Name: determining optimal cytotoxic activity of human her2neu specific cd8 t cells by comparing the cr51 release assay to the xcelligence system
Uploaded: 2012-08-08T12:00:00
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CD8 T 세포에 직접 감염된 또는 악성 세포에게 4를 죽일 수있는, 적응 면역 반응에 중요하다. 항원에 특정한 CD8 T 세포 (예 : ELISPOT, 사량, 유동 세포 계측법)의 수를 측정하는 방법은 여러 가지가 있지만, 종종 이러한 세포가 3 기능적 세포 독성 여부를 알고 도움이됩니다. 세포 독성 기능을 평가하기위한 가장 인식 할 수있는 분석은 황금 표준 분석 4 간주됩니다 CRA입니다. CRA의 주요 한계는 방사능 (1) 요구 사항, 감도 (2) 부족, 기계론의 정보 (3) 부족, 세포의 대량 (4)를위한 요구 사항, 그리고 (5) 힘드는 세트까지입니다. 따라서, 지난 10 년 동안, 이러한 한계를 최소화하기 위해 새로운 전략을 채택에 관심이있어왔다. 새로운 접근 방식을 포함하는 측정하는 caspase의 릴리스 4, BLT 에스 테라 activity5, 및 CD107 6 표면 발현.에게 본 논문은 제안하는로슈 xCelligence 시스템에서 수행 임피던스 기반의 분석은 또한 CRA에 대한 대안으로 유용 할 수 있습니다. 임피던스 기반의 접근 방식을 적용 할 수있는 능력은 표면에 단단히 부착하지 않는 T 세포, 따라서 측정과 T 세포의 직접적인 간섭의 우려를 감소 임피던스에 많은 영향을 미칠 것으로 나타나지 않는 것을 관찰에 달려있다. 임피던스 분석 시스템 사용에 필요한 노동력은 훨씬 적은 주로 방사능의 사용에 대한 규제 문제의 제거로 인해 것으로 예상된다. 임피던스 기반 시스템의 유일한 주목할만한 단점은 50,000 달러에서 $ 60,000 지출이 xCelligence 단위의 구입이 필요합니다 것입니다. 그러나 xCelligence 장치는 방사선 카운터에 대한 필요성을 제거하고 T 세포 독성 8 이외에 약물 및 마이그레이션에 대한 세포 반응을 평가하는데 유용되고, 훨씬 더 다재다능하다. 그 관찰종양 세포의 임피던스 감소가 용량 의존적이며, 같은 간단한 보조 차 함수에 따라 합리적으로 가파른 기울기, 그림 2는 분석이 9 세포 독성 세포의 빈도를 추정하기 위해 희석 분석 (LDAs)를 제한하는 데 사용할 수 있다고 제안 . 임피던스 기반의 접근 방식을 가진 하나의 장점은 필요한 T 세포와 종양 세포의 수가 LDA는 잠재적으로 더 가능하고, CRA 미만이다. 예를 들어, CRA에 1시 40분 비율로 잘 당 1 × 10 5 종양 세포뿐만 당 4 X 10 6 총 T 세포를 필요로하는 도금입니다. 그러나, 임피던스 기반의 분석에 잘 당 1.5 × 10 4 종양 세포가 잘 당 6 × 10 5 총 T 세포를 소모하는 필요합니다. 따라서, 임피던스 기반의 분석은 85 % 이하 T 세포와 종양 세포를 사용합니다. 이 감소는 임피던스 기반의 시스템은 인간의 임상 실험에서 면역 감시에 적용 할 수 있다고 제안 여기서 t혈액의 그 볼륨은 제한 될 수 있습니다립니다. CRA가 하나의 시점에 제한되는 동안 또한, 임피던스 기반의 분석은 사용자가 최소한의 추가 노동과 세포와 같은 실험을 여러 용해 시점을 비교할 수 있도록, 지속적인 실시간 데이터를 수집합니다. 주파수 계산은 잠재적으로 총 10 항원에 특정한 CD8 T 세포에 기능적인 세포 독성 T 세포의 비율을 설정하는 등 사량 분석 등의 기능을 측정하지 않는 다른 전략과 결합 될 수있다. 임피던스 기반의 접근 방식의 가장 매력적인 기능 중 하나는 다른 대부분의 분석과는 달리, 세포 독성이 잠재적으로 쉽게 억제제 또는 항체의 사용과 세포의 상호 작용을 연구하고, 실시간으로 감시 할 수 있다는 것입니다. 또 다른 방법은 라벨에 저항 종양 세포에 적합 할 수 있다는 것입니다. 비 살해 종양 세포를 표시하고 유지되지 않기 때문에 마지막으로, 살균, 더 수확 T 세포 내성 세포 연구 possib입니다르. 두 시스템이 특정 T 세포의 질문에 답변 종양 살해 데이터를 제공하지만 요약하면, 임피던스 기반의 분석은 CRA보다 더 민감하고 더 유연한 플랫폼을 제공합니다.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td>Name of reagent</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ficoll-Paque Plus </td>
 <td>GE Healthcare </td>
 <td>17-1440-03 </td>
 <td>Used to isolate PBMCs from blood </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>RPMI 1640 </td>
 <td>Cellgro </td>
 <td>10-040-CV </td>
 <td>Cell culture media </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>FBS </td>
 <td>Denville Scientific </td>
 <td>FB5001-H </td>
 <td>Cell culture media </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Human IL-2 </td>
 <td>eBioscience </td>
 <td>14-8029-81 </td>
 <td>For stimulating growth of T cells </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Human Interferon gamma </td>
 <td>Cell Sciences </td>
 <td>CR2026 </td>
 <td>For stimulating MHC expression in tumor cells </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HER-2/neu p369-377 peptide </td>
 <td>Mayo Clinic peptide synthesis core </td>
 <td>amino acid sequence KIFGSLAFL </td>
 <td>Binds to HLA-A2 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Influenza p58-66 peptide </td>
 <td>Mayo Clinic peptide synthesis core </td>
 <td>amino acid sequence GILGFVFTL </td>
 <td>Binds to HLA-A2 </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Human CD3/CD28 Dynabeads </td>
 <td>Invitrogen </td>
 <td>111-61D </td>
 <td>For non-specific T cell activation and expansion </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Chromium-51 </td>
 <td>MP Biomedicals </td>
 <td>62015 </td>
 <td>CRA labeling reagent </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>E-plate </td>
 <td>Roche Applied Science </td>
 <td>05469830001 </td>
 <td>For xCelligence impedance unit </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Luma plate 96 </td>
 <td>Perkin Elmer </td>
 <td>6005630 </td>
 <td>For measuring radioactivity in the Top Count NXT. </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>xCelligence RTCA DP Station </td>
 <td>Roche Applied Science </td>
 <td>RTCA DP </td>
 <td>Impedance unit </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Top Count NXT </td>
 <td>Perkin Elmer </td>
 <td>C990601 </td>
 <td>Scintillation &amp; Luminescence Counter </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fas Ligand antibody</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>556372</td>
 <td>For blocking Fas-Fas ligand interactions</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HLA-A2 BB7.2 antibody</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>551230</td>
 <td>For blocking HLA class I</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Mouse IgG2b, &kappa;</td>
 <td>BD Biosciences</td>
 <td>555740</td>
 <td>Isotype control for HLA class I</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>SKBR3 tumor line</td>
 <td>ATCC</td>
 <td>HTB-30</td>
 <td>Adenocarcinoma</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>MCF7 tumor line</td>
 <td>ATCC</td>
 <td>HTB-22</td>
 <td>Adenocarcinoma</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>HCC1419 tumor line</td>
 <td>ATCC</td>
 <td>CRL-2326</td>
 <td>Primary ductal carcinoma</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>BT20 tumor line</td>
 <td>ATCC</td>
 <td>HTB-19</td>
 <td>Carcinoma</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

determining optimal cytotoxic activity of human her2neu specific cd8 t cells by comparing the cr51 release assay to the xcelligence system

세포 독성 CD8 T 세포가 감염되거나 악성 숙주 세포 1의 죽음을 유도 할 수있다 T 세포의 하위 그룹을 구성합니다. 이러한 세포는 특수한 수용체를 내가 2 분자가 HLA 클래스에 바인드 특정 항원 펩티드를 인식 할 수있는 T 세포 수용체 (TCR)라고 표현한다. 이러한 목표 세포의 죽음의 결과로 granzymes와 퍼포 같은 용해성 물질의 생산에 자신의 HLA 클래스 I 분자 결과를 통해 감염된 세포 나 종양 세포의 참여. 이 같은 ELISPOT 또는 흐름 세포 계측법으로 분석을 사용하여 항원 특이 CD8 T 세포의 주파수를 결정하는 데 유용하지만, 그것은 세포 독성 분석에게 3를 사용하여 CD8 T 세포 반응의 강도를 확인하기 위해 도움이됩니다. 세포 독성 기능을 평가하기위한 가장 인식 할 수있는 분석은 표준 분석 4 간주되는 크롬 출시 분석 (CRA)입니다. CRA는 감마 방사선에 세포의 노출, L 등 여러 가지 한계를 가지고재현성 및 세포의 큰 숫자에 대한 요구 사항의 ACK. 지난 10 년간 이러한 한계를 극복하기 위해 새로운 전략을 채택에 관심이있어왔다. 새로운 접근 방식을 포함하는 측정하는 caspase의 릴리스 4, BLT의 에스테르 가수 분해 효소 활동 5와 CD107 6 표면 발현.에게 로슈 xCelligence 시스템을 사용하여 임피던스 기반의 분석은, CRA에 대한 대안으로 가능성을 위해 본 논문에서 조사 하였다. 자기편 종양 세포가 전극 판에 바인딩 할 때 임피던스 또는 전류에 대한 반대가 발생합니다. 종양 세포 살해 후 분리 및 전기 임피던스는 xCelligence 시스템에 의해 측정 할 수있는 줄어 듭니다. 세포 매개 살인을 평가하기 위해 임피던스 기반의 접근 방식을 적용 할 수있는 능력은 T 세포는 대부분의 표면에 단단히 부착하지 않고 따라서 T 세포의 직접적인 간섭의 우려를 감소 임피던스에 많은 영향을 미칠 것으로 나타나지 않는 것을 관찰에 달려있다 와측정. 결과는 임피던스 기반의 분석은 표준 CRA에 상대적으로 증가 감도 항원 특이 세포 독성 CD8 T 세포의 수준의 변화를 감지 할 수 보여줍니다. 이러한 결과를 바탕으로, 임피던스 기반의 접근 방식은 CRA의 또는 세포 독성 CD8 T 세포의 기능을 측정하는 것을 목표로 다른 방법에 대한 좋은 대안이 될 수 있습니다.

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Determining Optimal Cytotoxic Activity of Human Her2neu Specific CD8 T cells by Comparing the Cr51 Release Assay to the xCELLigence System

크롬 출시 분석, 세포 독성 T 세포의 활동을 검출하기위한 일반적인 분석은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 본 문서에서, 항원 특이 CD8 T 세포와 인간의 유방암 종양 라인 SKBR3를 사용하여 임피던스 기반의 접근 방식은 세포의 살해를 감지하는 기능에 대해 조사 하였다.

xCELLigence 시스템으로 CR51 릴리스 분석을 비교하여 인간 Her2neu 특정한 CD8 T 세포의 최적 세포 독성 활동 결정

Cytotoxic CD8 T cells constitute a subgroup of T  cells that are capable of inducing the death of infected or malignant host  cells1. These cells express ...

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Peptide-major histocompatibility complex class I (pMHC-I) tetramers have been an invaluable tool to study CD8+ T-cell responses. Because these reagents ...

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제자리에서 MHC tetramer 얼룩 및 정량 분석 위치, 풍부, 및 조직에서 항 원 특정 CD8 T 세포의 표현 형을

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High-Efficiency Generation of Antigen-Specific Primary Mouse Cytotoxic T Cells for Functional Testing in an Autoimmune Diabetes Model

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Type 1 Diabetes (T1D) is characterized by islet-specific autoimmunity leading to beta cell destruction and absolute loss of insulin production. In the ...