Name: locked nucleic acid flow cytometry-fluorescence in situ hybridization (lna flow-fish): a method for bacterial small rna detection
Uploaded: 2012-01-10T13:00:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection at JoVE.com

وأيد هذا العمل من قبل مكتب البحوث البحرية عبر بحوث البحرية الامريكية الأموال الأساسية مختبر.

<ol>
	<li>Rufer, N., Dragowska, W., Thornbury, G., Roosnek, E., Lansdorp, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Telomere+length+dynamics+in+human+lymphocyte+subpopulations+measured+by+flow+cytometry.">Telomere length dynamics in human lymphocyte subpopulations measured by flow cytometry.</a> Nat. Biotechnol. 16, 743-747 (1998).</li><li>Lansdorp, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+telomere+length+of+human+chromosomes.">Heterogeneity in telomere length of human chromosomes.</a> Hum. Mol. Genet. 5, 685-691 (1996).</li><li>Pernthaler, A., Amann, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+Fluorescence+In+Situ+Hybridization+of+mRNA+and+rRNA+in+Environmental+Bacteria.">Simultaneous Fluorescence In Situ Hybridization of mRNA and rRNA in Environmental Bacteria.</a> Appl. Environ. Microbiol. 70, 5426-5433 (2004).</li><li>Jen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow-FISH+analysis+and+isolation+of+clostridial+strains+in+an+anaerobic+semi-solid+bio-hydrogen+producing+system+by+hydrogenase+gene+target.">Flow-FISH analysis and isolation of clostridial strains in an anaerobic semi-solid bio-hydrogen producing system by hydrogenase gene target.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 74, 1126-1134 (2007).</li><li>Robertson, K. L., Verhoeven, A. B., Thach, D., Chang, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+Viral+RNA+in+Infected+Cells+with+LNA+Flow-FISH.">Monitoring Viral RNA in Infected Cells with LNA Flow-FISH.</a> RNA. 16, 1679-1685 (2010).</li><li>Friedrich, U., Lenke, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Enumeration+of+Lactic+Acid+Bacteria+in+Mesophilic+Dairy+Starter+Cultures+by+Using+Multiplex+Quantitative+Real-Time+PCR+and+Flow+Cytometry-Fluorescence+In+Situ+Hybridization.">Improved Enumeration of Lactic Acid Bacteria in Mesophilic Dairy Starter Cultures by Using Multiplex Quantitative Real-Time PCR and Flow Cytometry-Fluorescence In Situ Hybridization.</a> Appl. Environ. Microbiol. 72, 4163-4171 (2006).</li><li>Thomsen, R., Nielsen, P. S., Jensen, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dramatically+improved+RNA+in+situ+hybridization+signals+using+LNA-modified+probes.">Dramatically improved RNA in situ hybridization signals using LNA-modified probes.</a> RNA. 11, 1745-1748 (2005).</li><li>Silahtaroglu, A. N., Tommerup, N., Vissing, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FISHing+with+locked+nucleic+acids+(LNA):+evaulation+of+different+LNA/DNA+mixmers.">FISHing with locked nucleic acids (LNA): evaulation of different LNA/DNA mixmers.</a> Mol. Cell. Probes. 17, 165-169 (2003).</li><li>Obika, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+2'-O,+4'-C-methyleneuridine+and+-cytidine.+Novel+bicyclic+nucleosides+having+a+fixed+C3'-endo+sugar+puckering.">Synthesis of 2'-O, 4'-C-methyleneuridine and -cytidine. Novel bicyclic nucleosides having a fixed C3'-endo sugar puckering.</a> Tetrahedron. Lett. 38, 8735-8738 (1997).</li><li>Koshkin, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LNA+(locked+nucleic+acids):+synthesis+of+the+adenine,+cytosine,+guanine,+5-methylcytosine,+thymine,+and+uracil+bicyclonucleoside+monomers+oligomerisation,+and+unprecedented+nucleic+acid+recognition.">LNA (locked nucleic acids): synthesis of the adenine, cytosine, guanine, 5-methylcytosine, thymine, and uracil bicyclonucleoside monomers oligomerisation, and unprecedented nucleic acid recognition.</a> Tetrahedron. 54, 3607-3630 (1998).</li><li>Kubota, K., Ohashi, A., Imachi, H., Harada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+in+situ+hybridization+efficiency+with+locked-nucleic-acid-incorporated+DNA+probes.">Improved in situ hybridization efficiency with locked-nucleic-acid-incorporated DNA probes.</a> Appl. Environ. Microbiol. 72, 5311-5317 (2006).</li><li>Robertson, K. L., Thach, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LNA+flow-FISH:+A+flow+cytometry-fluorescence+in+situ+hybridization+method+to+detect+messenger+RNA+using+locked+nucleic+acid+probes.">LNA flow-FISH: A flow cytometry-fluorescence in situ hybridization method to detect messenger RNA using locked nucleic acid probes.</a> Anal. Biochem. 390, 109-114 (2009).</li><li>Waters, L., Storz, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+RNAs+in+bacteria.">Regulatory RNAs in bacteria.</a> Cell. 136, 615-628 (2009).</li><li>Petersen, M., Wengel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=LNA:+a+versatile+tool+for+therapeutics+and+genomics.">LNA: a versatile tool for therapeutics and genomics.</a> Trends. Biotechnol. 21, 74-81 (2003).</li><li>Corput, M. P. C. v. d., Grosveld, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+in+Situ+Hybridization+Analysis+of+Transcript+Dynamics+in+Cells.">Fluorescence in Situ Hybridization Analysis of Transcript Dynamics in Cells.</a> Methods. 25, 111-118 (2001).</li><li>Silveira, A. C. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+non-coding+RNAs+in+environmental+vibrios.">Identification of non-coding RNAs in environmental vibrios.</a> Microbiology. 156, 2452-2458 (2010).</li></ol>

الكتاب ليس لديهم ما يكشف.

وقد استخدم تدفق الأسماك LNA الأسلوب المعروضة هنا للكشف عن التعبير عن الحمض الريبي النووي الذواب من سلبية الغرام البحرية بكتيريا الضمة campbellii التعبير الذي سبق أن أكد عبر التنميط القائم على التعبير ميكروأري وعكس رد فعل البلمرة النسخ 16. حتى الآن ، وقد استخدمنا هذا الأسلوب لمراقبة التعبير عن مجموعة متنوعة من RNAs (مثلا عبر الحمض الريبي النووي الذواب المشفرة ، التي تعدل الحمض الريبي النووي الذواب نشاط البروتين ، riboswitches ، ومرنا). على هذا النحو ، ونحن واثقون من أن هذه الطريقة قابلة للتكيف ، ويمكن استخدامها للكشف عن أي هدف أو الحمض الريبي النووي الذواب مرنا ويمكن تعديلها لاستخدامها في أي نوع من الأنواع البكتيرية أو نوع من الخلايا. إذا كان تعديل هذا البروتوكول هو ضروري لأنواع الخلايا الأخرى ، والمتغير الأهم للنظر في التلاعب هو الخطوة permeabilization. على سبيل المثال ، عند تعديل شروط permeabilization الموصوفة هنا ، يجب اختبار التغيرات في تركيزات بروتين الليزوزيم وكاف. وجدنا أن تضاعف أوثلاثة أضعاف كمية بروتين الليزوزيم وكاف أدى إلى تغييرات كبيرة في النتائج تدفق الأسماك LNA. علاوة على ذلك ، عند اختبار الظروف permeabilization إضافية ، ينبغي تحليل الخلايا للتكتل ، وفقدان الخلية ، ويمكن الحصول على أفضل إشارة إلى نسبة الخلفية مضان. ويمكن اختبار مدى التثاقل عن الخلية و / أو المجهري التدفق الخلوي. من جانب التدفق الخلوي ، كتل الخلايا موجودة في ذيول في الأمام مقابل الجانب مؤامرة نقطة مبعثر والأسلوب الصحيح permeabilization سيقلل هذا التأثير المخلفات. هذا الأسلوب هو أيضا قابل للكشف عن الحمض الريبي النووي الذواب متعددة دون تعديلات رئيسية في البروتوكول كما هو موضح إضافية يمكن أن تضاف تحقيقات LNA المسمى مع haptens أخرى مثل digoxigenin خلال الخطوة التهجين والكشف عن الأجسام المضادة ثم مع مكافحة digoxigenin والثانوية للأجسام المضادة المتقارن fluorophore. حاليا ، والقيد الوحيد التي واجهناها مع هذا الأسلوب هو عدم قدرتها على توليد ما يكفي من الإشارات السابقة ضعيفةالحمض الريبي النووي الذواب أنواع الضغط والجهود جارية لتحديد عتبة الكشف (في عدد النسخ المطلق لكل خلية). عموما ، فإن تدفق الأسماك LNA الأسلوب يتيح الفرصة لقياس الحمض الريبي النووي الذواب البكتيرية أو التعبير مرنا على مستوى خلية واحدة بطريقة إنتاجية عالية لتقديم رؤى حول وجود وفرة نسبية لأنواع سرنا والدرجة التي يختلف التعبير عنها في عدد السكان.

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم الكاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> 10X الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td> تطبيق النظم البيولوجية / Ambion </td><td> AM9625 </td><td></td></tr><tr><td> Nuclease خالية من المياه </td><td> تطبيق النظم البيولوجية / Ambion </td><td> AM9932 </td><td> (لا DEPC المعالجة) </td></tr><tr><td> 32 ٪ بارافورمالدهيد </td><td> الإلكترون المجهري العلوم </td><td> RT 15714 </td><td> الإيثانول مجانا </td></tr><tr><td> حامض الخليك </td><td> العضوية Acros </td><td> 327290010 </td><td></td></tr><tr><td> إثيل pyrocarbonate (DEPC) </td><td> سيغما الدريتش </td><td> D5758 </td><tد&gt; احتفظ المجفف </td></tr><tr><td> الليزوزيم </td><td> سيغما الدريتش </td><td> L2879 </td><td></td></tr><tr><td> بروتين كاف (20 ملغ / مل) </td><td> تطبيق النظم البيولوجية / Ambion </td><td> AM2546 </td><td></td></tr><tr><td> Formamide </td><td> تطبيق النظم البيولوجية / Ambion </td><td> AM9342 </td><td> منزوع الأيونات ، وتجميد قسامة </td></tr><tr><td> ديكستران ميغاواط سلفات&gt; 500000 </td><td> سيغما الدريتش </td><td> D8906 </td><td> قسامة حل 60 ٪ وتجميد </td></tr><tr><td> التركيز على حل دينهارت 50X </td><td> سيغما الدريتش </td><td> D2532 </td><td> قسامة وتجميد </td></tr><tr><td> سيترات الصوديوم العازلة 20X </td><td> تطبيق النظم البيولوجية / Ambion </td><td> AM9770 </td><td></td></tr><tr> &lt;TD الحيوانات المنوية سالمون&gt; الحمض النووي (المنفصمة) 10 ملغ / مل </td><td> تطبيق النظم البيولوجية / Ambion </td><td> AM9680 </td><td> قسامة وتجميد </td></tr><tr><td> الخميرة الحمض الريبي النووي النقال (10 ملغ / مل) </td><td> تقنيات الحياة / Invitrogen </td><td> 15401-011 </td><td> قسامة وتجميد </td></tr><tr><td> توين - 20 </td><td> سيغما الدريتش </td><td> P9416 </td><td></td></tr><tr><td> 5X في محلول التهجين حجب الموقع </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> MB - 1220 </td><td></td></tr><tr><td> DyLight 488 streptavidin </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> SA - 5488-1 </td><td></td></tr><tr><td> Biotinylated مكافحة streptavidin </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> BA - 0500 </td><td> قسامة وتجميد </td></tr></tbody></table>

locked nucleic acid flow cytometry-fluorescence in situ hybridization (lna flow-fish): a method for bacterial small rna detection

مضان التهجين في الموضع (FISH) هي تقنية قوية التي تستخدم لكشف وتوطين محددة تسلسل الحمض النووي في البيئة الخلوية. من أجل زيادة الإنتاجية ، يمكن الجمع بين سمك مع التدفق الخلوي (تدفق FISH) لتمكين الكشف عن تسلسل الحمض النووي المستهدف في الآلاف من الخلايا الفردية. نتيجة لذلك ، تدفق الأسماك يوفر ميزة واضحة على مدى lysate / الفرقة القائمة على الكشف عن الحمض النووي الأساليب لأن كل خلية يعامل بوصفه مراقبة مستقلة ، مما يسمح أقوى التحليلات الإحصائية والتباين. وقد دفعت هذه الصفات استخدام أساليب السمكية وتدفق الأسماك في عدد من التطبيقات المختلفة ، وكانت فائدة هذه الأساليب أثبتت بنجاح في تحديد هوية طول التيلومير ، 1،2 الخلوية والتعبير الجيني 3،4 ، ورصد تكاثر الفيروس في الخلايا المصابة 5 ، والبكتيرية تحليل المجتمع والتعداد6. تقليديا ، وقد تم الكشف عنها من خصوصية وسائل السمكية وتدفق الأسماك بواسطة المجسات قليل النوكليوتيد الحمض النووي. لكن في الآونة الأخيرة ، ازداد استبدال تحقيقات مع قليل النوكليوتيد النظير DNA الحمض النووي وتحقيقات السمكية وتدفق الأسماك كلا من حساسية وخصوصية كل تقنية نظرا لارتفاع درجات الحرارة في ذوبان (T م) من هذه الأحماض النووية لالنظير الطبيعي 7،8 . الحمض النووي مؤمن (LNA) تحقيقات هي نوع من التناظرية التي تحتوي على الحمض النووي النيوكليوتيدات LNA ارتفعت طوال تسلسل الحمض النووي الريبي أو 9،10. عندما يقترن مع تدفق الأسماك ، تحقيقات LNA سبق أظهرت التحقيقات أن يتفوق الحمض النووي التقليدية 7،11 واستخدمت بنجاح لكشف حقيقية النواة مرنا 12 و RNA فيروسي في الخلايا الثديية 5. هنا نوسع هذه القدرة ، ووصف تدفق الأسماك LNA الأسلوب الذي يسمح للكشف محددة من الحمض النووي الريبي في الخلية البكتيريةق (الشكل 1). على وجه التحديد ، ونحن مهتمون في الكشف الصغيرة غير الترميز التنظيمية الحمض النووي الريبي (الحمض الريبي النووي الذواب) والتي استقطبت اهتماما كبيرا في السنوات القليلة الماضية حيث تم العثور عليها لتكون بمثابة العناصر التنظيمية الرئيسية في العديد من العمليات الخلوية الحرجة 13. ومع ذلك ، هناك أدوات محدودة لدراسة sRNAs والتحديات للكشف عن الحمض الريبي النووي الذواب في الخلايا البكتيرية ويرجع ذلك جزئيا إلى الحجم الصغير نسبيا (عادة 5-30 النيوكليوتيدات في الطول) وفرة منخفضة من جزيئات الحمض الريبي النووي الذواب فضلا عن صعوبة في العمل العام مع أصغر الخلايا البيولوجية بدرجات الأغشية الخلوية. في هذه الطريقة ، ونحن تصف التثبيت وpermeabilzation الشروط التي تحافظ على بنية الخلايا البكتيرية والسماح للتغلغل تحقيقات LNA فضلا عن الخطوات التي تمكن من تضخيم إشارة الكشف محددة من الحمض الريبي النووي الذواب فرة منخفضة (الشكل 2).

Watch this Scientific Journal Video about Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection at JoVE.com

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization LNA flow-FISH: a Method for Bacterial Small RNA Detection

وصفت رواية عالية الإنتاجية الأسلوب الذي يتيح اكتشاف والكميات النسبية للRNA الصغيرة والتعبير مرنا من الخلايا البكتيرية واحد باستخدام مسابر مؤمن الحمض النووي وتدفق الخلوي ومضان<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين.

تأمين تدفق الأحماض النووية الخلوي ومضان في الموقع التهجين (LNA تدفق FISH) : طريقة لاكتشاف الحمض النووي الريبي البكتيرية الصغيرة

Fluorescence in situ hybridization (FISH) is a powerful technique that is used to detect and localize specific nucleic acid sequences in the cellular ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Locked Nucleic Acid Flow Cytometry-fluorescence in situ Hybridization (LNA flow-FISH): a Method for Bacterial Small RNA Detection

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

Combination of Adhesive-tape-based Sampling and Fluorescence in situ Hybridization for Rapid Detection of Salmonella on Fresh Produce

مزيج من الشريط اللاصق على أساس أخذ العينات والإسفار في الموقع تهجين للكشف السريع عن السالمونيلا على المنتجات الطازجة

This protocol describes a simple approach for adhesive-tape-based sampling of tomato and other fresh produce surfaces, followed by on-tape fluorescence in ...

Transfection and Mutagenesis of Target Genes in Mosquito Cells by Locked Nucleic Acid-modified Oligonucleotides

ترنسفكأيشن والطفرات في الجينات المستهدفة في الخلايا عن طريق البعوض مغلق [أليغنوكليوتيد] حمض تعديل الأحماض النووية

Plasmodium parasites, the causative agent of malaria, are transmitted through the bites of infected Anopheles mosquitoes resulting in over 250 million new ...

'Bioluminescent' Reporter Phage for the Detection of Category A Bacterial Pathogens

&#39;Bioluminescent&#39; بالعاثية مراسل للكشف عن مسببات الأمراض البكتيرية الفئة أ

Yersinia pestis and Bacillus anthracis are Category A bacterial pathogens that are the causative agents of the plague and anthrax, respectively 1. ...

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

Hybridization in situ of Salivary Glands, Ovaries, and Embryos of Vector Mosquitoes

تهجين<em&gt; في الموقع</em&gt; من الغدد اللعابية والمبيض والأجنة من البعوض الحامل للمرض

Mosquitoes are vectors for a diverse set of pathogens including arboviruses, protozoan parasites and nematodes.  Investigation of transcripts and gene ...

Fluorescent in situ Hybridization on Mitotic Chromosomes of Mosquitoes

Fluorescent in situ Hybridization on Mitotic Chromosomes of Mosquitoes

فلوري<em&gt; في الموقع</em&gt; التهجين على الكروموسومات الميتوزى من البعوض

Fluorescent in situ hybridization (FISH) is a technique routinely used by many laboratories to determine the chromosomal position of DNA and RNA probes. ...

Bacterial Artificial Chromosomes: A Functional Genomics Tool for the Study of Positive-strand RNA Viruses

بكتيريا الاصطناعية الكروموسومات: أداة علم الجينوم وظيفية لدراسة الفيروسات RNA إيجابي حبلا

Reverse genetics, an approach to rescue infectious virus entirely from a cloned cDNA, has revolutionized the field of positive-strand RNA viruses, whose ...

Rapid, Safe, and Simple Manual Bedside Nucleic Acid Extraction for the Detection of Virus in Whole Blood Samples

استخراج سريعة وآمنة وبسيطة دليل السرير الحمض النووي للكشف عن الفيروس في عينات الدم كله

The rapid diagnosis of an infection is essential for the outbreak management, risk containment, and patient care. We have previously shown a method for ...

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization (FISH) and Immunofluorescence (IF) of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells

Quantitative Fluorescence In Situ Hybridization FISH and Immunofluorescence IF of Specific Gene Products in KSHV-Infected Cells

الفلورة الكمية في الموقع التهجين (FISH) والفلورة المناعية (IF) من منتجات جينية محددة في الخلايا المصابة KSHV

Mechanistic insight arrives from careful study and quantification of specific RNAs and proteins. The relative locations of these biomolecules throughout ...

Modeling Hepatitis B Virus Infection in Non-Hepatic 293T-NE-3NRs Cells

النمذجة التهاب الكبد الوبائي باء العدوى بفيروس في الخلايا غير الكبدية 293T-NE-3NRs

HBV mainly infects human hepatocytes, but it has also been found to infect extrahepatic tissues such as kidney and testis. Nonetheless, cell-based HBV ...

A Non-Coding Small RNA MicC Contributes to Virulence in Outer Membrane Proteins in Salmonella Enteritidis

A Non-Coding Small RNA MicC Contributes to Virulence in Outer Membrane Proteins in Salmonella Enteritidis

يساهم ميكروفون الحمض النووي الريبي الصغير غير المشفر في الفوعة في بروتينات الغشاء الخارجي في السالمونيلا المعوية

A non-coding small RNA (sRNA) is a new factor to regulate gene expression at the post-transcriptional level. A kind of sRNA MicC, known in Escherichia ...