs+composed+of+genome-depleted+brome+mosaic+virus+doped+with+a+near+infrared+chromophore+for+potential+biomedical+applications.">Optical nano-constructs composed of genome-depleted brome mosaic virus doped with a near infrared chromophore for potential biomedical applications.</a> A.C.S. Nano. 5, 1243-1252 (2011).</li><li>Voinnet, O., Lederer, C., Baulcombe, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+viral+movement+protein+prevents+spread+of+the+gene+silencing+signal+in+Nicotiana+benthamiana.">A viral movement protein prevents spread of the gene silencing signal in Nicotiana benthamiana.</a> Cell. 103, 157-167 (2000).</li><li>Wroblewski, T., Tomczak, A., Michelmore, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+Agrobacterium-mediated+transient+assays+of+gene+expression+in+lettuce,+tomato+and+Arabidopsis.">Optimization of Agrobacterium-mediated transient assays of gene expression in lettuce, tomato and Arabidopsis.</a> Plant Biotechnol. J. 3, 259-273 (2005).</li></ol>

يمكن مقاربة Agroinfiltration المقدمة هنا يكون على نطاق واسع ينطبق على مجموعة واسعة من الفيروسات النباتية. وتزامن وثمة سمة مميزة لهذا النهج تسليم agroconstruct متعددة إلى خلية واحد في نفس العيب الرئيسي المرتبطة عادة مع التلقيح الميكانيكي تستخدم بشكل روتيني من الفيروسات النباتية. ?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td></tr><tr><td> أملاح الصوديوم زارة التربية والعلم </td><td> سيغما الدريخ </td><td> M2993 </td></tr><tr><td> خضرة الإندوسيانين </td><td> سيغما الدريخ </td><td> I2633 </td></tr><tr><td> بيكمان منبذة فائقة </td><td> بيكمان كولتر </td><td> نموذج: L8-70M </td></tr><tr><td> Centricon-100 عمود </td><td> ميليبور </td><td> YM-100 </td></tr><tr><td> طيفي </td><td> كاري 50، فاريان المؤتمر الوطني العراقي. </td><td> جزء رقم 10068900 </td></tr><tr><td> مقياس التألق الطيفي </td><td> Fluorolog 3، Jobin إيفون. </td><td> رقم الجزء FL3-21 </td></tr></tbody></table>

simple and robust in vivo and in vitro approach for studying virus assembly

في الفيروسات مع إيجابي، بمعنى الممرضة الجينوم الحمض النووي الريبي على البشر والحيوانات والنباتات، وencapsidation ذرية في virions ناضجة ومستقرة هي مرحلة الكاردينال خلال إنشاء عدوى في مجموعة معينة. وبناء على ذلك، ودراسة encapsidation يحل المعلومات المتعلقة الدراية لآلية تنظم الجمعية فيروس لتشكيل virions المعدية. مثل هذه المعلومات أمر حيوي في صياغة أساليب جديدة لكبح انتشار الفيروس والسيطرة على الأمراض. يمكن دراستها encapsidation الفيروس في والمجراة في المختبر. encapsidation الجينوم في الجسم الحي هو عملية منظمة للغاية الانتقائية التي تنطوي على تفاعلات الجزيئات التحت خلوية والتقسيم. لذلك، مما يؤدي إلى دراسة تشريح أحداث تشمل encapsidation الفيروس في الجسم الحي من شأنه أن يوفر المعارف الأساسية لفهم كيفية الفيروسات تتكاثر والتجمع. في الآونة الأخيرة في encapsidation المختبر تم استغلال للبحوث في مجال الطب الحيوي IMAجينج والتطبيقات العلاجية. الفيروسات النباتية غير يلفها يقف متقدما بفارق كبير في هذا المشروع من encapsidation في المختبر من المواد الخارجية السالبة. وقد استخدمت Brome فيروس فسيفساء (BMV)، وهو غير يلفها فيروس RNA متعدد المكونات المسببة للنباتات، ونظام نموذجي لدراسة الجينوم في التعبئة والتغليف والمجراة في المختبر. لفحوصات encapsidation في محطات benthamiana نيكوتيانا، الأجرعية بوساطة التعبير عابرة، تشير إلى مثل agroinfiltration، وهي تقنية فعالة وقوية لتسليم متزامنة والتعبير عن مكونات متعددة إلى نفس الخلية. في هذا النهج، هو تسلل تعليق من الخلايا الأجرعية المورمة الناقلة البلازميد ثنائي تحمل cDNAs من mRNAs desiredviral إلى ورقة الفضاء withina بين الخلايا باستخدام أي شيء أكثر تعقيدا من حقنة القابل للتصرف 1 مل (بدون إبرة). هذه نتائج عملية في نقل إدراج الحمض النووي في الخلايا النباتية، وT-DNAإدراج يبقى عابر في النواة وكتب بعد ذلك من قبل المضيف الثاني بوليميريز، مما يؤدي إلى التعبير عابر. ويتم تصدير ثم نص مرنا الناتج (المغطاة ومذيل بعديد الأدينيلات) إلى السيتوبلازم للترجمة. بعد ما يقرب من 24 إلى 48 ساعة من الحضانة، ويمكن أخذ عينات من أجزاء الأوراق مخترقة للتحاليل الكيميائية الحيوية microscopyor. Agroinfiltration يسمح بأعداد كبيرة (مئات الآلاف) من الخلايا لtransfected في وقت واحد. لفي المختبر encapsidation، virions تنقيته من BMV هي نأت إلى البروتين قفيصة بواسطة dialyzing ضد كلوريد الكالسيوم تفارق العازلة التي تحتوي على تليها إزالة الحمض النووي الريبي وvirions برنامج الأمم المتحدة للفصل عن طريق الطرد المركزي. يتم تجميعها ثم الجينوم مفارز المنضب قفيصة البروتين المطلوب مع مكونات الجينوم الفيروسي أو غير الفيروسية مكونات مثل indocyanine صبغ.

Watch this Scientific Journal Video about Simple and Robust in vivo and in vitro Approach for Studying Virus Assembly at JoVE.com

Simple and Robust in vivo and in vitro Approach for Studying Virus Assembly

وهناك طريقة بسيطة وفعالة وقوية لتزامن وصول عناصر فيروسية متعددة لخلايا النبات عن طريق<em&gt; الأجرعية</emيوصف&gt; بوساطة التعبير عابر. يتبع encapsidation هذا النهج هو قابل للدراسة تكرارها، من قبل<em&gt; في المختبر</emالمنضب&gt; إعادة التجميع من غير الفيروسية المكونات إلى الجينوم الفيروسي أشباح الضوئية مناسبة للتطبيقات الطبية الحيوية.

بسيطة وقوية في الجسم الحي و في المختبر مدخل لدراسة الجمعية فيروس

In viruses with positive-sense RNA genomes pathogenic to humans, animals and plants, progeny encapsidation into mature and stable virions is a cardinal ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Simple and Robust in vivo and in vitro Approach for Studying Virus Assembly

Visualizing Dengue Virus through Alexa Fluor Labeling

تصور فيروس حمى الضنك من خلال وصفها اليكسا فلور

The early events in the interaction between virus and cell can have profound influence on the outcome of infection. Determining the factors 
that ...

A Novel In vitro Model for Studying the Interactions Between Human Whole Blood and Endothelium

A Novel In vitro Model for Studying the Interactions Between Human Whole Blood and Endothelium

رواية<em&gt; في المختبر</em&gt; نموذج لدراسة التفاعلات بين الدم الكامل الإنسان والبطانة Endothelium

The majority of all known diseases are accompanied by disorders of the cardiovascular system. Studies into the complexity of the interacting pathways ...

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

In Vitro Analysis of Myd88-mediated Cellular Immune Response to West Nile Virus Mutant Strain Infection

في تحليل المختبر من الاستجابة المناعية الخلوية بوساطة Myd88 لفيروس غرب النيل المسخ سلالة العدوى

An attenuated West Nile virus (WNV), a nonstructural (NS) 4B-P38G mutant, induced higher innate cytokine and T cell responses than the wild-type WNV in ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

عزل وتحليل العدلة لتحديد ما دورها في الغدد اللمفاوية حساسية الخلية وكلاء العلاجية

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

In Vitro Disassembly of Influenza A Virus Capsids by Gradient Centrifugation

في المختبر التفكيك من الأنفلونزا من الفيروسات Capsids بواسطة الطرد المركزي التدرج

Acid-triggered molecular processes closely control cell entry of many viruses that enter through the endocytic system. In the case of influenza A virus ...

A Simple and Efficient Approach to Construct Mutant Vaccinia Virus Vectors

مقاربة بسيطة وفعالة لبناء ناقلات الفيروسات المسخ الوقس

The CRISPR-associated endonuclease Cas9 can edit particular genomic loci directed by a single guide RNA (gRNA). The CRISPR/Cas9 system has been ...

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

In Vitro Methods for Comparing Target Binding and CDC Induction Between Therapeutic Antibodies: Applications in Biosimilarity Analysis

في طرق المختبر لمقارنة الهدف وتجليد وCDC التعريفي بين الأجسام المضادة العلاجية: تطبيقات في تحليل Biosimilarity

Therapeutic monoclonal antibodies (mAbs) are relevant to the treatment of different pathologies, including cancers. The development of biosimilar mAbs by ...

An Efficient and Simple Method to Establish NK and T Cell Lines from Patients with Chronic Active Epstein-Barr Virus Infection

طريقة فعالة وبسيطة وضع ناغورني كاراباخ وخطوط الخلايا T من المرضى المصابين بالعدوى المزمنة النشطة فيروس ابشتاين-بار

A number of methods have been described to establish NK/T cell lines from patients with lymphoma or lymphoproliferative syndrome. These methods employed ...

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

A Simple Flow Cytometry Based Assay to Determine In Vitro Antibody Dependent Enhancement of Dengue Virus Using Zika Virus Convalescent Serum

قياس تدفق بسيط على أساس التحليل تحديد في المختبر جسم تعزيز التابعة لفيروس حمى الضنك باستخدام مصل فيروس Zika النقاهة

Antibody dependent enhancement of infection has been shown to play a major role in Dengue viral pathogenesis. Traditional assays that measure the capacity ...

Assembly and Purification of Prototype Foamy Virus Intasomes

الجمعية وتنقية من النموذج إينتاسوميس فيروس مزبد

A defining feature and necessary step of the retrovirus life cycle is the integration of the viral genome into the host genome. All retroviruses encode an ...